譚　賽　雷小明　王彥云　潘菊華　張　穎　黃世敬　張永超　鄭　軍　陳　朝　陳宇霞　李多嬌

(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院中藥研發(fā)中心，北京 100053)

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基于慢性缺血應(yīng)激建立血管性抑郁癥動(dòng)物模型

譚賽雷小明王彥云潘菊華張穎黃世敬*張永超鄭軍陳朝陳宇霞李多嬌

(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院中藥研發(fā)中心，北京 100053)

【摘要】目的 旨在建立血管性抑郁癥(vascular depression, VD)的理想動(dòng)物模型。方法選用SD大鼠40只，采用數(shù)字表法隨機(jī)分為4組：①手術(shù)組：雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(ligation of bilateral common carotid arteries, LBCCA)；②假手術(shù)組：同手術(shù)組處理，但不結(jié)扎；③抑郁組：慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)，不進(jìn)行手術(shù)；④模型組：LBCCA疊加CUMS，結(jié)合孤養(yǎng)。連續(xù)觀察21 d，觀測(cè)大鼠體質(zhì)量變化、行為學(xué)改變、腦血流量變化以及大鼠大腦基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)、酪氨酸激酶受體B (tropomyosin related kinase B, TrkB)蛋白及其mRNA表達(dá)水平的變化。結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組和抑郁組大鼠體質(zhì)量、糖水消耗百分率、曠場(chǎng)試驗(yàn)運(yùn)動(dòng)距離及站立次數(shù)均明顯降低(P<0.05或P<0.01)，手術(shù)組及模型組大鼠腦血流量明顯降低(P<0.01)，手術(shù)組及模型組MMP-2及MMP-2 mRNA表達(dá)水平顯著增高(P<0.01)，抑郁組及模型組海馬內(nèi)BDNF/TrkB及BDNF/TrkB mRNA表達(dá)均明顯降低(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論LBCCA疊加CUMS結(jié)合孤養(yǎng)方法較好地模擬了抑郁核心癥狀快感缺乏、運(yùn)動(dòng)和探索能下降的行為特征和神經(jīng)血管單元(neurovascular unit, NVU)穩(wěn)態(tài)失衡的病理機(jī)制，是較為理想的血管性抑郁模型，可用于藥理實(shí)驗(yàn)及治療效果機(jī)制研究。

【關(guān)鍵詞】血管性抑郁癥；動(dòng)物模型；神經(jīng)血管單元；基質(zhì)金屬蛋白酶；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)；酪氨酸激酶受體B

血管性抑郁癥(vascular depression， VD)是一種與腦血管疾病或血管危險(xiǎn)因素相關(guān)的老年期抑郁綜合征，其概念首次由Alexopoulos[1]提出。隨著人口老齡化及心腦血管疾病發(fā)病率增加，VD的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，并嚴(yán)重影響患者的治療和預(yù)后。VD已成為關(guān)乎人口健康和社會(huì)公共衛(wèi)生的重大問題，并成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。目前在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方面，對(duì)于抑郁癥動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)方法，國(guó)內(nèi)外已有較多文獻(xiàn)[2-3]報(bào)道，主要采用應(yīng)激模型、孤養(yǎng)或分養(yǎng)模型、腦損傷模型、藥理學(xué)抑郁模型等，但由于腦血管病后引起的抑郁癥動(dòng)物模型(即血管性抑郁癥動(dòng)物模型)國(guó)內(nèi)外僅有少數(shù)報(bào)道。本研究主要從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，探尋理想的VD動(dòng)物模型，為VD的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)成年雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量240～260 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(京)2009-0007。

