鐘　江，鄭祥順，周曉泉，劉玉姣，楊和明，陳　曦，鄧雙奇

(貴州省血液中心檢驗科，貴陽 332000)

貴州省血液中心病毒核酸檢測應(yīng)用分析

鐘江，鄭祥順，周曉泉，劉玉姣，楊和明，陳曦，鄧雙奇

(貴州省血液中心檢驗科，貴陽 332000)

[摘要]目的嘗試評價貴陽地區(qū)無償獻血人群中開展血液病毒核酸檢測(NAT)的必要性和重要性。方法應(yīng)用Grifols Procleix Tigris全自動NAT和Procleix Ulitrio Assay HBV、HCV、HIV NAT 聯(lián)檢試劑，對72 967例無償獻血者血液標(biāo)本做HBV、HCV、HIV聯(lián)檢，并對聯(lián)檢陽性標(biāo)本做鑒別試驗；同時對同批標(biāo)本采用ELISA雙試劑平行檢測。結(jié)果NAT陽性檢出率為0.63%(462/72 967)，ELISA檢測陰性標(biāo)本的NAT陽性檢出率0.16%(119/72 624)；單項核酸陽性標(biāo)本的鑒別試驗陽性率為24.3%(29/119)。結(jié)論貴陽地區(qū)核酸檢測合格血液中存在的輸血傳播疾病風(fēng)險主要是輸血感染HBV，NAT用于血液篩查能進一步降低輸血傳播疾病風(fēng)險。

[關(guān)鍵詞]貴州??；病毒；核酸；血庫

2013年4月，國家衛(wèi)生與計劃生育委員會委下發(fā)了《全面推進血站核酸檢測工作實施方案(2013～2015年)》的通知，要求2013年，西部地區(qū)省會城市血站核酸檢測覆蓋率應(yīng)達到40%以上。貴州省血液中心按照省衛(wèi)生與計劃生育委員會的要求，完成了實驗室基礎(chǔ)建設(shè)、設(shè)備安裝、調(diào)試、試運行等前期籌備工作。于2013年10月14日起正式將病毒核酸檢測用于本中心獻血者血液篩查，現(xiàn)將1年的檢測結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料2013年10月14日至2014年10月13日，貴州省血液中心采集的無償獻血全血樣本72 967例；標(biāo)本留樣方式為血液采集時旁路留樣留取2支分別用于ELISA(5 mL/份)及NAT(8 mL/份)檢測的樣本，其中核酸檢測樣本采用無菌帶分離膠抗凝檢測專用真空試管。

1.2儀器與試劑全自動核酸檢測分析系統(tǒng)(Procleix TIGRIS System),全自動ELISA加樣儀(Microlab STAR、Freedom EVO clinical)、全自動ELISA分析儀(FAME 24/20、SIEMENS BP-Ⅲ)。MA-化學(xué)發(fā)光法 HBV、HCV、HIV聯(lián)檢試劑盒(Procleix ULTRO Assay)及鑒別試劑盒(Discriminatory Assay)，HBsAg ELISA試劑(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、上?？迫A生物工程股份有限公司)，抗-HCV ELISA試劑(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、上?？迫A生物工程股份有限公司)，抗-HIV ELISA試劑(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、法國伯樂公司)。

1.3核酸檢測流程將當(dāng)日采集的血液標(biāo)本經(jīng)過3 130×g離心15 min后放置2～10 ℃冰箱保存。24 h內(nèi)，標(biāo)本管經(jīng)開蓋處理后立即進行核酸檢測(11：30 AM前交接的血小板標(biāo)本當(dāng)日進行NAT檢測)，對NAT聯(lián)檢陽性的標(biāo)本，不需等待鑒別結(jié)果，血液做報廢處理，獻血者永久屏蔽。

