反相高效液相色譜法測定盤龍七中w(巖白菜素)*

張 韞，高蘇亞，唐一梅

(西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，陜西 西安 710021)

盤龍七(RhizomaBergeniaeScopulosae)為虎耳草科巖白菜屬植物秦嶺巖白菜BergeniaScopulosaT.P.Wang的根莖[1]，在陜西眉縣及秦嶺地區(qū)稱為盤龍七。盤龍七作為“太白七藥”之一[2]，具有滋補強壯、止血、祛痰止咳、補益脾胃、收澀固腸、利水活血、活血化瘀、祛風(fēng)除濕、消腫止痛等功效[3]。通過對盤龍七進行提取、分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定，確定巖白菜素(Bergenin)為盤龍七的有效成分之一[4]。巖白菜素屬于異香豆素類化合物，又名矮茶素，佛手配質(zhì)，鬼燈檠素，Bergenit，Vakerint，Arolisicacid B，Cuscutin，Peltaphorin[5]，具有止咳祛痰、抗炎、護肝、抗?jié)兒吞岣呙庖吡Φ茸饔肹6]。

采用高效液相色譜法測定巖白菜素已有文獻報道。由于文獻所用方法實驗操作較為復(fù)雜[7-8]，故作者提出一種操作簡便、重復(fù)性好、回收率高的測定盤龍七中巖白菜素含量的反相高效液相色譜法，為盤龍七這一陜西地方藥材的充分利用和質(zhì)量控制提供實驗參考。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

盤龍七藥材：分別購自陜西鎮(zhèn)安縣、勉縣、戶縣藥材市場，經(jīng)西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室汪興軍老師鑒定為虎耳草科秦嶺巖白菜BergeniaScopulosaT.P.Wang；巖白菜素對照品：批號477907，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%，上海士鋒生物科技有限公司；乙腈、甲醇：色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為市售分析純；實驗所用水為超純水。

高效液相色譜儀：配置為P680四元泵、真空在線脫氣機、UVD170U紫外檢測器、Chromeleon數(shù)據(jù)處理軟件，美國戴安公司；KLZ-UV艾柯超純水機：成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；R201L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海申生有限公司；FW200A高速萬能粉碎機：北京科偉永興儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱Agilent TC-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈-φ(磷酸)=0.2%溶液(體積比為10∶90)；UV檢測波長275 nm；流速1.0 mL/min；柱溫為室溫；進樣量為20 μL。在該色譜條件下，巖白菜素與盤龍七中其它成分得到較好的分離，無干擾，專屬性強，結(jié)果見圖1。

t/mina

t/minb圖1 巖白菜素對照品(a)和盤龍七供試品(b)色譜圖

1.2.2 對照品溶液配制

精密稱取巖白菜素對照品5.2 mg于10 mL容量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度；經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得0.52 mg/mL儲備液，置于4 ℃冰箱備用。精密吸取儲備液0.2、0.4、0.6、1.0、1.2和2.0 mL于10 mL容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，配制成一系列濃度的對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液配制

取盤龍七藥材，于60 ℃下烘干，打成粗粉，過孔徑0.25 mm的篩網(wǎng)，稱取上述粉末約2 g置于具塞錐形瓶，加入16 mL體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液；采用超聲提取法，提取3次，每次30 min；將提取液分別抽濾，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至10 mL；精密移取1.0 mL于25 mL容量瓶，加甲醇稀釋，定容搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾即得供試品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法學(xué)考察

根據(jù)《中國藥典》2015版(四部)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則，考察樣品的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、加樣回收及含量測定等。

2.1.1 線性關(guān)系考察

將上述對照品溶液按1.2.1項下色譜條件進行測定，以巖白菜素峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，巖白菜素對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。所得線性回歸方程為Y=251.26X-1.368 6，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。結(jié)果表明ρ(巖白菜素)在1.04×10-2～0.104 mg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。

ρ(巖白菜素)/(mg·mL-1)圖2 ρ(巖白菜素)的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.1.2 精密度實驗

配制ρ(巖白菜素)=0.052 mg/mL對照品溶液，按1.2.1項下的色譜條件重復(fù)進樣6次，測定色譜峰面積，得w(巖白菜素)，并計算RSD=1.8%，見表1，結(jié)果表明精密度符合要求。

表1 巖白菜素的精密度實驗(n=6)

2.1.3 重復(fù)性實驗

精密稱取同一批樣品粉末6份，每份約2 g，按1.2.3項下的方法制備6份供試品溶液，按1.2.1項下的色譜條件分別進樣，測定色譜峰面積，得w(巖白菜素)，并計算RSD=0.9%，見表2，結(jié)果表明重復(fù)性符合要求。

表2 巖白菜素的重復(fù)性實驗(n=6)

2.1.4 穩(wěn)定性實驗

精密吸取同一供試品溶液，按1.2.1項下色譜條件分別于0、2、4、6、8和10 h進樣，測定色譜峰面積，并計算得RSD為1.3%，見表3。結(jié)果表明供試品溶液10 h內(nèi)穩(wěn)定，實驗應(yīng)在巖白菜素穩(wěn)定時間內(nèi)完成。

表3 巖白菜素的穩(wěn)定性實驗(n=6)

2.1.5 加樣回收實驗

取同一批樣品9份，約2 g，其中m(巖白菜素)=0.208 0 g，按1.2.3項下的方法制備供試品溶液，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.104、0.260和0.350 mg/mL對照品溶液，定容搖勻，按1.2.1項下的色譜條件分別進樣測定，計算得高、中、低3個濃度的平均回收率依次為101.1%、100.3%、101.0%，RSD為0.6%，見表4。結(jié)果表明該方法具有良好的回收率。

表4 巖白菜素的加樣回收實驗(n=9)

2.2 w(巖白菜素)測定

取陜西省3個產(chǎn)地的盤龍七藥材粉末各3份，每份約2 g，按1.2.3項下的方法制備供試品溶液，按1.2.1項下的色譜條件測定w(巖白菜素)，結(jié)果見表5。

表5 盤龍七中w(巖白菜素) (n=3)

3 結(jié) 論

采用反相高效液相色譜法測定了盤龍七中有效成分w(巖白菜素)。操作簡便、專屬性強、重復(fù)性好、回收率高、結(jié)果可靠，為陜西地方藥材盤龍七建立科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法提供了一定依據(jù)，為其進一步開發(fā)應(yīng)用提供實驗參考。

參 考 文 獻：

[1] 馮永輝，李鵬，汪興軍，等．盤龍七中兒茶素的含量測定[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011,39(28):17235-17236．

[2] 宋小妹，劉海靜．太白七藥研究與應(yīng)用[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：82．

[3] 馮永輝，郭耀武，李蔓鷺，等．盤龍七的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．藥物分析雜志，2014,34(4):74-77．

[4] 崔瑩．盤龍七化學(xué)成分的研究(Ⅰ)[J]．中草藥，2012,43(9):1704-1707．

[5] 國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986:124．

[6] 劉海周，孫海林，李文軍，等．巖白菜中巖白菜素的純化及提取工藝研究[J]．云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011,34(2):22-25．

[7] 馮永輝，賀利娜，張博，等．HPLC法測定盤龍七中巖白菜素的含量[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011,39(26):15973-15974．

[8] 索建蘭，林宏領(lǐng)．HPLC法測定盤龍七中巖白菜素的含量[J]．陜西中醫(yī)，2011,32(3):353-355．