滕龍，洪芳， 何建成

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上?！?01203; 2.浙江醫(yī)院，浙江，杭州　310013)

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研究報(bào)告

陰虛動(dòng)風(fēng)證帕金森病異動(dòng)癥大鼠大麻素CB1受體變化及復(fù)方地黃方的干預(yù)作用

滕龍1，2，洪芳1， 何建成1

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海201203; 2.浙江醫(yī)院，浙江，杭州310013)

【摘要】目的 探討陰虛動(dòng)風(fēng)證帕金森病(PD)異動(dòng)癥(LID)大鼠紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體的表達(dá)及復(fù)方地黃方的干預(yù)作用。方法采用6-羥基多巴胺(6-OHDA)偏側(cè)損毀黑質(zhì)制備帕金森病大鼠模型，進(jìn)一步腹腔注射左旋多巴+芐絲肼(50 mg/kg 左旋多巴和12.5 mg/kg芐絲肼)制備LID大鼠模型，并隨機(jī)分為LID組、復(fù)方地黃方組，另取正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠為對(duì)照，每組6只。分別在4周、6周進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)檢測后，處死大鼠并取紋狀體，應(yīng)用Western blot法測定各組大鼠紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體的表達(dá)情況。結(jié)果LID大鼠隨造模時(shí)間延長，AIM評(píng)分呈增加趨勢(shì)(P<0.05)，旋轉(zhuǎn)啟動(dòng)時(shí)間呈縮短趨勢(shì)(P>0.05)，旋轉(zhuǎn)持續(xù)時(shí)間呈增加趨勢(shì)(P<0.01)，劑峰旋轉(zhuǎn)圈數(shù)呈減少趨勢(shì)(P>0.05)，復(fù)方地黃方可改善上述變化。LID大鼠大麻素CB1受體表達(dá)增加，且隨造模時(shí)間延長呈現(xiàn)減少趨勢(shì)(P<0.01)，而復(fù)方地黃方干預(yù)后大麻素CB1受體的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)(P<0.01)。結(jié)論LID模型大鼠大麻素CB1受體的含量明顯升高，其變化能夠較好的反映陰虛動(dòng)風(fēng)證的嚴(yán)重程度，復(fù)方地黃方干預(yù)LID模型大鼠可能是通過激活紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體，抑制興奮性氨基酸(主要是谷氨酸)的釋放和誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)來減弱神經(jīng)元的興奮性，從而起到減輕L-dopa的興奮毒性的作用。

【關(guān)鍵詞】帕金森病；異動(dòng)癥；陰虛動(dòng)風(fēng)證；大麻素CB1受體；復(fù)方地黃方

帕金森病(Parkinson′s disease，PD)是好發(fā)于中老年人的中樞神經(jīng)退行性疾病，主要病理改變是中腦黑質(zhì)致密部多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元退行性變，臨床上以靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌張力增高和姿勢(shì)平衡障礙為典型癥候群。左旋多巴(L-dopa)是治療PD的“金標(biāo)準(zhǔn)”藥物，但長期使用可引起各種運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥，較為突出者如異動(dòng)癥(levodopa-induced dyskinesia，LID)，給PD患者的生活帶來了很大的困擾[1-2]。中醫(yī)學(xué)的研究成果和可靠的療效為PD患者的臨床治療帶來了一線曙光。眾多的研究證明，中醫(yī)藥不僅可以提高PD的臨床療效，同時(shí)可降低L-dopa誘發(fā)的LID等并發(fā)癥[3]。我們前期遵循循證醫(yī)學(xué)原則，從文獻(xiàn)整理入手，發(fā)現(xiàn)PD及LID在中醫(yī)學(xué)中以陰虛動(dòng)風(fēng)證為多[4]，復(fù)方地黃方便是以此為理論依據(jù)，并結(jié)合臨床體會(huì)，研制而成的具有滋腎補(bǔ)肝、平肝熄風(fēng)等作用治療PD及LID的中藥復(fù)方(已獲國家發(fā)明專利，ZL200810043734.2)，臨床應(yīng)用取得了滿意療效[5-6]。

