銀 玲京山幸二田 迅李依韋冀照君趙 汝

（1內(nèi)蒙古民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼 028000；2岐阜大學(xué)流域圈科學(xué)研究中心，日本岐阜 501-1193）

內(nèi)蒙古地區(qū)菠菜猝倒病病原菌鑒定

銀 玲1京山幸二2田 迅1李依韋1冀照君1趙 汝1

（1內(nèi)蒙古民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼 028000；2岐阜大學(xué)流域圈科學(xué)研究中心，日本岐阜 501-1193）

在內(nèi)蒙古通遼市、包頭市和巴彥淖爾市郊區(qū)大棚蔬菜種植區(qū)采集菠菜幼苗猝倒病病株，采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對(duì)分離得到的病原物進(jìn)行鑒定，并采用平板法測(cè)定代表菌株的致病性。結(jié)果表明：從82份病樣中共獲得60株腐霉菌株，分別為德里腐霉（Pythium deliense Meurs）、瓜果腐霉〔Pythium aphanidermatum（Edson）Fitzp〕和終極腐霉（Pythium ultimum Trow var. ultimum）。這3種腐霉均為菠菜猝倒病致病菌，但是發(fā)病率有所不同，P. deliense的發(fā)病率最高，為85.7%；其次是P. aphanidermatum，發(fā)病率為42.9%；發(fā)病率最低的是P. ultimum var. ultimum，為28.6%。

內(nèi)蒙古；菠菜猝倒?。桓咕?；rDNA-ITS

菠菜（Spinacia oleracea L．）別名波斯草、赤根菜、角菜，是黎科菠菜屬中以綠葉為主要產(chǎn)品器官的一、二年生草本植物，原產(chǎn)于中亞，已有逾1 300年的栽培歷史（Yamaguchi，1983）。早在7世紀(jì)菠菜就傳入中國(guó)，目前在全國(guó)范圍內(nèi)被廣泛種植，年產(chǎn)量約2 500萬(wàn)t，占世界菠菜總產(chǎn)量的89.2%（錢偉 等，2014）。菠菜喜冷涼，生長(zhǎng)最適溫度15～20 ℃，在我國(guó)北方露地難以周年生產(chǎn)。隨著設(shè)施農(nóng)業(yè)的發(fā)展，菠菜種植不僅擺脫了自然氣候、季節(jié)的制約，還提高了單產(chǎn)，保證了全年均衡供應(yīng)。但設(shè)施栽培容易形成高濕的不利環(huán)境，加上長(zhǎng)期連作，加劇了土傳病害的發(fā)生為害，其中與猝倒病和根腐病有關(guān)的土傳病菌有：尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum Schl.）、瓜果腐霉〔Pythium aphanidermatum（Edson）Fitzp〕、立桔絲核菌（Rhizoctonia solani K ü hn）、螺殼狀絲囊霉（Aphanomyces cochlioides Drechs）等（Sumner et al.，1976；Naiki et al.，1986；Sumner，1991；Larsson & Gerhardson，1992），被這些病原菌侵染的菠菜，出苗前和出苗后均有病害發(fā)生。在國(guó)內(nèi)，已有關(guān)于粉霜霉菠菜?；汀睵eronospora farinosa（Fries）Fries f. sp. Spinaciae〕引起的菠菜霜霉?。ㄌ锢?等，1993）和菠菜匍柄霉（Stemphylium botryosum）引起的葉斑?。╖hou et al.，2011）的報(bào)道。但是關(guān)于腐霉屬菌引起菠菜病害的報(bào)道很少。本試驗(yàn)在內(nèi)蒙古東部地區(qū)的通遼市和西部地區(qū)的包頭市及巴彥淖爾市郊區(qū)采集菠菜幼苗猝倒病病株，對(duì)其病原物進(jìn)行分離鑒定及致病性測(cè)定，以期明確內(nèi)蒙古地區(qū)菠菜猝倒病病原菌的主要種類。

