楊鳳軒+欽忠+周建威

摘要： 貴州短翅豆芫菁是貴州地區(qū)特有的藥用昆蟲(chóng)，體內(nèi)含有斑蝥素，但成蟲(chóng)體內(nèi)不同部位斑蝥素含量不同。采取索氏提取法提取短翅豆芫菁不同部位的斑蝥素，用氣相色譜儀定量測(cè)定。結(jié)果表明：（1）成蟲(chóng)不同部位所需提取時(shí)間不同：頭部、四肢、翅膀需要12 h提取，胸部需要20 h提取，腹部需要40 h進(jìn)行提取。（2）成蟲(chóng)的腹部斑蝥素含量最多，其次是胸部，再次之為頭部、四肢和翅膀。（3）自然死亡的成蟲(chóng)體內(nèi)總斑蝥素的百分含量比活體成蟲(chóng)體內(nèi)的高。

關(guān)鍵詞： 短翅豆芫菁；斑蝥素；含量；不同部位；提取時(shí)間

中圖分類(lèi)號(hào)： R282.74 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2016）03-0310-02

貴州短翅豆芫菁[1-2]是貴州地區(qū)獨(dú)有一種斑蝥類(lèi)藥用昆蟲(chóng)[3-4]，也是中國(guó)特有的19種斑蝥類(lèi)昆蟲(chóng)之一。貴州短翅豆芫菁體內(nèi)所含斑蝥素[5]，是芫菁科昆蟲(chóng)特有的一種單萜類(lèi)防御攻擊物質(zhì)，治療肝癌，療效顯著，從而引起醫(yī)藥界的密切關(guān)注。斑蝥素的化學(xué)立體構(gòu)型屬于外型，1，2-順-二甲基-3，6-氧橋六氫化鄰苯二甲酸酐，是白色的片狀結(jié)晶物質(zhì)，是斑蝥酸的內(nèi)酐。近年來(lái)，對(duì)斑蝥素的研究主要集中在生物合成[6-7]、功能、毒性[8]、生理、抗癌機(jī)制[9]、藥理學(xué)[10]和應(yīng)用[11]，而對(duì)斑蝥素在成蟲(chóng)蟲(chóng)體不同部位的分布研究較少。本研究通過(guò)對(duì)貴州短翅豆芫菁成蟲(chóng)不同部位斑蝥素含量的測(cè)定[12-14]，確定斑蝥素在短翅豆芫菁體內(nèi)的分布情況，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)短翅豆芫菁提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 測(cè)定儀器與試劑

（1）日本島津GC-14C氣相色譜儀。色譜條件：色譜柱是OV-17填充柱[苯基（50%）甲基硅氧烷，最高使用溫度340 ℃，擔(dān)體80～100目]；氫氣壓力60 kPa；空氣壓力40 kPa；儀器靈敏度為1；載氣為高純氮?dú)?；檢測(cè)器（FID）溫度為230 ℃；色譜柱溫度為165 ℃；進(jìn)樣口溫度為230 ℃；進(jìn)樣量 2 μL。（2）質(zhì)譜儀為島津GC-MS2010。1701柱，進(jìn)樣口溫度250 ℃，離子源溫度250 ℃，進(jìn)樣量0.5 μL，氮?dú)饬魉?0 mL/min，分流比20 ∶ 1。（3）核磁共振儀INVOA-400。共振頻率：（OBSERVE）H-1，399.9 MHz；溶劑：CDCl3（氘代三氯甲烷 ）。測(cè)試條件：弛豫時(shí)間5.0 s，脈沖角45.0度，采樣時(shí)間5.122 s，譜寬3 679.9 Hz，累加次數(shù)32次。（4）分析天平（上海精科分析儀器廠）。（5）分析純?nèi)燃淄?，分析純丙酮，分析純鹽酸；氘代三氯甲烷，氮?dú)狻＃?）斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)品，由北京中國(guó)生物制品檢定所提供。（7）短翅豆芫菁成蟲(chóng)采自貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū)及惠水地區(qū)，采后在貴州師范大學(xué)自然科學(xué)應(yīng)用研究所內(nèi)飼養(yǎng)。

1.2 短翅豆芫菁來(lái)源與鑒定

成蟲(chóng)采自貴州省貴陽(yáng)、惠水等地區(qū)，經(jīng)貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院昆蟲(chóng)學(xué)專(zhuān)家陳漢彬教授鑒定，鑒別結(jié)果為短翅豆芫菁，隸屬鞘翅目芫菁科。