我們課題組前期曾采用2點(diǎn)法偏側(cè)注射6-OHDA損毀黑質(zhì)，進(jìn)一步腹腔注射L-dopa+芐絲肼2周，成功制備了陰虛動(dòng)風(fēng)證帕金森病LID大鼠模型[7]，并在此基礎(chǔ)上開展了相關(guān)機(jī)理和物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。新近的研究發(fā)現(xiàn)，以大麻素系統(tǒng)為代表的非多巴胺代償機(jī)制在PD及其LID的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，大麻素CB1受體的研究得到了國內(nèi)外學(xué)者的極大關(guān)注[8]。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，研究大麻素CB1受體在PD異動(dòng)癥模型大鼠紋狀體內(nèi)的表達(dá)及復(fù)方地黃方的干預(yù)作用，籍以探尋中醫(yī)藥治療PD及LID機(jī)理及內(nèi)在基礎(chǔ)，為今后的臨床研究提供思路。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，4～6周齡，雄性，體重180～200 g，120只，來源于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心【SCXK(滬)2012-0002】。動(dòng)物飼養(yǎng)在上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，恒溫(23±2)℃，相對(duì)濕度60%～65%，動(dòng)物攝食、飲水及活動(dòng)自由。無菌手術(shù)在上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行【SYXK(滬)2014-0008】，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.1.2主要藥物

6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)：美國Sigma公司產(chǎn)品；阿撲嗎啡(apomorphine，APO)：美國Sigma公司產(chǎn)品；抗壞血酸：美國Sigma公司產(chǎn)品；美國Sigma公司產(chǎn)品；左旋多巴干粉：美國Sigma公司產(chǎn)品(批號(hào):192K1885)；芐絲肼：美國Sigma公司產(chǎn)品(批號(hào)：BCBB8323)。復(fù)方地黃方(由熟地黃、白芍、鉤藤、丹參、全蝎等組成)。按既定工藝煎煮成湯藥，濃度為5.18 g/mL，由上海雷允上藥材有限公司代加工。大鼠中藥的每日用量，按孫瑞元方法計(jì)算[9]。DB=DA×KB/KA, DB：標(biāo)準(zhǔn)體重大鼠每日用量，DA：標(biāo)準(zhǔn)體重成人每日用量，KB：大鼠劑量折算系數(shù)(7)，KA：成人劑量折算系數(shù)(388)。即：大鼠每日用量DB = DA×7/388。

1.1.3主要試劑

抗體(anti-cannabinoid receptor 1)：美國Abcam公司產(chǎn)品(貨號(hào)：ab23703)；β-actin(內(nèi)參)：美國CST公司產(chǎn)品(貨號(hào)：#4970)；山羊抗兔二抗：碧云天公司產(chǎn)品。

1.1.4主要儀器

大鼠腦立體定位儀：RWD-68003型，深圳瑞沃德生命科技有限公司；分析天平：Sartorius Anglytic，910324；Western blot電泳及轉(zhuǎn)膜裝置：美國Bio-Rad公司；超速離心機(jī)：LE80K型，Beckman公司產(chǎn)品。

1.2陰虛動(dòng)風(fēng)證LID大鼠模型制備

動(dòng)物術(shù)前按常規(guī)進(jìn)行行為測試，確認(rèn)無異常旋轉(zhuǎn)行為后，用3%戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉。然后將大鼠固定于腦立體定位儀上，頭部去毛，苯扎溴銨(商品名：新潔爾滅)常規(guī)消毒。無菌條件下，沿正中線切開大鼠顱頂皮膚，剝離骨膜，暴露前囟。以前囟為準(zhǔn)，根據(jù)包新民等[10]著大鼠腦立體定位圖譜，確定右側(cè)黑質(zhì)二坐標(biāo)：①前囟后5.2 mm，正中線右側(cè)1.0 mm，硬膜下9.0 mm。②前囟后5.2 mm，正中線右側(cè)2.5 mm，硬膜下8.5 mm。用顱骨鉆于手術(shù)要求部位小心鉆開顱骨，用5 μL微量進(jìn)樣器將6-OHDA(溶于含0.2%維生素C的生理鹽水中，即秤量藥品抗壞血酸0.001 g，溶于生理鹽水0.5 mL中)注入右側(cè)黑質(zhì)部(以1.0 mm/min速度緩慢進(jìn)針)，每孔3 μL，注射速度為1 μL/min，注射完畢后留針5 min，然后以1.0 mm/min速度緩慢退針。手術(shù)完成后，用醫(yī)用明膠海綿填塞顱骨孔，縫合切口皮膚，肌肉注射慶大霉素7 d，待動(dòng)物清醒后放回飼養(yǎng)籠中飼養(yǎng)。假手術(shù)組只注射0.2%維生素C的生理鹽水，正常對(duì)照組只捆綁動(dòng)物，不作任何處理。10 d后，以腹腔注射APO 0.5 mg/kg誘發(fā)大鼠向一側(cè)旋轉(zhuǎn)，記錄開始旋轉(zhuǎn)至30 min內(nèi)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，以旋轉(zhuǎn)圈數(shù)平均>每分鐘7次者為合格的PD模型[11]。