1.2主要藥品及試劑

青霉素鈉(80萬(wàn)U/支，批號(hào)：D1204117)華北制藥股份有限公司；大腦基質(zhì)金屬蛋白酶 (matrix metalloproteinases, MMP)-2(8B4)一抗(sc-13595)、MMP-9(C-20)一抗(sc-6840)，美國(guó)Santa Cruz公司；兔超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑PV-9001、小鼠超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑PV-9002、山羊超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑PV-9003，北京中杉金橋公司；DAB顯色試劑盒，武漢博士德公司；Trizol Reagent (批號(hào)：36010)， 美國(guó)Invitrogen 公司；Fermentas K1622 RT反轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào)：00102954)，美國(guó)MBI公司；SYBR Green PCR Master Mix試劑盒(批號(hào)：4367659)，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.3主要儀器

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)敞箱(自制)；TM-vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司；PeriCam PSI激光散斑血流成像儀，瑞典Perimed AB公司；7900型熒光定量PCR儀，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1)動(dòng)物分組與處理：實(shí)驗(yàn)前，大鼠每籠5只正常飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境1周后，進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，選行為學(xué)得分相近的大鼠，采用數(shù)字表法進(jìn)行隨機(jī)分組。(1)假手術(shù)組(sham-operated group， SM)：手術(shù)過程同雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(ligation of bilateral common carotid arteries, LBCCA)，只穿線不結(jié)扎，不剪斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈，每籠5只正常飼養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；(2)抑郁組(depression group, DP): 慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress， CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)致慢性應(yīng)激抑郁模型，分籠孤養(yǎng)，并同時(shí)開始CUMS；(3)手術(shù)組：雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎，不進(jìn)行CUMS，不單籠飼養(yǎng)；(4)模型組(model group， MD)：LBCCA加CUMS，結(jié)合孤養(yǎng)。

所有大鼠共分為4組。其中，假手術(shù)組為對(duì)照組，抑郁組、手術(shù)組和模型組對(duì)本病大鼠模型進(jìn)行探討。

2)動(dòng)物模型：采用LBCCA基礎(chǔ)上疊加CUMS以及分籠孤養(yǎng)，建立大鼠慢性低灌注腦缺血性抑郁模型。

(1)LBCCA：假手術(shù)組、手術(shù)組、模型組大鼠禁食12 h，正常飲水。10%(體積分?jǐn)?shù))水合氯醛350 mg/kg腹腔麻醉消毒后，沿頸部正中切開約1.5 cm，蚊式止血鉗鈍性分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，5號(hào)絲線分別結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的近心端和遠(yuǎn)心端，中間剪斷，兩側(cè)結(jié)扎可間隔0.5 h。其中，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，不剪斷頸總動(dòng)脈。術(shù)后用青霉素鈉水溶液(20萬(wàn)U/只)皮下注射預(yù)防感染，并將大鼠置于37 ℃恒溫墊上保溫，蘇醒后返回鼠籠，正常食水。

(2)CUMS：給予大鼠空瓶放置1 h，夾尾1 min，4 ℃冰水游泳5 min，45 ℃環(huán)境5 min，明暗顛倒24 h，45°傾斜鼠籠24 h，禁水24 h，禁食24 h，潮濕墊料24 h，水平振蕩3 min(160 r/min)，電擊足底5 min (60 V，1 mA電流，每隔1 min刺激1次，每次10 s)等方法應(yīng)激。術(shù)后7 d后每天隨機(jī)采取一種應(yīng)激方法，使動(dòng)物不能預(yù)料應(yīng)激發(fā)生，共持續(xù)刺激21 d。

(3)隔離飼養(yǎng)：抑郁組及模型組同時(shí)進(jìn)行單籠隔離飼養(yǎng)。

3)觀察指標(biāo)：(1)體質(zhì)量測(cè)量：在手術(shù)前、CUMS 3周后(術(shù)后28 d)進(jìn)行體質(zhì)量測(cè)量，詳見表1。

(2)糖水偏嗜實(shí)驗(yàn)：詳見參考文獻(xiàn)[4]。記錄每只大鼠的糖水消耗量、純水消耗量，計(jì)算糖水消耗百分率，詳見表2。

(3)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：詳見參考文獻(xiàn)[4]。術(shù)后28 d，采用TM-vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：OFT-100開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試。

