高效分子排阻色譜法測定頭孢美唑鈉聚合物含量

劉麗莉

哈藥集團制藥總廠 150000

高效分子排阻色譜法測定頭孢美唑鈉聚合物含量

劉麗莉

哈藥集團制藥總廠 150000

目的：使用高效分子排阻色譜法對頭孢美唑鈉聚合物中的含量進行測定。方法：使用高效分子排阻色譜法，將實驗過后的結(jié)果使用色譜柱的對比方法進行比較，使用鹽酸緩沖液中的磷酸氫兒鈉與磷酸二氫鈉、乙腈、為實驗數(shù)據(jù)參考上的流動相；在實驗過程中對波長進行檢測上的處理，實驗人員還要對實驗溶液上的流速與波長進行考慮與步驟上的安排。結(jié)果：這種實驗方法的使用，使得孢美唑鈉峰與聚合物之間的分離效果達到了最佳的狀態(tài)。結(jié)論：并且在一定的濃度設(shè)置下峰面積可以與實驗溶液呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。結(jié)論：這種實驗方法在使用的過程中收獲了較好的實驗效果，與此同時，這種實驗方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得實驗人員對其大范圍的推廣。

頭孢美唑鈉；聚合物；TSKgelG2000SWXL凝膠色譜柱

頭孢美挫鈉是一種抗生素在臨床使用過程中具有良好的抗菌消炎效果，但是，這種藥物在使用過程中經(jīng)常發(fā)生復(fù)發(fā)型過敏反應(yīng)，這種過敏源并不是抗生素本身導(dǎo)致的，導(dǎo)致出現(xiàn)這種不良反應(yīng)的原因是頭孢美唑鈉藥品中含有的高分子聚合物。文章通過葡萄糖凝膠柱法對這種藥品進行聚合物含量的測定，在實驗過程中使用了兩種分析方法，通過對比實驗以后發(fā)現(xiàn)，采用高效分子排阻色譜法可以收獲較好的實驗結(jié)果，并能滿足數(shù)據(jù)上的準(zhǔn)確性，這種方法也更為準(zhǔn)確靈敏。

1 儀器與試藥

目前，頭孢美唑鈉聚合物的測定未收入國內(nèi)外藥典，參照文獻方法進行試驗，結(jié)果表明，葡聚糖凝膠色譜柱的柱效低，分離效果差(所有聚合物為一個峰，該峰與主峰未能達到基線分離)，峰型拖尾，分析時間長等。而通過優(yōu)化色譜條件，采用高效分子排阻色譜法(以下簡稱：HPSEC)很好地解決了這一問題。本文采用HPSEC法對頭孢美唑鈉的聚合物進行測定，該色譜柱柱效高(柱效上萬)，主峰和聚合物峰峰型對稱，分離效果好(該色譜柱可分離出幾個聚合物峰且聚合物峰與主峰能完全基線分離)。該方法更為準(zhǔn)確、靈敏，簡便，是β-內(nèi)酰胺抗生素聚合物測定的必然趨勢。

高效液相色譜儀：ShimadzuLC-20AT泵、ShimadzuSPD-20A型紫外檢測器、ShimadzuCTO-20A柱溫箱；Agilent1200泵、Agilent1200二極管陣列檢測器。頭孢美唑鈉樣品(批號：120701、120702、120703)，由四川抗菌素工業(yè)研究所提供；頭孢美唑鈉對照品(批號：1097782)，由美國Rockville公司提供；乙睛為色譜純；水為樂百氏純凈水；其它試劑均為分析純。

2 HPSEC法的方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用TSKgelG2000SWXL凝膠色譜柱(7.8mm×30cm,5μm)(TOSOH公司)，以pH7.0的5mmo/L磷酸鹽緩沖液[5mmol/L磷酸氫二鈉-5mmol/L磷酸二氫鈉(61:39)，V/V]-乙腈(90:10)為流動相，檢測波長為 254nm，流速約每 0.6mL/min，柱溫為 25℃。理論板數(shù)按頭孢美唑鈉峰計算不低于3000，頭孢美唑鈉峰與相鄰聚合物峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的配制及測定2.2.1供試品溶液制備

取頭孢美唑鈉約50mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含0.5mg的溶液，搖勻即得。

2.2.2 對照溶液制備

取頭孢美唑鈉對照品約25mg，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含5μg的溶液。

2.2.3 測定方法

按2.1項下色譜條件，精密量取供試品溶液和對照溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算聚合物的含量。供試品溶液色譜圖請見圖 1(主峰前的峰為聚合物峰)，頭孢美唑鈉峰與相鄰聚合物峰均能達到基線分離。