將成功PD模型大鼠給予腹腔注射L-dopa + 芐絲肼(50 mg/kg L-dopa和12.5 mg/kg芐絲肼，即L-dopa和芐絲肼溶于含0.05%的乙醇和0.1%的抗壞血酸的注射用水中，配成10 mg/mL)，每日兩次，連續(xù)2周。正常對(duì)照組、假手術(shù)組給予腹腔注射等量的含0.05%的乙醇和0.1%的抗壞血酸的注射用水，每日兩次，連續(xù)2周。2周后誘發(fā)動(dòng)物，具有典型AIM(AIM評(píng)分大于20分)表現(xiàn)，且APO誘導(dǎo)大鼠對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)增加者，為陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型[12]。

1.3分組及給藥

1.3.1分組方法

采用區(qū)層隨機(jī)法，將陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠隨機(jī)分為4組：陰虛動(dòng)風(fēng)證LID4周、6周模型組、復(fù)方地黃方4周、6周組，每組各6只。另取正常對(duì)照4周、6周組、假手術(shù)4周、6周組，每組各6只。

1.3.2給藥方法

陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型組大鼠在腹腔注射L-dopa + 芐絲肼(50 mg/kg L-dopa和12.5 mg/mL芐絲肼)的基礎(chǔ)上給予生理鹽水灌胃；復(fù)方地黃方組大鼠在腹腔注射L-dopa + 芐絲肼的基礎(chǔ)上給予中藥復(fù)方地黃方灌胃；正常對(duì)照組、假手術(shù)組給予腹腔注射等量的含0.05%的乙醇和0.1%的抗壞血酸的注射用水的基礎(chǔ)上給予生理鹽水灌胃。每次每鼠灌胃量為2 mL，每日1次，分別連續(xù)用藥4周、6周。

1.3.3樣本處理

(1)取大鼠紋狀體

每組大鼠進(jìn)行最后一次行為學(xué)檢測后，給3%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，迅速開顱取腦，在冰上小心分離紋狀體并稱重，分別置于事先準(zhǔn)備好的凍存管中，投入液氮罐中快速冷凍，后存放于-80℃冰箱中保存，備用。

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)步驟主要有提取總蛋白，配制分離膠和堆積膠，加樣，電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，加入抗體，顯影，分析。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1陰虛動(dòng)風(fēng)證LID大鼠神經(jīng)行為學(xué)觀察

LID大鼠模型的行為學(xué)觀察內(nèi)容主要有異常不自主動(dòng)作(abnormal involuntary movement，AIM)評(píng)分、旋轉(zhuǎn)啟動(dòng)時(shí)間、劑峰旋轉(zhuǎn)圈數(shù)、旋轉(zhuǎn)持續(xù)時(shí)間。

(1)AIM評(píng)分

大鼠于注射L-dopa 4周、6周后進(jìn)行AIM評(píng)分，每次評(píng)定結(jié)果由經(jīng)用藥后每間隔35 min的AIM總分?jǐn)?shù)組成，每次連續(xù)評(píng)定4組數(shù)據(jù)，持續(xù)140 min，4次評(píng)分之和為最終得分。

(2)L-dopa誘導(dǎo)后對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)行為的評(píng)定

大鼠在腹腔注射L-dopa一日量后進(jìn)行行為學(xué)觀察，記錄應(yīng)用L-dopa后旋轉(zhuǎn)啟動(dòng)時(shí)間、劑峰旋轉(zhuǎn)圈數(shù)以及旋轉(zhuǎn)持續(xù)時(shí)間。

1.4.2陰虛動(dòng)風(fēng)證LID大鼠紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體的變化

應(yīng)用Western blot法和測定各組大鼠紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體的表達(dá)情況。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

2結(jié) 果

2.1陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠神經(jīng)行為學(xué)的變化及復(fù)方地黃方的干預(yù)作用

陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠隨造模時(shí)間的延長，其AIM評(píng)分呈逐漸增加的趨勢(shì)，造模6周與4周時(shí)相比，差異有顯著性(P<0.05)；復(fù)方地黃方干預(yù)4周、6周后，與LID模型組相比較，差異有顯著性(P<0.001)。復(fù)方地黃方組隨著干預(yù)時(shí)間的延長，旋轉(zhuǎn)啟動(dòng)時(shí)間呈逐漸增加的趨勢(shì)，6周時(shí)與4周時(shí)相比較，差異有顯著性(P<0.05)；復(fù)方地黃方組干預(yù)6周與LID模型組6周相比較，差異有顯著性(P<0.01)。

陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠旋轉(zhuǎn)持續(xù)時(shí)間隨造模時(shí)間的延長，有增加的趨勢(shì)，造模6周與造模4周相比較，持續(xù)時(shí)間有增加，差異有顯著性(P<0.01)；復(fù)方地黃方組隨干預(yù)時(shí)間的延長，大鼠旋轉(zhuǎn)持續(xù)時(shí)間呈逐漸縮短趨勢(shì)，6周與4周比較，差異有顯著性(P<0.01)；復(fù)方地黃方干預(yù)4周、6周后與LID模型組相比較，差異有顯著性(P<0.01，或P<0.001)。見表1。

表1　復(fù)方地黃方干預(yù)后陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠神經(jīng)行為學(xué)的變化±s)

注：組間比較：與LID模型組比較：■P<0.01■■P<0.001；組內(nèi)比較：與4周組比較：◆P<0.05◆◆P<0.01。

Note. Intergroup comparison: vs. the model group:■P<0.01■■P<0.001. Intragroup comparison: vs. the 4 weeks group after treatment:◆P<0.05◆◆P<0.01.

2.2復(fù)方地黃方干預(yù)后陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體表達(dá)情況

陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型組大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體與內(nèi)參蛋白條帶密度比值較正常對(duì)照組、假手術(shù)組相比較，均明顯升高，差異有顯著性(P<0.001)；陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型6 周組較4 周組相比較，大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體與內(nèi)參蛋白條帶密度比值明顯降低，差異有顯著性(P<0.001)。復(fù)方地黃方4 周組與LID模型4 周組比較，差異有顯著性(P<0.01)；復(fù)方地黃方6 周組與LID模型6周組比較，差異有顯著性(P<0.001)。復(fù)方地黃方6 周組較4 周組相比較，大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體與內(nèi)參蛋白條帶密度比值升高趨勢(shì)更明顯，差異有顯著性(P<0.001)。見表2、圖1。

表2　復(fù)方地黃方干預(yù)后LID模型大鼠紋狀體內(nèi)CB1/GAPDH的比較

注：組間比較：與正常對(duì)照組比較：■P<0.001；與假手術(shù)組比較：▲P<0.001；與LID模型組比較：★P<0.01★★P<0.001。 組內(nèi)比較：與4周組比較：●P<0.001。

Note. Intergroup comparison: vs. the control group：■P<0.001; vs. the sham operasted group:▲P<0.001；vs. the model group:★P<0.01★★P<0.001. Intragroup comparison: vs. the 4 week group:●P<0.001.

注：1：正常對(duì)照4周組；2：正常對(duì)照6 周組；3：假手術(shù)4 周組；4：假手術(shù)6 周組；5：LID模型4周組；6：LID模型6 周組；7：復(fù)方地黃方4 周；8：復(fù)方地黃方6周組。圖1　Western blot法顯示各組大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體表達(dá)量的變化Note. 1: Control group at 4 weeks after treatment: 2: Control group at 6 weeks after treatment; 3: Sham operated group at 4 weeks after treatment; 4: Sham operated group at 6 weeks after treatment; 5: Model group at 4 weeks after treatment; 6: Model group at 6 weeks after treatment; 7: Compound formula rehmannia group at 4 weeks after treatment; 8: Compound formula rehmannia group at 6 weeks after treatment.Fig. 1　Western blot shows the changes of CB1 receptor expression in the rats of each group