1.3 斑蝥素的定性鑒定

純品制備：取自然風(fēng)干的短翅豆芫菁成蟲(chóng)用丙酮、三氯甲烷 （體積比為1 ∶ 10）及少量濃鹽酸的混合溶液（pH值在 0.5～1.0）于索氏提取器上沸騰回流12 h，濾去殘?jiān)?，將溶液濃縮近干，用石油醚和無(wú)水乙醇洗滌重結(jié)晶法制得白色片狀結(jié)晶物質(zhì)。用質(zhì)譜及核磁共振譜儀進(jìn)行定性分析。

1.4 成蟲(chóng)體內(nèi)不同部位斑蝥素的提取方法

取200只短翅豆芫菁活體，按頭、胸、腹、四肢、翅膀等不同身體部位用100 mL丙酮、三氯甲烷及少量濃鹽酸的混合溶液（pH值在0.5～1.0）于索氏提取器上沸騰回流提取。過(guò)濾，洗滌，將濾液定容至100 mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 斑蝥素的定性分析

2.1.1 質(zhì)譜 用離子源直接進(jìn)樣分析斑蝥素，質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)如下：128（100），110（10. 42），96（67.13），70（38.89）（圖1），與譜庫(kù)中斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)圖譜相符。

2.1.2 核磁共振譜（H1NMR） 核磁共振圖譜是：1 237（s，6H，CH3×2）；4 717（m，2H，CHOHC）；1 730～1 811（d，4H，CH2×2），與譜庫(kù)中斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)圖譜相符（圖2、圖3）[15]。由提取物的質(zhì)譜及核磁共振譜可知，此提取物就是斑蝥素，即短翅豆芫菁體內(nèi)亦可分泌有效成分斑蝥素。

2.2 氣相色譜分析

由斑蝥素提取物的氣相色譜譜圖可知，保留時(shí)間tR=10.015 min，與斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜譜圖上的保留時(shí)間 tR=10.019 min相符（圖4、圖5）。

2.3 成蟲(chóng)體內(nèi)不同部位提取時(shí)間比較

由表1、圖6知，對(duì)頭部、四肢、翅膀的提取，12 h后斑蝥素的含量已經(jīng)趨于恒定，無(wú)需延長(zhǎng)提取時(shí)間；胸部的提取需要20 h，腹部的提取需要40 h。以下提取試驗(yàn)均按照頭部、四肢、翅膀12 h提取，胸部20 h提取，腹部40 h提取。

2.4 成蟲(chóng)體內(nèi)不同部位斑蝥素含量的比較

2.4.1 活體成蟲(chóng)各部位斑蝥素含量的比較 由表2得出，活體成蟲(chóng)中腹部斑蝥素的含量最高，其次是胸部，最少的是翅膀。提取得到短翅豆芫菁體內(nèi)斑蝥素的總質(zhì)量為 279 975 μg，占蟲(chóng)體質(zhì)量為1.15%。

2.4.2 自然死亡的成蟲(chóng)各部位斑蝥素含量的比較 由表3得出，自然死亡的成蟲(chóng)中腹部斑蝥素的含量最高，其次是胸部，最少的是翅膀。提取得到短翅豆芫菁體內(nèi)斑蝥素的總質(zhì)量為179 446 μg，占蟲(chóng)體質(zhì)量為2.70%。

3 結(jié)論

（1）貴州短翅豆芫菁體內(nèi)含有斑蝥素。中國(guó)藥典以南方大斑蝥（大斑蝥）Mylabris phalerata Pall和黃黑小斑蝥（小斑蝥）Mylabris cichorii 入藥。隨著人們對(duì)斑蝥素需求的增長(zhǎng)，對(duì)

上述2種芫菁昆蟲(chóng)野生資源的過(guò)量采集，將導(dǎo)致其種群數(shù)量急劇減少，生態(tài)平衡遭到破壞。從貴州短翅豆芫菁體內(nèi)提取斑蝥素，可以緩解藥用斑蝥素緊張的市場(chǎng)需求，造福人類(lèi)健康。（2）提取過(guò)程中，不同的部位所需提取時(shí)間不同：頭部、四肢、翅膀需要12 h提取，胸部需要20 h提取，腹部需要40 h進(jìn)行提取。短翅豆芫菁的腹部斑蝥素含量最多，其次是胸部，再次之為頭部、四肢和翅膀。（3）試驗(yàn)室喂養(yǎng)過(guò)程中死去的蟲(chóng)子身體各部位總斑蝥素含量（2.70%）比活體身體各部位總斑蝥素含量（1.15%）高，主要是因?yàn)樘崛≈跋x(chóng)體已經(jīng)風(fēng)干。

致謝：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院昆蟲(chóng)學(xué)專(zhuān)家陳漢彬教授進(jìn)行了昆蟲(chóng)種類(lèi)鑒定，特致謝忱。

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