1 材料與方法

1.1 病樣采集

2012年在內(nèi)蒙古通遼市、包頭市和巴彥淖爾市郊區(qū)大棚蔬菜種植區(qū)，采用隨機(jī)采集的方式，把具有典型猝倒病癥狀的菠菜幼苗整株連根帶土挖出，裝入潔凈塑料袋，標(biāo)明編號(hào)、地點(diǎn)、采集時(shí)間，帶回實(shí)驗(yàn)室4 ℃保存。其中，包頭市選擇2個(gè)大棚，每個(gè)大棚采集18株病株，共計(jì)36株；巴彥淖爾市選擇2個(gè)大棚，每個(gè)大棚采集15株病株，共計(jì)30株；通遼市選擇1個(gè)大棚，采集16株病株。

1.2 病原菌分離

選擇發(fā)病較輕的菠菜幼苗，在根系發(fā)病部位剪取3塊5 mm左右的組織，先用自來(lái)水洗凈表面，再用無(wú)菌水沖洗3次，吸干表面水分。將樣品置于腐霉屬菌選擇性培養(yǎng)基NARM培養(yǎng)基（1 000 mL CMA培養(yǎng)基中加入制霉菌素10 mg、氨芐青霉素250 mg、利福平10 mg和咪康唑1 mg，蒸餾水1 000 mL，滅菌）平板上（Morita & Tojo，2007），25 ℃暗培養(yǎng)。2～3 d后將菌落邊緣菌絲轉(zhuǎn)移至新的NARM培養(yǎng)基上，進(jìn)行純化并編號(hào)保存。

1.3 形態(tài)學(xué)鑒定

1.3.1 鑒定依據(jù) 主要參考van der Plaats-Niterink（1981）和余永年（1998）的方法，根據(jù)孢子囊、雄器、藏卵器、卵孢子等的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定。

1.3.2 觀察方法 采用草葉誘導(dǎo)法（Waterhouse，1967）誘導(dǎo)產(chǎn)生孢子囊、游動(dòng)孢子、藏卵器、雄器和卵孢子等。將斜面試管保存的菌株轉(zhuǎn)移至CMA培養(yǎng)基平板上，菌絲即將長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿時(shí)用直徑6 mm的滅菌打孔器打取圓形菌苔1塊，置于新的CMA培養(yǎng)基平板上，將草坪草的葉片滅菌之后切成長(zhǎng)5 mm的小段，放在菌絲塊的周圍，25 ℃暗培養(yǎng)。草葉被侵染后，放入已經(jīng)滅菌的10 mL池塘水（V池塘水∶V蒸餾水=1∶2）中，25 ℃暗培養(yǎng)。誘導(dǎo)培養(yǎng)2～14 d內(nèi)觀察孢子囊、游動(dòng)孢子、藏卵器、雄器及卵孢子的形態(tài)特征，以顯微攝影作記錄。

1.4 分子生物學(xué)鑒定

1.4.1 基因組DNA提取 將斜面試管保存的菌株轉(zhuǎn)移至CMA培養(yǎng)基平板上，25 ℃暗培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后在菌落邊緣用直徑6 mm的滅菌打孔器打取5塊菌苔，置于50 mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基上，180 r·min-1、25 ℃振蕩培養(yǎng)5 d后，挑取適量的菌絲體，抽濾、晾干。采用由北京索萊寶科技有限公司提供的真菌基因組DNA提取試劑盒，按其說(shuō)明書進(jìn)行DNA提取。

1.4.2 rDNA-ITS序列分析 利用引物ITS1（5′-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3′）和ITS4（5′-CTTCCGTCAATTCCTTTAAG-3′）（White et al.，1990）對(duì)提取的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物由北京華大基因研究中心合成。PCR反應(yīng)體系（50 μL）：10×Taq反應(yīng)緩沖液5 μL，1.5 mmo1·L-1MgCl23 μL，0.2 mmo1·L-1dNTPs 1 μL，0.5 μmo1·L-1引物2 μL，200 ng模板DNA 2 μL，5 U Taq DNA聚合酶0.5 μL，加ddH2O補(bǔ)足50 μL。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min；94℃變性1 min，56 ℃退火1 min，72 ℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，最終4 ℃保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠電泳、EB染色，在紫外燈下拍照檢測(cè)，之后送中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所進(jìn)行雙向測(cè)序。將測(cè)序獲得的ITS序列用ChromasPro軟件拼接校正，通過(guò)BanKit提交序列至NCBI，獲得的序列登錄號(hào)見表1。