(4)腦血流量測(cè)定：大鼠在LBCCA手術(shù)前后實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腦血流量變化。所有大鼠在最后一次行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)各組大鼠腦血流量進(jìn)行測(cè)定。用瑞典Perimed公司的PeriCam PSI血流視頻監(jiān)測(cè)系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腦血流量1 min，經(jīng)PIMSoft軟件程序處理，計(jì)算平均值。

(5)免疫組織化學(xué)測(cè)定大鼠皮質(zhì)MMP-2/MMP-9及海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)/酪氨酸激酶受體B (tropomyosin related kinase B, TrkB)蛋白表達(dá)：上述檢測(cè)完畢后，斷頭取腦，腦組織于4%(體積分?jǐn)?shù))多聚甲醛固定過夜，石蠟包埋、切片，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，測(cè)定大鼠皮質(zhì)MMP-2/MMP-9、BDNF/TrkB蛋白表達(dá)。

(6)RT-PCR測(cè)定大鼠皮質(zhì)腦組織MMP-2/MMP-9及BDNF/TrkB基因表達(dá)：大鼠腹腔取血后迅速用 4 ℃， 0.9%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈉注射液灌流，斷頭取腦，完整腦組織放于超凈臺(tái)冰盒上，剝離皮質(zhì)及海馬組織，放于EP管中，加0.5 mL Trizol，低溫研磨勻漿后，凍存于-80 ℃ 冰箱。提取RNA，并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1體質(zhì)量變化

各組大鼠術(shù)前體質(zhì)量經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.456,P=0.716)，基線良好，具有可比性。CUMS后3周，各組大鼠體質(zhì)量經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.461,P=0.002)。與假手術(shù)組相比，抑郁組、模型組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)明顯減慢(P<0.05，P<0.01)；與模型組比，手術(shù)組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)明顯加快(P<0.01)，詳見表1。

2.2 糖水偏嗜試驗(yàn)

經(jīng)F檢驗(yàn)，各組大鼠術(shù)前糖水偏嗜實(shí)驗(yàn)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.237,P=0.870)，基線良好，具有可比性。術(shù)后28 d，各組大鼠糖水消耗百分率經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.437,P=0.089)。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠糖水消耗百分率降低(P<0.05)，抑郁組有下降趨勢(shì)，圖1中紅色部分代表腦血流，比較白色圈線部分腦血流量改變。差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較，手術(shù)組消耗百分率增加(P<0.05)，詳見表2。

表1各組大鼠體質(zhì)量變化

Tab.1The changes of weight in each rat group

GroupNumberofcaseBeforeLBCCACUMS3weekSM7252.00±7.79550.86±51.76OP7249.14±3.89524.00±42.36ΔΔDP6249.00±14.68491.50±51.93*MD8254.12±10.52460.88±15.40**F0.4566.461P0.7160.002

*P<0.05,**P<0.01vssham-operated group;ΔΔP<0.01vsmodel group; LBCCA：ligation of bilateral common carotid arteries； CUMS：chronic unpredictable mild stress； SM: sham-operated group; OP: operation group; DP: depression group; MD: model group.

表2各組糖水偏嗜實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.2Experimental results of sucrose preference

)

*P<0.05vssham-operated group,ΔΔP<0.01vsmodel group; LBCCA：ligation of bilateral common carotid arteries; SM: sham-operated group; OP: operation group; DP: depression group; MD: model group.

