抗敏丸治療蕁麻疹作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

惠愛武　趙　崗　董銀蘭

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

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抗敏丸治療蕁麻疹作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

惠愛武趙崗董銀蘭△

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

摘要目的：通過抗敏丸對(duì)Ⅰ型超敏反應(yīng)動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)觀察，研究其治療蕁麻疹的作用機(jī)制。方法：應(yīng)用卵白蛋白造成 I 型超敏反應(yīng)動(dòng)物模型，測(cè)定大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒，頸動(dòng)脈取血測(cè)大鼠血清中白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)及免疫球蛋白 E(IgE)含量。結(jié)果：抗敏丸可顯著減少大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒(P<0.05)，顯著升高血清IFN- γ含量(P<0.05)，降低血清IL- 4 、IgE含量(P<0.05)。結(jié)論：抗敏丸具有抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用。

主題詞Ⅰ型超敏反應(yīng) 肥大細(xì)胞脫顆粒 IL-4、IFN-γ、IgE

蕁麻疹是臨床常見病與多發(fā)病之一，病因常不明，與食物、藥物、精神、物理、感染等因素相關(guān)，其病情頑固，反復(fù)發(fā)作，較難治愈，抗敏丸由陜西省中醫(yī)醫(yī)院皮膚科研制，主要由金銀花、連翹、荊芥、防風(fēng)、蒼術(shù)、厚樸、陳皮等組成，用于外感風(fēng)熱伴脾胃虛弱型癮疹(相當(dāng)于西醫(yī)蕁麻疹)，在臨床上取得了滿意的療效，本實(shí)驗(yàn)通過制備I型超敏反應(yīng)的致敏動(dòng)物模型，為抗敏丸治療蕁麻疹提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1藥品與試劑、儀器抗敏丸，由陜西省中醫(yī)醫(yī)院提供，批號(hào)：20141001；陽性藥物：撲爾敏，山西太原藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H14021770，產(chǎn)品批號(hào)：150104；大鼠IFN- γ、IL- 4 、IgE酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，購自南京建成生物工程研究所提供； imark酶標(biāo)儀，Bio-Rad laboratories，inc。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組60只健康SD大鼠，雌雄各半，體重180～220g，購買于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)時(shí)取大鼠60 只，隨機(jī)分6組，即對(duì)照組、模型組、撲爾敏組、抗敏丸高、中、低劑量組。 對(duì)照組和模型組，灌胃蒸餾水20mL/kg，撲爾敏組，灌胃撲爾敏4mg/kg，抗敏丸大、中、小劑量組，分別灌胃抗敏丸6.4、3.2、1.6g生藥/kg。

1.3方法

1.3.1 造模：按文獻(xiàn)方法[1-2]，第一天以0.9%氯化鈉配制Al(OH)3懸液(10g/L)，除對(duì)照組每次每只大鼠腹腔注射Al(OH)3懸液1mL;其余各組大鼠均腹腔注射卵白蛋白(OVA1mg)與Al(OH)3懸液lmL的混合液進(jìn)行初次免疫，第10d重復(fù)1次。從初次免疫后第6天開始，給藥，共14d。

1.3.2對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響：Ⅰ型超敏反應(yīng)動(dòng)物模型成功后給藥14 d，10%烏拉坦麻醉， 處死大鼠，立即腹腔內(nèi)注射肥大細(xì)胞沖洗液(15%枸櫞酸鈉與0.9%氯化鈉等量混合)，輕揉腹部3min，剖開腹腔，用吸管吸出全部液體，2000r/min 離心15min，棄上清，沉淀物加肥大細(xì)胞懸液保存液0.2mL。細(xì)胞涂片中性紅染色，立即鏡檢[3]。隨機(jī)計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)脫顆粒細(xì)胞數(shù)，計(jì)算脫顆粒百分?jǐn)?shù)和抑制率。肥大細(xì)胞脫顆粒率(%)=脫顆粒細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)×100%。肥大細(xì)胞脫顆粒抑制率(%)=(1-用藥組脫顆粒率/模型組脫顆粒率)×100%