進(jìn)一步通過(guò)NCBI進(jìn)行BLAST同源性比較，從GenBank中下載作為外群的致病疫霉Phytophthora infestans（Mont.）de Bary和與自測(cè)菌株相似度98%以上的腐霉模式菌株及其ITS序列，使用Clustal X（1.81）軟件和MEGA 3.1軟件進(jìn)行分析，采用距離法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

表1 供試腐霉菌株及其序列登錄號(hào)

1.5 致病性測(cè)定

采用平板法進(jìn)行致病性測(cè)定。將提取基因組DNA獲得的含有大量菌絲的液體倒入直徑9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，與滅菌栽培土混勻，覆蓋塑料薄膜，25 ℃發(fā)酵1～3 d；用3%雙氧水浸泡菠菜種子3 min進(jìn)行表面消毒，然后用無(wú)菌水沖洗3次，25 ℃催芽；將發(fā)芽的種子播于腐霉發(fā)酵平皿培養(yǎng)土中，每皿7粒，置于人工氣候培養(yǎng)箱中25 ℃培養(yǎng)、觀察；以不接菌為對(duì)照，統(tǒng)計(jì)發(fā)病幼苗數(shù)，計(jì)算發(fā)病率。

發(fā)病率=猝倒死亡幼苗數(shù)/播種種子數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀

菠菜猝倒病在內(nèi)蒙古通遼市、包頭市和巴彥淖爾市郊區(qū)蔬菜大棚種植區(qū)均有發(fā)生。病害癥狀：幼苗出土后至3～4片真葉前，在小苗尚未萎蔫、葉片仍然保持綠色時(shí)就出現(xiàn)倒伏現(xiàn)象，最終萎蔫死亡。發(fā)病植株地表或地下的莖基部縊縮呈黃褐色，可向上、下擴(kuò)展使發(fā)病部位呈細(xì)線狀。該病發(fā)展迅速，初期僅有個(gè)別植株發(fā)病，幾天后便以此為中心向周圍蔓延，植株成片猝倒死亡。

2.2 病原菌分離結(jié)果

從82份菠菜猝倒病病樣中共分離出60株腐霉菌株，其中通遼市17株、包頭市26株、巴彥淖爾市17株。通遼市分離得到的17株菌株中，瓜果腐霉（P. aphanidermatum）9株，占分離總數(shù)的52.94%；終極腐霉（P. ultimum var. ultimum）8株，占47.06%；由此可見，通遼市郊區(qū)菠菜猝倒病病原菌以瓜果腐霉和終極腐霉為主。包頭市分離得到的26株菌株中，德里腐霉（P. deliense）15株，占分離總數(shù)的57.69%；終極腐霉（P. ultimum var. ultimum）11株，占42.31%；說(shuō)明德里腐霉和終極腐霉是包頭市郊區(qū)菠菜猝倒病的主要病原菌。分離自巴彥淖爾市的17株菌株全部都是德里腐霉（P. deliense）。

2.3 病原菌鑒定結(jié)果

2.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果 以Bts1-6b和Bts1-8a為代表的32株菌株的菌落在CMA培養(yǎng)基上呈放射狀，菌絲基內(nèi)生；孢子囊瓣?duì)?，常分枝或成簇頂生；藏卵器球形、近球形，直?4.4～30.1 μm，平均24.2 μm，多為頂生，大多數(shù)藏卵器柄明顯彎向雄器；雄器多為同絲生，短棍棒狀、彎棍棒狀或囊袋狀，每個(gè)藏卵器有1～2個(gè)雄器；卵孢子球形，直徑13.4～30.1 μm，平均26.6 μm，不滿器（圖1-a、b、c）。

以H11-1和H11-2為代表的9株菌株的菌落在CMA培養(yǎng)基上無(wú)特定的形態(tài)，有大量氣生菌絲；孢子囊為姜瓣?duì)罨虿灰?guī)則膨大菌絲；藏卵器多為頂生，球形，光滑，藏卵器柄較直，直徑21.6～39.5 μm，平均26.8 μm；每個(gè)藏卵器上附著1～2個(gè)雄器，雄器同絲生、異絲生或間生，多數(shù)有柄，屋頂狀、袋狀或玉米粒狀；卵孢子球形，直徑13.9～23.4 μm，平均20.0 μm，多數(shù)不滿器（圖1-d、e、f）。