2.3曠場(chǎng)試驗(yàn)

經(jīng)F檢驗(yàn)，各組大鼠術(shù)前曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.639,P=0.597；F=1.264,P=0.309)。術(shù)后28 d，經(jīng)F檢驗(yàn)，大鼠運(yùn)動(dòng)距離組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.279,P=0.038)，站立次數(shù)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.099,P=0.127)。與假手術(shù)組相比，模型組及抑郁組運(yùn)動(dòng)距離明顯下降(P<0.05)，手術(shù)組有下降趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組站立次數(shù)明顯下降(P<0.05)，抑郁組和模型組有下降趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，詳見表3。

2.4 腦血流量

LBCCA手術(shù)大鼠，在術(shù)后大腦血流量顯著下降；而假手術(shù)組大鼠，術(shù)前術(shù)后腦血流量無(wú)明顯差異。從腦血流量改變說(shuō)明LBCCA手術(shù)造模成功(圖1)。

左、右腦腦血流量經(jīng)F檢驗(yàn)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.563，P=0.005；F=5.140，P=0.007)與假手術(shù)組相比，手術(shù)組及模型組大鼠腦血流量明顯降低(P<0.01)，抑郁組有下降趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，抑郁組大鼠腦血流量明顯增加 (P<0.05)，手術(shù)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見表4。

表3　曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果

圖1　LBCCA與假手術(shù)大鼠手術(shù)前后腦血流監(jiān)測(cè)圖

A: cortical blood flow (CBF) before LBCCA in VD rats; B: CBF after LBCCA in VD rats; C: CBF before sham operation in VD rats; D: CBF after sham operation in VD rats;LBCCA: ligation of bilateral common carotid arteries; VD:vascular depression.

表4　腦血流量數(shù)據(jù)結(jié)果

**P<0.01vssham-operated group;ΔP<0.05vsmodel group; SM: sham-operated group; OP: operation group; DP: depression group; MD: model group; PU: perfusion unit.

2.5 MMPs蛋白表達(dá)及其mRNA表達(dá)

與假手術(shù)組相比，手術(shù)組、模型組 MMP-2表達(dá)水平顯著增高(P<0.01)，抑郁組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)；與模型組相比，抑郁組MMP-2表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)，手術(shù)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與假手術(shù)組相比，手術(shù)組、模型組MMP-2 mRNA表達(dá)水平均有顯著增高(P<0.05)，抑郁組有增高趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，詳見圖2。

2.6BDNF及TrkB蛋白及其mRNA表達(dá)

與假手術(shù)組比較，模型組及抑郁組大鼠海馬內(nèi)BDNF及BDNF mRNA表達(dá)水平均明顯降低(P<0.05或P<0.05)，TrkB及TrkB mRNA表達(dá)水平均明顯降低(P<0.01)，手術(shù)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組相比，手術(shù)組大鼠海馬內(nèi)TrkB明顯升高(P<0.05)，TrkB mRNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)，抑郁組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見圖3。

圖2　MMP-2蛋白及其mRNA表達(dá)

A: expression of MMP-2 protein; B: expression of MMP-2mRNA;*P<0.05,**P<0.01vssham-operated group;ΔP<0.05,ΔΔP<0.01vsmodel group; MMP：matrix metalloproteinases；SM: sham-operated group; OP: operation group; DP: depression group; MD: model group.

圖3　BDNF/TrkB蛋白及其mRNA表達(dá)

A: expression of BDNF/TrkB protein; B: expression of BDNF/TrkBmRNA;*P<0.05,**P<0.01vssham-operated group;ΔP<0.05,ΔΔP<0.01vsmodel group; BDNF:brain-derived neurotrophic factor; TrkB:tropomyosin related kinase B; SM: sham-operated group;OP: operation group; DP: depression group; MD: model group.

3討論

血管性抑郁癥主要病理改變?yōu)槟X白質(zhì)損害[5]，其發(fā)病機(jī)制可能與慢性缺血及應(yīng)激引起神經(jīng)血管單元失穩(wěn)態(tài)及重構(gòu)障礙相關(guān)，而應(yīng)激抑郁狀態(tài)與心腦血管疾病存在螺旋增長(zhǎng)關(guān)系，互相致病，加快疾病發(fā)展。為了深入探究其發(fā)病機(jī)制，血管性抑郁動(dòng)物模型的正確建立顯得尤為重要。本課題組多年潛心致力于血管性抑郁癥的研究，前期曾用維生素D3(vitamin D3, VD3)負(fù)荷量加高脂飼養(yǎng)疊加CUMS方法造模，較好地模擬了VD臨床表現(xiàn)，但未從疾病的發(fā)病機(jī)制做進(jìn)一步探究[6]。本實(shí)驗(yàn)主要基于慢性缺血應(yīng)激造模，并從神經(jīng)血管單元穩(wěn)態(tài)失衡角度選取指標(biāo)加以驗(yàn)證。

