徐凌志，尤麗新，趙瀏

（長春科技學(xué)院，吉林長春130600）

發(fā)酵人參中人參皂苷Re含量變化及降糖作用研究

徐凌志，尤麗新，趙瀏

（長春科技學(xué)院，吉林長春130600）

為研究人參皂苷Re在酵母菌發(fā)酵后含量上的變化，取人參水提取液及不同時(shí)間后經(jīng)酵母菌發(fā)酵的人參提取液，比較其中的人參皂苷Re含量變化。結(jié)果顯示，在酵母菌發(fā)酵前后，其人參皂苷Re的含量隨發(fā)酵時(shí)間的增加而減少；發(fā)酵人參同樣能夠降低四氧嘧啶所致的小鼠高血糖，但是和生曬參比降糖作用有所減弱。

發(fā)酵人參；人參皂苷Re；降糖

發(fā)酵人參是用微生物發(fā)酵而得的制品，發(fā)酵過程中產(chǎn)生皂苷的轉(zhuǎn)化[1]。其中，人參皂苷Re是降糖的主要有效成分之一[2]?；诖耍匀藚⒃碥誖e為指標(biāo)，研究發(fā)酵后的降糖作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用人參（三年生）購自吉林省撫松縣，經(jīng)長春科技學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院劉芳芳老師鑒定為五加科植物人參（Panax ginsengA.Mey.）的干燥根及根莖。試驗(yàn)所用酵母菌為市售的安琪高效干酵母。人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品均購自中國食品藥品檢定研究院，試驗(yàn)所用色譜儀為日立LC2000型HPLC，所用試劑為色譜純。

降糖功能測(cè)試試驗(yàn)材料:健康KM小鼠70只，6～8周齡，雌雄各半，由吉林大學(xué)提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)7d。血糖儀及血糖試紙，羅氏卓越精采型，羅氏醫(yī)療器械有限公司；四氧嘧啶，Sigma公司；格列本脲片，天津藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司；人參同前。

1.2 降糖功能測(cè)試試驗(yàn)方法

隨機(jī)取8只作為空白對(duì)照，即正常組，其余小鼠禁食18h后給予藥四氧嘧啶200mg/kg（ip.），7d后測(cè)血糖將血糖高于11mmol/L視為造模成功。模型小鼠隨機(jī)分為5組（每組8只），發(fā)酵人參1組給予發(fā)酵10h人參提取液0.5g/kg灌胃；發(fā)酵人參2組給予發(fā)酵人參提取液2按0.5g/kg給藥ig；生曬參組，生曬參提取物灌胃；對(duì)照組，格列本脲按0.002g/kg；模型組，蒸餾水灌胃0.5mL/d，每天上午給藥一次，連續(xù)給藥14d。14d晚禁食，第15天剪尾取血，測(cè)空腹12h血糖。

1.3 酵母菌發(fā)酵人參中皂苷Re含量的測(cè)定

1.3.1 人參酵母菌發(fā)酵液樣品的制備

將三年生人參干品初步粉碎后，用天平取100g。加入燒杯中，加熱煮沸2次，并合并濾液。經(jīng)過濾后，得人參水煎液200mL。并將人參水煎液分為A、B、C、D 4份，每份50mL人參水煎液。其中，A組作為對(duì)照組，B組加入酵母菌1g、蔗糖10g于42℃發(fā)酵12h，C組加入等量酵母菌和糖于同溫度下發(fā)酵24h，D組作為空白組，保存。將各組試液放入分液漏斗中，每組加入30mL氯仿脫脂，然后置水層于分液漏斗中，加入50mL正丁醇萃取2次，合并正丁醇層蒸干，以容量瓶定容于50mL甲醇中。

1.3.2 高效液相條件的選擇

色譜柱：Sino Chrom ODS-BP 5μL 150mm。試驗(yàn)采取《中國人民共和國藥典》中的方法，使用梯度洗脫；梯度洗脫條件見表1，液相條件為檢測(cè)波長203nm，柱溫為室溫，流速1mL/min，進(jìn)樣量20μL。

表1 梯度洗脫條件

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

稱取人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（Rg1、Re、Ro、Rf 、Rb1、Rc、Rb2和Rd）各7.5mg，甲醇定容至10mL的容量瓶中，配制成各皂苷濃度為0.75mg/mL的混合對(duì)照品，再分別稀釋配成0.375 000、0.187 500、0.093 750、0.046 875mg/mL，共5個(gè)不同濃度對(duì)照品，分別吸取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定人參皂苷Re的峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，混合標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖如圖2所示?；貧w方程為Y=5E+6X-141 319，R2=0.999，在線性范圍。

1.4 樣品測(cè)定

取A、B、C 3個(gè)樣品各20μL分別進(jìn)入液相色譜儀，其液相色譜測(cè)定要求與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備時(shí)相同。測(cè)定各自Re峰面積，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定各組中人參皂苷Re的含量。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)品中人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖

2 結(jié)果與分析

2.1 人參發(fā)酵人參皂苷含量變化

A組人參皂苷提取液，液相色譜測(cè)定圖譜如圖3所示。B組人參皂苷提取液，發(fā)酵12h后，液相色譜測(cè)定圖譜如圖4所示。C組人參皂苷提取液，發(fā)酵24h后，液相色譜測(cè)定圖譜如圖5所示。A、B、C組樣品中人參皂苷Re含量見表2。

圖3 人參提取液HPLC圖

圖4 人參皂苷發(fā)酵12h HPLC圖

圖5 人參皂苷發(fā)酵24h HPLC圖

表2 樣品中人參皂苷Re含量

2.2 人參發(fā)酵人參皂苷組成變化

對(duì)A、B、C 3組的結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，各人參皂苷在液相色譜圖中，峰面積隨著發(fā)酵時(shí)間的增加而不斷減小。未經(jīng)酵母菌作用時(shí)，提取液中人參皂苷Re濃度為0.146 046 5mg/mL；發(fā)酵12h后降低至0.101 9mg/mL，至24h后Re濃度降低為0.076 8mg/mL，說明酵母菌在發(fā)酵過程中對(duì)人參皂苷具有轉(zhuǎn)化作用，這不僅體現(xiàn)在人參皂苷Re的含量上，也體現(xiàn)在人參中含有的其他皂苷。

2.3 酵母菌發(fā)酵人參的降糖功能測(cè)試

試驗(yàn)各組藥物對(duì)小鼠空腹血糖值的影響見表3。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用（±S）表示，采用t檢驗(yàn)組間比較。

在試驗(yàn)中，所有給藥組與模型組比較，小鼠血糖均降低，有非常顯著性差異（P＜0.01），無論是12h發(fā)酵人參組還是24h發(fā)酵人參組，在該試驗(yàn)所用劑量條件下與生曬參組和格列本脲組比較，4組和5組小鼠血糖值均無顯著性差異，說明發(fā)酵人參具有一定的降血糖作用；但是生曬參組比較，差異不顯著，甚至降糖功能有下降趨勢(shì)，這可能和人參皂苷轉(zhuǎn)化降低有關(guān)。

表3 試驗(yàn)各組藥物對(duì)小鼠空腹血糖值的影響（±SE）

表3 試驗(yàn)各組藥物對(duì)小鼠空腹血糖值的影響（±SE）

注：“**”表示P＜0.01。

組別 藥物 樣本個(gè)數(shù) 給藥劑量5g/（kg·d） 血糖值1 空白組 8 - 6.78±1.4 2 模型組 8 - 27.28±4.7 3 生曬參組 8 0.50 22.36±3.8** 4 人參發(fā)酵12h組 8 0.50 23.24±6.7** 5 人參發(fā)酵24h組 8 0.50 24.38±5.5** 6 格列本脲組 8 0.25 22.59±4.1**

3 結(jié)論

總之，參發(fā)酵是人參深加工的一個(gè)重要方面，人參歷來是抗糖尿病的重要中藥。因此，研究人參發(fā)酵中能否增加抗糖尿病成分，對(duì)新產(chǎn)品開發(fā)具有重要意義。

[1]楊金玲,高麗麗,朱平.人參皂苷生物合成研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2013,48(2):170-178．

[2]張志國.人參皂苷Re改善胰島素抵抗的機(jī)制研究[D].上海:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院/上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院,2007:27-29.

Study on the Content Change and Hypoglycemic Effect of Ginseng Saponin Re in Fermented Ginseng

Xu Ling zhi,You Li xin,Zhao Liu
(Changchun Institute of technology,Jilin Changchun 130600)

In order to study the changes of the content of ginsenoside Re in the fermentation of yeast,ginseng aqueous extract and ginseng extracts were extracted by yeast after different time,and the content of ginsenoside Re was compared.The results showed that the yeast fermentation and increase the content of ginsenoside Re by with fermentation time reduced;fermentation ginseng can also reduce four alloxan induced hyperglycemic mice,but suncured than hypoglycemic effect weakened.

Fermented ginseng;Ginsenoside Re;Hypoglycemic effect

R285

A

2096-0387（2016）06-0021-03

長春市科技局項(xiàng)目,項(xiàng)目名稱：人參降糖食品的研制開發(fā)；合同編號(hào)：長科技合（2013177）號(hào)計(jì)劃項(xiàng)目編號(hào)：13NK06；專項(xiàng)類別：農(nóng)副產(chǎn)品精深加工,負(fù)責(zé)人：徐凌志。

徐凌志（1976-），男，吉林長春人，碩士，教師，研究方向：中藥藥理學(xué)；尤麗新（1978-），女，吉林長春人，碩士，教師，研究方向：食品營養(yǎng)。