以H1-2和Bts-20b為代表的19株菌株的菌落在CMA培養(yǎng)基上無(wú)特定的形態(tài)，氣生菌絲發(fā)達(dá)；菌絲膨大體近球形，頂生或多間生，直徑13.1～21.5 μm，平均18.1 μm；藏卵器球形，平滑，多頂生，直徑17.2～20.1 μm，平均18.4 μm；每個(gè)藏卵器有1～2個(gè)雄器，無(wú)柄，多緊貼藏卵器形成，彎曲、囊狀，多同絲生，偶有異絲生和下位生；卵孢子球形，平滑，不滿器，直徑13.7～17.7 μm，平均15.5 μm（圖1-g、h、i）。

以上3種腐霉菌株的形態(tài)特征分別與van der Plaats-Niterink（1981）描述的德里腐霉（P. deliense）、瓜果腐霉（P. aphanidermatum）以及終極腐霉（P. ultimum var. ultimum）一致。

2.3.2 rDNA-ITS序列分析結(jié)果 從經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察初步鑒定的3種腐霉菌中分別選擇2個(gè)代表菌株：Bts1-6b和Bts1-8a（P. deliense）、H11-1和H11-2（P. aphanidermatum）以及H1-2和Bts-20b（P. ultimum var. ultimum），分別提取基因組DNA，測(cè)定rDNA-ITS序列。獲得的序列長(zhǎng)度分別為774、773 bp，777、777 bp，826、825 bp。將所測(cè)ITS序列通過(guò)NCBI進(jìn)行BLAST比對(duì)，菌株Bts1-6b、Bts1-8a以及H11-1、H11-2與德里腐霉菌株CBS11484的相似度為99%（HQ643520.1）、與CBS31433（HQ643522.1）和CBS314.33（AY598674.2）的相似度為98%，與瓜果腐霉菌株CBS118.80（AY598622.2）、CBS28779（HQ643439.1）和CBS11880（HQ643438.1）的相似度為99%。依據(jù)該結(jié)果無(wú)法判斷這4株菌株是屬于德里腐霉還是瓜果腐霉。H1-2、Bts-20b與終極腐霉菌株CBS398.51（AY598657.2）、CBS39851（HQ643865.1）和CBS291.31（KJ639270.1）的相似度為99%，可以確定這2株菌株為終極腐霉。

聚類分析結(jié)果表明（圖2），菌株Bts1-6b和Bts1-8a與德里腐霉菌株HQ643520.1、HQ643522.1和AY598674.2的同源性較高，聚為一類；菌株H11-1和H11-2與瓜果腐霉菌株AY598622.2、HQ643439.1和HQ643438.1的親緣關(guān)系最密切，聚為一類；說(shuō)明菌株Bts1-6b和Bts1-8a是德里腐霉，而菌株H11-1和H11-2是瓜果腐霉。菌株H1-2和Bts-20b與終極腐霉菌株AY598657.2、HQ643865.1和KJ639270.1聚為一類，進(jìn)一步證實(shí)了這2株菌株為終極腐霉。

圖1 菠菜猝倒病病原菌形態(tài)特征a、b、c，以Bts1-6b和Bts1-8a為代表的菌株的孢子囊、藏卵器、雄器和卵孢子；d、e、f，以H11-1和H11-2為代表的菌株的孢子囊、藏卵器、雄器和卵孢子；g、h、i，以H1-2和Bts-20b為代表的菌株的菌絲膨大體、藏卵器、雄器和卵孢子；標(biāo)尺=10 μm。

2.4 致病性測(cè)定結(jié)果

從分離鑒定的3種腐霉菌中分別選擇1個(gè)代表菌株Bts1-6b（P. deliense）、H11-1（P. aphanidermatum）和H1-2（P. ultimum var. ultimum），采用平板法進(jìn)行致病性測(cè)定。結(jié)果表明（圖3），接種3個(gè)菌株的菠菜幼苗均出現(xiàn)子葉仍為綠色、萎蔫前即從莖基部倒伏的現(xiàn)象；拔出幼苗后發(fā)現(xiàn)莖基部明顯變?yōu)辄S褐色，縊縮成細(xì)線狀。而對(duì)照植株生長(zhǎng)正常。