1.4檢測策略對無償獻血者血液標(biāo)本采用ELISA和NAT平行檢測；對NAT聯(lián)檢陽性的標(biāo)本作HBV、HCV、HIV鑒別試驗，對ELISA檢測陰性而NAT鑒別為HCV RNA、HIV RNA陽性的獻血者做定期跟蹤隨訪。

1.5檢測方法對血液標(biāo)本采用全自動核酸分析系統(tǒng)做單人份檢測，檢測模式為HBV/HCV/HIV NAT聯(lián)檢；采用2種不同廠家NAT試劑對血液標(biāo)本的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV進行平行檢測。

2結(jié)果

2.12013年10月14日至2014年10月13日貴陽地區(qū)72 967例獻血者標(biāo)本中獻血者ELISA與NAT陽性檢出率比較，ELISA檢測(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)陽性標(biāo)本912例、陽性檢出率1.25%，NAT檢測陽性標(biāo)本462例、陽性檢出率0.63%。

2.22013年10月14日至2014年10月13日貴陽地區(qū)獻血者72 624例 ELISA檢測(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)陰性標(biāo)本中NAT檢測陽性標(biāo)本119例，陽性檢出率0.16%。

2.32013年10月14日至2014年10月13日貴陽地區(qū)獻血者NAT陽性標(biāo)本鑒別試驗見表1。NAT陽性標(biāo)本鑒別率為72.51%(335/462),單項NAT陽性標(biāo)本的鑒別陽性率為24.3%(29/119)，29例鑒別陽性標(biāo)本均為HBV-NAT。

表1　鑒別試驗結(jié)果(n)

TRI:HBV、HCV、HIV聯(lián)檢。

3討論

貴陽地區(qū)獻血者血液標(biāo)本NAT陽性檢出率為0.63%，ELISA檢測(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)的陽性檢出率為1.25%；其中ELISA檢測(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)陰性標(biāo)本中NAT陽性檢出率0.16%，位于已報道的國內(nèi)其他地區(qū)單項NAT陽性檢出率0.07%～0.22%中位[1-5]，其間差異可能與各地病毒流行率差異、檢測模式、檢測標(biāo)本數(shù)、ELISA試劑、核酸設(shè)備與試劑等因素相關(guān)。

ELISA全項檢測合格而NAT聯(lián)檢陽性的標(biāo)本，所作的核酸鑒別試驗的陽性率僅為24.3%(29/119)；鑒別陽性的標(biāo)本均為HBV-NAT。對于這一結(jié)果可能有以下原因：(1)單項核酸陽性標(biāo)本的病毒載量較低，病毒在樣品中的不規(guī)則分布造成的取樣病毒數(shù)量誤差；(2)HBV是DNA病毒，對外界環(huán)境適應(yīng)性較強，HCV和HIV均是RNA病毒，穩(wěn)定性較差，易降解；(3)核酸聯(lián)檢有出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能。

據(jù)報道，隱匿性HBV感染獻血者是導(dǎo)致HBsAg血液篩查后輸血傳播HBV的主要原因。隱匿性HBV 病毒學(xué)檢測常表現(xiàn)為HBsAg陰性，而NAT檢測陽性。貴州省血液中心ELISA全項檢測合格而NAT聯(lián)檢陽性的標(biāo)本，鑒別試驗陽性的均為HBV-NAT。從此可以看出，目前貴陽地區(qū)ELISA檢測合格獻血者血液中存在的輸血傳播疾病風(fēng)險主要是感染HBV。綜上所述，核酸檢測能進一步縮短血液檢測的“窗口期”，減少隱匿性HBV感染等原因造成的漏檢，降低血液傳染病風(fēng)險。

參考文獻

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作者簡介：鐘江(1974-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事血液檢測研究。

doi:·經(jīng)驗交流·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.02.031

[中圖分類號]R457.1

[文獻標(biāo)識碼]B

[文章編號]1671-8348(2016)02-0242-02

(收稿日期：2015-09-15修回日期：2015-10-08)