楊　潔　宋延平　劉建峰　丁殿利　 姜姍姍

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

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山甲復(fù)肝膠囊對(duì)四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用

楊潔宋延平劉建峰丁殿利△姜姍姍

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

摘要目的:探討山甲復(fù)肝膠囊對(duì)四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用及其初步機(jī)制。方法:SD大鼠60只，隨機(jī)分為空白組、模型組、山甲復(fù)肝膠囊大、中、小劑量組(1.6g/Kg、0.8g/Kg、0.4g/Kg)及護(hù)肝寧片組(0.96g/Kg)，每組10只。除空白組外均以50%四氯化碳橄欖油溶液皮下注射,每周2次，0.1mL/100g，連續(xù)5周，制備慢性肝損傷模型。造模同時(shí)給藥，5周后各組大鼠取血檢測(cè)血清相關(guān)指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)以及取肝組織進(jìn)行HE染色觀察病理學(xué)變化。結(jié)果:與模型組比較，山甲復(fù)肝膠囊大、中劑量組(1.6g/Kg、0.8g/Kg)能明顯對(duì)抗四氯化碳慢性肝損傷致ALP、ALT、AST升高(P<0.05，P<0.01)，并能夠降低肝組織病理學(xué)評(píng)分(P<0.01)。結(jié)論:山甲復(fù)肝膠囊能對(duì)四氯化碳造成的慢性肝損傷有對(duì)抗作用，具有一定的保肝作用。

主題詞 藥物性肝損傷, 慢性/中醫(yī)藥療法四氯化碳@山甲復(fù)肝膠囊

慢性肝炎是我國(guó)的常見(jiàn)病和多發(fā)病，山甲復(fù)肝膠囊為傳統(tǒng)復(fù)方制劑，具有益氣健脾、養(yǎng)血活血、疏肝止痛的作用，臨床主要用于慢性肝炎、肝硬化早期引起的肝郁脾虛證，癥見(jiàn)脘腹脹滿(mǎn)、兩脅疼痛、面色黧黑、蜘蛛痣、肝掌等。因此，本研究擬通過(guò)建立四氯化碳致大鼠慢性肝損傷模型，觀察山甲復(fù)肝膠囊對(duì)于慢性肝損傷的保護(hù)作用。

1材料1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供?？照{(diào)調(diào)溫，室溫22～28℃，相對(duì)濕度40～60%，排氣扇通風(fēng)換氣每天2次，每次1h。試驗(yàn)大鼠分籠喂養(yǎng)，水(常水)、標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料自由攝取。鼠舍保持整潔衛(wèi)生。光/暗時(shí)間為12/12h。實(shí)驗(yàn)前禁食12h。實(shí)驗(yàn)期間自由進(jìn)食飲水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)與使用皆遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)與管理指南規(guī)定。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量許可證號(hào)：SCXK(陜)2012-003。

1.2試劑與藥物山甲復(fù)肝膠囊，陜西中醫(yī)肝腎病醫(yī)院制備，批號(hào)140609，規(guī)格0.4g/粒。護(hù)肝寧片，吉林吉春制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：140501，有效期：2017/04。規(guī)格：0.48g/片。四氯化碳，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：141102。橄欖油，上海嘉里食品工業(yè)有限公司生產(chǎn)。

2方法2.1分組、造模及給藥SD大鼠60只，體重為(220±20)g,隨機(jī)分為6組：分別為空白組、模型組、山甲復(fù)肝膠囊大、中、小劑量組(1.6g/Kg、0.8g/Kg、0.4g/Kg)及護(hù)肝寧片組(0.96g/Kg),每組10只。參考文獻(xiàn)方法[1]進(jìn)行造模，空白組以純凈水灌胃，其余各組灌胃四氯化碳(CCl4)50%橄欖油懸混液，按照1mL/Kg劑量，每周2次，連續(xù)5周。造模同時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)，造模與給藥(或給水)時(shí)間間隔4h以上?？瞻讓?duì)照組和模型組每天灌胃純凈水，山甲復(fù)肝膠囊大、中、小劑量組給藥劑量分別為1.6g/Kg、0.8g/Kg、0.4g/Kg，護(hù)肝寧片組給藥劑量為0.96g/Kg，以上各組每日給藥1次，給藥(或給水)體積為10mL/Kg，連續(xù)5周。末次給藥24h后處死全部動(dòng)物，取血標(biāo)本做生化檢驗(yàn)，分離肝臟，取部分置于4%多聚甲醛固定，制備石蠟切片，進(jìn)行HE染色，供病理學(xué)檢查。

2.2觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法2.2.1使用血液生化儀常規(guī)檢測(cè)血清相關(guān)指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)。