從病株發(fā)病部位再次分離腐霉菌，觀察其孢子囊、藏卵器和雄器等，鑒定結(jié)果表明分離得到的菌株與原始接種菌株在形態(tài)特征上一致，表明所接種的3株菌株均為菠菜猝倒病的病原菌。

統(tǒng)計(jì)發(fā)病幼苗、計(jì)算發(fā)病率，結(jié)果顯示接種菌株Bts1-6b（P. deliense）的發(fā)病率最高，為85.7%；其次是菌株H11-1（P. aphanidermatum），發(fā)病率為42.9%；發(fā)病率最低是菌株H1-2（P. ultimum var.ultimum），為28.6%。

圖2 基于rDNA-ITS基因序列的腐霉菌聚類分析結(jié)果

圖3 腐霉菌對(duì)菠菜幼苗的致病性測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)采用腐霉屬菌選擇性培養(yǎng)基（NARM培養(yǎng)基）對(duì)菠菜猝倒病病樣進(jìn)行病原菌分離純化，以傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定為基礎(chǔ)，結(jié)合rDNA-ITS序列分析以及致病性測(cè)定，初步確定內(nèi)蒙古地區(qū)菠菜猝倒病病原菌為德里腐霉（P. deliense）、瓜果腐霉（P. aphanidermatum）和終極腐霉（P. ultimum var. ultimum）。這3種腐霉菌在內(nèi)蒙古通遼市、包頭市和巴彥淖爾市的出現(xiàn)頻率不同，可能是與不同地區(qū)氣溫、采樣時(shí)間等有關(guān)。

菠菜猝倒病在世界各地普遍發(fā)生，不同國(guó)家和地區(qū)菠菜猝倒病病原菌的分布情況有所不同。Bates和Stanghellini（1984）認(rèn)為，美國(guó)亞利桑那州的菠菜猝倒病病原菌為瓜果腐霉（P. aphanidermatum）和寬胸腐霉（P. dissotocum）。Naiki等（1986）報(bào)道日本岐阜縣的菠菜猝倒病病原菌為側(cè)雄腐霉（P. paroecandrum）和瓜果腐霉（P. aphanidermatum），其中優(yōu)勢(shì)種為P. paroecandrum；Akashi等（1986）報(bào)道日本北海道的菠菜猝倒病病原菌為Pythium sp. 、終極腐霉（P. ultimum）、瓜果腐霉（P. aphanidermatum）以及刺腐霉（P. spinosum），其中Pythium sp. 和P. ultimum為優(yōu)勢(shì)種群。瑞典報(bào)道林器腐霉（P. sylvaticum Huds）、終極腐霉（P. ultimum var. ultimum）和異宗結(jié)合腐霉（P. heterothallicum）為當(dāng)?shù)夭げ蒜У共〔≡↙arsson，1994）。

本試驗(yàn)中分離得到的瓜果腐霉（P. aphanidermatum）和終極腐霉（P. ultimum var. ultimum）廣泛分布于世界各地，為害多種植物，引起幼苗猝倒、成株根腐、莖腐和果腐等（van der Plaats-Niterink，1981）。德里腐霉（P. deliense）是最初由Meurs從印度尼西亞煙草上分離獲得的，并命名為Pythium deliense Meurs（Meurs，1934）。P. deliense可以引起蔞葉（Lodhi et al.，2004）、哈密瓜（Teymoori et al.，2012）和花生（Parkunan et al.，2014）等植物病害。本文是P. deliense作為菠菜猝倒病病原菌的首次報(bào)道。

錢偉，張合龍，劉偉，徐兆生．2014．菠菜遺傳育種研究進(jìn)展．中國(guó)蔬菜，（3）：5-13．

田黎，日孜旺古麗，陳舒云，馬丹江．1993．新疆菠菜霜霉病的侵染及防治．新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，（1）：24-25．

余永年．1998．中國(guó)真菌志（第六卷·霜霉目）．北京：科學(xué)技術(shù)出版社：54-138．

Akashi K，Maeda K，Abe H．1986．Studies on root diseases of spinach and soil scientific research on the occurrence Ⅱ．pathogens of damping-off occurring in fields around Sapporo city．Bulletin of Hokkaido Prefectural Agricultural Experiment Stations，54：1-8．