2.3 聚合物測定的方法學(xué)驗證

取本品約50mg，置100mL容量瓶中，共6份分別按以下條件實驗：(1)未降解樣品；(2)高溫破壞樣：于 60℃下放置 10d，冷卻；(3)酸破壞樣：加0.1mol/LHCl1mL，放置0.5h，取0.1mol/LNaOH溶液1mL中和；(4)堿破壞樣品：加 0.1mol/LNaOH溶液 1mL，放置 1min，取0.1mol/LHCL溶液1mL中和；(5)強光破壞樣：強光(4500±500)照10d；(6)氧化破壞樣：加入3%H2O21mL,放置3h。取上述樣品依法操作，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述條件下的樣品溶液各20μL，按2.1項下的色譜條件進行分析，記錄色譜圖。試驗結(jié)果表明：本品對酸堿很不穩(wěn)定，對氧化、高溫、光照不穩(wěn)定。但主峰與以上破壞產(chǎn)生的聚合物峰均能獲得良好分離?？梢姡ň酆衔餀z查法對樣品中的聚合物包括強破壞條件下產(chǎn)生的聚合物峰均有良好的分離，因此，本聚合物檢查法具有很好的專屬性。

圖1 頭孢美唑鈉HPSEC色譜圖

3 討論

3.1 聚合物的定位

在實驗過程中采用葡萄糖凝膠色譜柱檢測方法可以對大分子化合物葡萄糖進行定位上的分析處理，在分析過程中，兩種凝膠色譜柱都可以對藥品中的大分子化合含量進行測定，葡聚糖凝膠色譜柱檢測方法在實驗過程中要比頭孢美挫鈉主峰出峰早。實驗人員對頭孢美挫鈉的溶液進行收集處理以后，可以采用葡聚糖檸膠色譜柱法對對實驗結(jié)果進行分析處理。處理過后的數(shù)據(jù)結(jié)果表明，收集到的供試液會在聚合物位置出峰。

此時實驗人員可以對頭孢美銼鈉溶液進行提取，葡聚糖凝膠色譜柱法可以對頭孢美唑鈉的峰前溶液進行收集，這樣處理的原因是防止頭孢美唑鈉溶液在放置過程中與空氣發(fā)生相應(yīng)的化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致測出的結(jié)果失去原有的精準(zhǔn)性。收集到的供試液實驗人員可以采取凝膠色譜柱法進行數(shù)據(jù)上的分析，這樣處理以后，實驗人員可以在實驗結(jié)果反應(yīng)的過程中發(fā)現(xiàn)供試液會在圖一中的主峰前出峰，這些研究上的結(jié)果表明，頭孢美唑鈉聚合物通過凝膠色譜法的測定以后，測定出的主峰在峰前的鋒面呈現(xiàn)都是聚合物上的鋒面展示，而主峰后的鋒面是小分子雜質(zhì)上的鋒面展示。

3.2 不同凝膠色譜柱的對比

相關(guān)研究文獻中對于頭孢美納挫的元素確定，主要的實驗方法是葡萄糖凝膠柱法。這種實驗方法可以對頭孢美納挫中的聚合物進行質(zhì)量分?jǐn)?shù)上的測定，在方法實驗過程中，葡萄糖凝膠會作為實驗步驟中的填充劑。實驗人員需要使用玻璃內(nèi)徑對柱長的中低壓色譜項柱進行分離處理。研究結(jié)果表明，頭孢美挫鈉的色譜柱在實驗數(shù)據(jù)中出現(xiàn)了柱效低，濃度高的情況。同時，這種情況的發(fā)生，也直接導(dǎo)致了實驗峰型出現(xiàn)了拖尾。

這種實驗方法在使用過程中不僅會受到實驗環(huán)境的影響，實驗人員在對數(shù)據(jù)結(jié)果進行分析時，所需要的時間也較多。在對溶液進行分離處理時，聚合物由于在實驗過程中只能使用一個峰面，所以，分離的效果往往達不到實驗人員所期望的標(biāo)準(zhǔn)。為了讓分離效果得到相應(yīng)的提升，實驗人員可以采用高效凝膠色譜柱開展實驗上的步驟，這種實驗方法可以讓色譜柱的柱效得到相應(yīng)的提升，分離效果也更好。實驗過后得出的實驗數(shù)據(jù)較為準(zhǔn)確，并且實驗人員開展實驗步驟時，操作的步驟基本沒有發(fā)生任何的調(diào)整，實驗方法簡單有效。所以，實驗人員在開展實驗研究時，應(yīng)該盡量選擇TSKgel凝膠色譜柱的檢測方法。

[1]丁玉蓮,杜文革,蔡蓉,黃曉軍.凝膠色譜法測定注射用頭孢美唑鈉的聚合物[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報.2012(05)

[2]江曉玲,劉昆,鄧俊豐,李波.頭孢菌素類抗生素中高分子雜質(zhì)的研究進展[J].國外醫(yī)藥(抗生素分冊).2007(06)

[3]袁雯瑋.高分子聚合物研究與中國藥典 2005年版β-內(nèi)酰胺類抗生素高分子聚合物修訂情況及操作要點[J].中國抗生素雜志.2005(12)

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