國(guó)內(nèi)外使用的腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ陀泻芏?，常用的有大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型、雙側(cè)頸總動(dòng)脈閉塞模型、雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎模型(LBCCA)、去皮層血管腦缺血模型等[7-8]。其中LBCCA是該領(lǐng)域應(yīng)用最廣泛慢性缺血性腦白質(zhì)損害動(dòng)物模型，該模型操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，成功率高。同時(shí)研究證明，LBCCA術(shù)后導(dǎo)致大腦慢性低灌注并會(huì)引起大鼠大腦內(nèi)腦白質(zhì)病變的發(fā)生[9-10]。早期使用的應(yīng)激抑郁大鼠模型多使用強(qiáng)光刺激、強(qiáng)噪音及長(zhǎng)時(shí)間行為限制等強(qiáng)刺激的方法建立，此類模型易引發(fā)動(dòng)物的激越行為，不能全面模擬人類長(zhǎng)期處于持續(xù)刺激生活中而誘發(fā)抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，慢性不可預(yù)見性溫和刺激的造模方法是目前抑郁癥抗抑郁藥物治療和生理病理機(jī)制研究最常使用的應(yīng)激動(dòng)物模型[11-13]。本次實(shí)驗(yàn)研究表明，LBCCA結(jié)合CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)的復(fù)合造模方法使模型大鼠在體質(zhì)量、行為學(xué)、腦血流量等方面發(fā)生改變：(1)模型大鼠體質(zhì)量減輕明顯；(2)大鼠發(fā)生抑郁樣行為學(xué)改變，反應(yīng)表現(xiàn)為快感缺乏、運(yùn)動(dòng)能力和探索能力下降等，其中糖水偏嗜實(shí)驗(yàn)與大鼠快感有關(guān)，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中穿越格子數(shù)反應(yīng)大鼠的活動(dòng)度，站立次數(shù)反應(yīng)大鼠對(duì)新鮮事物的好奇度和探索能力；(3)模型大鼠腦血流供應(yīng)降低。從整體上看，該模型符合VD具有的慢性缺血病理和抑郁狀態(tài)雙重特點(diǎn)，與臨床具有較高的相似度。

神經(jīng)血管單元(NVU) 是美國(guó)國(guó)立神經(jīng)病學(xué)與卒中研究所(National Institute of Neurological Disease and Stroke, NINDS)率先提出的治療卒中的概念模型[14-18]。腦卒中后抑郁是腦卒中的重要合并癥之一，發(fā)生率約為25%～80%，而腦卒中后抑郁屬于VD范疇，因此VD的發(fā)病與神經(jīng)血管單元失穩(wěn)態(tài)密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)研究[17-19]發(fā)現(xiàn)MMP-2則在慢性腦缺血后7 d、14 d及60 d均有不同程度高表達(dá)， MMP-2在慢性缺血腦白質(zhì)損害中對(duì)BBB破壞和膠質(zhì)細(xì)胞激活起關(guān)鍵作用。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示血管性抑郁模型大鼠MMP-2表達(dá)水平顯著增高(P<0.01)，從慢性缺血角度驗(yàn)證了該模型的可行性。BDNF可由神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，其抗抑郁可能機(jī)制[20]：①促進(jìn)海馬神經(jīng)元的神經(jīng)發(fā)生；②對(duì)興奮性氨基酸的清除；③對(duì)5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)的激活作用及對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用，并可通過與其受體TrkB結(jié)合BDNF發(fā)揮抗抑郁的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制[21-23]。實(shí)驗(yàn)及相關(guān)臨床研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者或抑郁大鼠海馬及前額葉皮質(zhì)部位BDNF水平明顯減少，給予抗抑郁藥物治療后，腦內(nèi)BDNF表達(dá)增加[24-26]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)血管性抑郁模型大鼠海馬區(qū)BDNF及TrkB顯著降低，與之前研究結(jié)果一致。盡管有關(guān)BDNF抗抑郁機(jī)制尚存在爭(zhēng)議，但結(jié)果可間接驗(yàn)證與血管性抑郁癥的關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)旨在建立慢性低灌注腦缺血性抑郁模型(血管性抑郁模型)，由于多普勒超聲為有創(chuàng)操作，考慮到大鼠存活率的問題，未對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠造模前后腦血流量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，在今后的研究中將進(jìn)一步完善；同時(shí)，在驗(yàn)證發(fā)病機(jī)制上選取指標(biāo)主要與腦缺血損傷和神經(jīng)元修復(fù)有關(guān)，還應(yīng)結(jié)合與情感神經(jīng)遞質(zhì)如單胺類遞質(zhì)水平及其受體表達(dá)、情感神經(jīng)環(huán)路、神經(jīng)免疫內(nèi)分泌等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，將更加全面反映該模型的客觀性及其科學(xué)應(yīng)用價(jià)值。