Bates M L，Stanghellini M E．1984．Root rot of hydroponically grown spinach caused by Pythium aphanidermarwn and P. dissorocum．Plant Disease，68：989-991．

Larsson M，Gerhardson B．1992．Disease progression and yield losses from root diseases caused by soilborne pathogens of spinach．Phytopathology，82：403-406．

Larsson M．1994．Prevalence and pathogenicity of spinach root pathogens of the genus Pythium in Sweden．Plant Pathology，43：261-268．

Lodhi A M，Shahzad S，Ghaffar A．2004．Pythium deliense，a new record from Pakistan．Pakistan Journal of Botany，36（3）：673-676．

Meurs A．1934．Parasitic stemburn of deli tobacco．Phytopathology，7： 169-185．

Morita Y，Tojo M．2007．Modifications of PARP medium using fluazinam，miconazole and nystatin for detection of Pythium spp. in soil．Plant Disease，91：1591-1599．

Naiki T，Yasuhiro G，Kageyama K．1986．Pythium species causing damping-off of spinach seedlings under plastic-house cropping．Annals of the Phytopathological Society of Japan，52：772-778．

Parkunan V，Brenneman T P，Ji P．2014．First report of Pythium deliense associated with peanut pod rot in Georgia．Plant Disease，98：1269．

Sumner D R，Kays S J，Johnson A W．1976．Etiology and control of root diseases of spinach．Phytopathology，66：1267-1273．

Sumner D R．1991．Spinach（Spinacea oleracea L．）：common names for plant diseases．Plant Disease，75：225-230．

Teymoori S，Shahri M H，Rahnama K，Afzali H．2012．Identification and pathogenicity of Pythium species on cantaloupe in Khorasan Razavi province of Iran．Journal of Crop Protection，1（3）：239-247．

van der Plaats-Niterink A J．1981．Monograph of the genus Pythium．Studies in Mycology，21：1-242．

Waterhouse G M．1967．Key to Pythium pringsheim．Mycological Papers，109：1-15．

White T J，Bruns T，Lee S，Taylor J．1990．Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics//Innis M A，Gelfand D H，Sninsky J J，White T J，eds．PCR protocol：a guide of methods and application．San Diego：Academic Press：315-322．

Yamaguchi M．1983．World vegetables：principles，production，and nutritive values．Westport：AVI Publishing：1-415．

Zhou Y F，Shi Y X，Xie X W，Guo Y L，Li B J．2011．Leaf spot of spinach caused by Stemphylium spinaciae sp. nov．Mycosystema，30（3）：379-383．

Identif i cation of Spinach Damping-off Pathogens in Inner Mongolia Region

YIN Ling1，Koji Kageyama2，TIAN Xun1，LI Yi-wei1，JI Zhao-jun1，ZHAO Ru1
（1College of Life Science，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，Inner Mongolia，China；2River Basin Research Center，Gifu University，Gifu 501-1193，Japan）

The samples of damping-off spinach seedlings were collected from the greenhouses in Tongliao，Baotou and Bayannur cities of Inner Mongolia．Pathogens were identified by morphological and molecular analysis，and pathogenicity tests of representative isolate of each species was carried out by seedlings infestation method．The result indicated that a total of 60 Pythium isolates were obtained from 82 plant samples．These isolates were identified as P. deliense，P. aphanidermatum and P. ultimum var. ultimum．Pathogenicity tests have proved that the Pythium species are pathogenic，causing damping-off，but with different disease severity．Among them P. deliense were the most pathogenic（infection rate 85.7%），the next was P. aphanidermatum （infection rate 42.9%），and the lowest was P. ultimum var. ultimum（infection rate 28.6%）．

Inner Mongolia；Spinach damping-off；Pythium；rDNA-ITS

銀玲，女，博士，副教授，專業(yè)方向：植物病原菌物分子生物學(xué)，E-mail：ginrei@163.com

2016-06-07；接受日期：2016-07-24

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31160353，31360574），通遼市與內(nèi)蒙古民族大學(xué)科技合作項(xiàng)目（SXYB2012063）