3討論

LID模型大鼠出現(xiàn)不自主的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)是L-dopa產(chǎn)生神經(jīng)毒性的結(jié)果。我們的實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí)了L-dopa具有神經(jīng)毒性。最近的大量研究表明，PD及LID的發(fā)生與大麻素受體的改變關(guān)系密切[13]。目前已知的大麻素受體主要分為CB1和CB2兩種受體，兩者均為G蛋白偶聯(lián)受體[14]。CBl受體主要分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(主要在基底節(jié)區(qū)含量豐富)，并在GABA及谷氨酸神經(jīng)元突觸末梢表達(dá)。其配體為eCB，主要由突觸后神經(jīng)元按需合成，并且與經(jīng)典的突觸傳遞相反的方式作用于突觸前膜的CBl受體，反饋性的抑制突觸前的GABA及谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，對(duì)運(yùn)動(dòng)活動(dòng)進(jìn)行調(diào)控[15]。PD和LID模型大鼠其表現(xiàn)出的神經(jīng)行為學(xué)變化與紋狀體內(nèi)CB1受體的表達(dá)密切相關(guān)。當(dāng)CB1受體被激活后，會(huì)明顯改善帕金森病LID大鼠的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)，神經(jīng)行為學(xué)的嚴(yán)重程度與紋狀體內(nèi)CB1受體的表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)越嚴(yán)重，其紋狀體內(nèi)CB1受體的表達(dá)越低。反之，神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)越輕，其紋狀體內(nèi)CB1受體的表達(dá)越高。

有報(bào)道顯示，當(dāng)長期使用L-dopa來治療的PD動(dòng)物模型誘發(fā)LID后，紋狀體內(nèi)CB1受體信號(hào)傳導(dǎo)與PD相比較呈現(xiàn)減弱的趨勢(shì)[16-17]。已有研究顯示[18-19]，LID時(shí)大鼠腦內(nèi)CB1受體的表達(dá)發(fā)生了改變，主要表現(xiàn)損毀側(cè)紋狀體內(nèi)CB1受體的表達(dá)較PD相比較呈降低趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)研究亦發(fā)現(xiàn)陰虛動(dòng)風(fēng)證LID模型大鼠在紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體的表達(dá)呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì)，但隨著造模時(shí)間的延長，其紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體表達(dá)呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)。這與文獻(xiàn)研究[20]結(jié)果一致。L-dopa由于其半衰期較短，其波動(dòng)性也較大，這種非生理性的波動(dòng)性刺激，隨著治療時(shí)間的延長可能會(huì)引起中型多棘神經(jīng)元所介導(dǎo)信號(hào)通路的改變，并直接影響到直接和間接通路，導(dǎo)致紋狀體內(nèi)谷氨酸系統(tǒng)過度活化[21]，引起大麻素CB1受體代償性增多。

本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用治療PD及LID的有效方——復(fù)方地黃方進(jìn)行干預(yù)研究，復(fù)方地黃方中熟地黃補(bǔ)腎益精，滋陰養(yǎng)血，固本培元為君藥。白芍養(yǎng)肝血，滋肝陰，柔肝氣，為養(yǎng)血濡筋，緩急止顫之良藥；鉤藤熄風(fēng)定驚，化痰舒筋。白芍與鉤藤等同用，共為臣藥，可助君藥滋陰養(yǎng)血、熄風(fēng)平肝。丹參養(yǎng)血、活血、化瘀。石菖蒲能提高血腦屏障通透性，起到醒腦開竅、引藥入腦的作用。全方共奏滋補(bǔ)肝腎，平肝熄風(fēng)、化痰祛瘀、解毒散結(jié)之功效[22]。我們的研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方地黃方組大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體的表達(dá)較LID模型組呈升高趨勢(shì)，并且隨著復(fù)方地黃方干預(yù)時(shí)間的延長，大鼠紋狀體內(nèi)CB1受體升高趨勢(shì)更明顯。我們推測復(fù)方地黃方可能通過激活紋狀體內(nèi)大麻素CB1受體，使CB1受體的表達(dá)升高，進(jìn)而抑制興奮性氨基酸(主要是谷氨酸)的釋放，從而減輕了興奮性毒性的結(jié)果[23]。復(fù)方地黃方也可能是通過增加紋狀體內(nèi)大麻素CB1系統(tǒng)的信號(hào)傳導(dǎo)來調(diào)節(jié)直接通路和間接通路失衡的狀態(tài)，起到內(nèi)源性保護(hù)的作用。