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編輯慕萌

Construction of vascular depression animal model based on chronic ischemic and stress

Tan Sai, Lei Xiaoming, Wang Yanyun, Pan Juhua, Zhang Ying, Huang Shijing*, Zhang Yongchao, Zheng Jun, Chen Zhao, Chen Yuxia, Li Duojiao

(TraditionalChineseDrugResearchandDevelopmentCenter,GuanganmenHospital,AcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100053,China)

【Abstract】Objective To build the ideal animal model for depression. MethodsForty SD rats were divided randomly into 4 groups: ①sham-operated group; ②operation group: bilateral common carotid artery ligation (LBCCA); ③depression group: chronic unpredictable mild stress (CUMS) combining with solitary, with no surgery; ④model group: LBCCA +CUMS and solitary. We observe animals continuously for 21 days to detect the variation of weight, behavioristics, cerebral blood flow and expression level of matrix metalloproteinases (MMPs), brain-derived neurotrophic factor (BDNF)/tropomyosin related kinase B (TrkB) and MMPs mRNA, BDNF/TrkB mRNA. ResultsCompared with the sham-operated group, model group rats and depression group rats were significantly decreased (P<0.05 or P<0.01) in weight, sucrose consumption, movement distance and the number of rearing in open-field test; the blood flow of rats of operation group and model group were significantly decreased (P<0.01); the expression level of MMP-2 and MMPs mRNA in model group and operation group were increased markedly (P<0.01), the expression level of BDNF/TrkB and BDNF/TrkB mRNA in model group and depression group were decreased significantly (P<0.01). ConclusionThe method of LBCCA superposition CUMS combined with solitary simulate well the core symptoms of depression (lack of sensation, decline of movement and exploration) and the pathomechanism of unbalance of nerve vascular unit. It’s an ideal model for vascular depression, and it can be used in the study of pharmacological experiment and the mechanism of curative effect.

【Key words】vascular depression(VD); animal model; neurovascular unit; matrix metalloproteinases (MMPs); brain-derived neurotrophic factor (BDNF); tropomyosin related kinase B (TrkB)

(收稿日期：2015-01-05)

【中圖分類號(hào)】R 743.31

[doi：10.3969/j.issn.1006-7795.2016.02.017]

*Corresponding author， E-mail：gamhsj@126.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(81072801),北京市科技計(jì)劃項(xiàng)目(Z141100002214014),中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(ZZ0708076)。This study was supported by National Natural Science Foundation of China (81072801), Beijing Municipal Science and Technology Plan Projects(Z141100002214014)， Special Funds for Scientific Research of Basic Business Expenses Projects of Central Public Welfare Scientific Research (ZZ0708076).

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-04-1221∶14網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160412.2114.048.html

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