1.3.3對(duì)細(xì)胞因子IFN- γ、IL- 4 、IgE表達(dá)的影響:上述大鼠未處死前頸動(dòng)脈插管取血，離心2000 r /min，取血清，采用酶聯(lián)免疫試劑盒， 按照說明書步驟檢測(cè)定IFN- γ、IL- 4 、IgE光密度， 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線， 計(jì)算濃度。

2結(jié)果

2.1對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響見表1。

表1可見，模型組大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，與模型組比較抗敏丸大、中劑量組和撲爾敏組能顯著減少肥大細(xì)胞脫顆粒(P<0.05)。

表1　抗敏丸對(duì)大鼠腹腔肥大

注：與對(duì)照組比較▲P?0.01，與模型組比較◇P?0.01，△P?0.05

2.2對(duì)細(xì)胞因子IFN- γ、IL- 4 、IgE表達(dá)的影響見表2。

表2可見，模型組IL- 4 、IgE血清含量較對(duì)照組顯著升高(P<0.05-0.01)， IFN- γ血清含量較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，抗敏丸大、中劑量組和撲爾敏組能顯著降低血清IL- 4 、IgE含量(P<0.05)，顯著升高血清IFN- γ含量(P<0.05)。

3討論蕁麻疹在中醫(yī)學(xué)又叫癮疹，屬Ⅰ型超敏反應(yīng)，是皮膚科臨床常見病和多發(fā)病，主要表現(xiàn)為皮膚瘙癢，發(fā)紅，出現(xiàn)大小不等局限性水腫樣風(fēng)團(tuán)，病因常不清楚，與食物、藥物、物理、感染、蚊蟲、精神及工作壓力等多種因素有關(guān)，病情易反復(fù)遷移，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[4-5]。本病發(fā)病機(jī)理還未完全清楚，目前認(rèn)為主要是通過免疫和非免疫介導(dǎo)機(jī)制使肥大細(xì)胞活化、反應(yīng)性增高導(dǎo)致。免疫介導(dǎo)的機(jī)制為過敏原(多為異種蛋白質(zhì))刺激人體，使人體產(chǎn)生特異抗體IgE(免疫球蛋白E)，這種IgE抗體附著在體內(nèi)的肥大細(xì)胞上或嗜堿性白細(xì)胞上，當(dāng)相同過敏原再次進(jìn)入機(jī)體時(shí)，IgE抗體就和過敏原相結(jié)合，從而使肥大細(xì)胞和嗜堿性白細(xì)胞釋放組織胺及組織胺樣物質(zhì)(包括慢性反應(yīng)性物質(zhì)、5-羥色胺、緩激肽與激肽類等)的釋放，組織胺又作用于血管，使之?dāng)U張和通透性增加，因而大量蛋白質(zhì)和液體外滲到皮膚組織中，于是產(chǎn)生蕁麻疹。非免疫機(jī)制肥大細(xì)胞激活是由于一些物理因子(如冷、熱、紫外線)、一些分子的毒性作用(生物異源物質(zhì)等)或者有關(guān)自然免疫的膜受體，肥大細(xì)胞表面受體與相對(duì)應(yīng)受體結(jié)合，啟動(dòng)不同信號(hào)途徑。因此免疫介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)中抗體主要是IgE，而IgE合成取決于T輔助細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-4 和IFN-γ[6]，當(dāng)Th1細(xì)胞分泌IFN-γ減少，Th2 IL- 4 分泌過多，導(dǎo)致 IgE 合成增多， 產(chǎn)生Ⅰ型超敏反應(yīng)。

表2　抗敏丸對(duì)大鼠大鼠血清IFN- γ、IL- 4 、IgE的影響

注：與對(duì)照組比較▲P?0.05，與模型組比較◇P?0.05

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明抗敏丸通過提高Ⅰ型超敏反應(yīng)模型大鼠Th1 細(xì)胞分泌IFN- γ，抑制Th2細(xì)胞 分泌IL- 4，使大鼠血清IgE 合成減少，從而抑制肥大細(xì)胞脫顆粒，減少炎性介質(zhì)釋放，減輕毛細(xì)血管擴(kuò)張、降低血管通透性等，從而緩解臨床癥狀[7]，起到了抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用。

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(收稿2015-11-19;修回2016-01-20)

【中圖分類號(hào)】R758.24

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.062

*陜西省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014K11-02-04-08)

△山西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(臨汾041004)