總之，陰虛動(dòng)風(fēng)證LID時(shí)，模型大鼠處于L-dopa反復(fù)波動(dòng)性刺激DA受體的過程中，可導(dǎo)致皮質(zhì)紋狀體Glu受體磷酸化，Glu投射超敏，興奮性毒性增加，大麻素CB1受體的信號(hào)傳導(dǎo)相對(duì)減弱，共同促使運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥的發(fā)生，使得模型大鼠產(chǎn)生神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)。以滋陰熄風(fēng)為主的中藥復(fù)方地黃方對(duì)陰虛動(dòng)風(fēng)證帕金森病LID模型大鼠能夠明顯緩解其的動(dòng)風(fēng)特征，能明顯清除自由基和降低興奮性毒性，從而起到“減毒增效”的作用。

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Effects of compound rehmannia prescription on the cannabinoid receptor 1 in rats with wind syndrome due to deficiency of Yin in levodopa-induced dyskinesia (LID) in Parkinson’s disease

TENG Long1，2, HONG Fang1, HE Jian-cheng1

(1.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China;2.Zhejiang Hospital, Hanzhou 310013, China)

【Abstract】ObjectiveTo explore the effect of compound rehmannia prescription on cannabinoid receptor 1 in the rats with wind syndrome due to deficiency of Yin in levodopa-induced dyskinesia (LID) in Parkinson’s disease. Method A unilateral injection of 6-hydroxydopamine into the substantia nigra was performed to establish a Sprague-Dawley rat model of Parkinson’s disease. The models were intraperitoneally injected with 50 mg/kg levodopa and 12.5 mg/kg benserazide for two weeks to prepare LID models with Wind syndrome due to deficiency of Yin. The models were randomly divided into LID group and compound rehmannia prescription groups. Moreover, the normal group and sham-operated group were set up, 6 rats in each group. Neurological behavior was tested after treatment for four weeks and six weeks, respectively. Then the rats were sacrificed, the brain was removed immediately and the corpus striatum was dissected out. The expression of cannabinoid receptor 1 was examined by Western blotting. ResultWith the prolonged time of levodopa treatment, the LID rats with wind syndrome due to deficiency of yin showed an increasing tendency of AIM scores (P<0.05), shortening of the rotation start time (P>0.05), a tendency of increased duration of continuous rotation time (P<0.01) and a reducing tendency of peak rotation rate (P>0.05). Compound rehmannia prescription improved the above mentioned neurological behavior. The expression of cannabinoid receptor 1 showed an increasing tendency in the LID groups compared with that in the normal groups. But with the prolonging time of levodopa treatment, the expression of cannabinoid receptor 1 in the LID groups showed a decreasing tendency (P<0.01). The expression of cannabinoid receptor 1 had an increasing tendency after the treatment with compound rehmannia prescription (P<0.01). Conclusions The expression of cannabinoid receptor 1 has an increasing tendency in LID rats with wind syndrome due to deficiency of yin. The changes can well reflect the severity of wind syndrome due to deficiency of yin. We would hypothesize that the treatment with compound rehmannia prescription may activate the cannabinoid receptor 1 in LID rats, inhibiting the release of excitatory amino acids, decreasing the excitability of neurons and inducing cell cascade, and finally reduce the excitatory toxicity of levodopa.

【Key words】Parkinson’s Disease; Levodopa-induced dyskinesia；Wind syndrome due to deficiency of yin; Cannabinoid receptor 1; Compound rehmannia prescription

[收稿日期]2015-09-16

Corresponding author:HE Jian-cheng, E-mail： hjc8163@163.com

Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2016.01.006

【中圖分類號(hào)】Q95-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1005-4847(2016) 01-0031-06

[作者簡介]滕龍(1985-)，男，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事中醫(yī)證候研究。[通訊作者]何建成(1966-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，從事中醫(yī)四診、證候及心腦血管疾病的基礎(chǔ)與臨床研究。E-mail： hjc8163@163.com。

[基金項(xiàng)目]國家自然科學(xué)基金(30973722)；上海市科技支撐中藥新藥研究與開發(fā)項(xiàng)目(F50102)；上海市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科研基金(2012J009A)；上海市衛(wèi)生計(jì)生委科研基金(20144Y0151)；浙江省中醫(yī)藥優(yōu)秀青年人才基金項(xiàng)目(2016ZQ005)；上海中醫(yī)藥大學(xué)預(yù)算內(nèi)科研項(xiàng)目(2013JW25)。