2.2.2肝臟組織均以4%多聚甲醛固定，在每只大鼠肝臟的三個(gè)肝小葉上均取材，進(jìn)行常規(guī)HE染色，觀察肝組織病理學(xué)改變。評(píng)分分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)具體如下：肝細(xì)胞脂肪變:0分，無(wú)炎癥；1分，匯管無(wú)炎癥、變性及少數(shù)點(diǎn)灶狀壞死灶；2分，輕度碎屑?jí)乃雷冃?，點(diǎn)狀壞死或嗜酸小體；3分，中度碎屑?jí)乃?，變性，融匯壞死或見(jiàn)橋接壞死；4分，重度碎屑?jí)乃溃瑯蚪訅乃婪秶鷱V，累及多個(gè)小葉(多小葉壞死)。按上述分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)每只大鼠肝臟的3個(gè)肝小葉進(jìn)行病理評(píng)分，3個(gè)的平均值作為該大鼠的慢性肝炎病理評(píng)分。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間采用方差分析，各指標(biāo)間比較采用t檢驗(yàn)，均與模型組比較,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果3.1血清ALT、AST、ALP測(cè)定結(jié)果模型組大鼠的ALP、ALT、AST與空白組相比，均有顯著性升高(P<0.01)，由此可以看出，造模大鼠肝細(xì)胞已造成了嚴(yán)重?fù)p傷。與模型組相比，陽(yáng)性組、大劑量組、中劑量組均能顯著性降低ALP(P<0.05,P<0.01)、ALT(P<0.01)和AST(P<0.01)。說(shuō)明本品大、中劑量均具有保護(hù)肝細(xì)胞，減輕CCl4對(duì)肝細(xì)胞的損傷的作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2病理組織學(xué)檢查空白組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)脂肪變性、炎癥和氣球樣壞死；模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變，部分氣球樣變，散在少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；大劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，少量有炎細(xì)胞浸潤(rùn)；中劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，少量有炎細(xì)胞浸潤(rùn)；小劑量組鏡下可見(jiàn)脂肪變，散在少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；陽(yáng)性組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，少量有炎細(xì)胞浸潤(rùn)。山甲復(fù)肝膠囊各組各種病理改變均較CCl4模型組有所減輕，且隨劑量增加而藥物作用有增強(qiáng)的趨勢(shì)，能夠降低肝組織學(xué)評(píng)分，說(shuō)明本品對(duì)慢性肝炎有一定的治療作用。病理評(píng)分見(jiàn)表2，病理照片見(jiàn)圖1。

表1　山甲復(fù)肝膠囊對(duì)慢性肝損傷大鼠ALP、ALT及AST的影響

注：與模型組比較△P<0.05 ,▲P<0.01

圖1　山甲復(fù)肝膠囊對(duì)CCl4損傷大鼠肝組織病理形態(tài)改變的影響(HE×100)

組別劑量nHE染色評(píng)分空白組———100.00±0.00△模型組———102.20±0.32陽(yáng)性組0.96g/Kg100.75±0.38△大劑量組1.6g/Kg100.38±0.47△中劑量組0.8g/Kg100.88±0.22△小劑量組0.4g/Kg101.88±0.44

注：與模型組比較△P<0.01

4討論目前對(duì)于肝損傷的防治研究,多通過(guò)建立實(shí)驗(yàn)性肝損傷動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)一步篩選治療肝損傷藥物、并探討其作用機(jī)制。藥物、酒精、化學(xué)物質(zhì)等直接或間接誘導(dǎo)肝細(xì)胞生物膜系統(tǒng)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化作用，活化細(xì)胞死亡程序等，出現(xiàn)以ALT、AST、ALP等指標(biāo)升高為主要表現(xiàn)的各種肝功失常,其損傷過(guò)程大多與氧化應(yīng)激和免疫有關(guān)。中醫(yī)藥在治療肝損傷研究中表現(xiàn)出了穩(wěn)定的療效和獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，因此加大中藥治療肝損傷的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義[2-6]。

研究結(jié)果顯示，山甲復(fù)肝膠囊1.6g/Kg、0.8g/Kg組ALT、AST、ALP較模型組明顯降低，表明該藥物使肝細(xì)胞得到了有效的保護(hù),明顯遏制了肝損傷的程度,同時(shí)病理結(jié)果顯示出具有抑制肝纖維化的效果，提示該復(fù)方作用機(jī)制可能是抗肝纖維化作用方法，與藥物直接減輕肝損傷、保護(hù)肝臟細(xì)胞、影響結(jié)締組織代謝等多條途徑發(fā)揮作用相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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(收稿2015-12-16；修回2016-01-05)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R575

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.05.050

△陜西中醫(yī)肝腎病醫(yī)院(西安 710000)