過敏性休克死亡豚鼠IgE、P物質(zhì)水平及其法醫(yī)學(xué)意義

謝洪波

(南昌鐵路公安局，江西 南昌 330002)

許小明

(南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330006)

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過敏性休克死亡豚鼠IgE、P物質(zhì)水平及其法醫(yī)學(xué)意義

謝洪波

(南昌鐵路公安局，江西 南昌 330002)

許小明

(南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330006)

[摘要]目的：探討IgE、P物質(zhì)在過敏性休克死亡豚鼠臟器中的表達及法醫(yī)學(xué)意義。方法：實驗選取成年健康豚鼠20只，以數(shù)字表法隨機各抽取10只豚鼠，分為觀察組與對照組，觀察組進行過敏原注射制造模型(過敏性休克死亡)，對照組進行注射生理鹽水后使用脊椎脫臼法處死，解剖兩組尸體，收集標本固定后，以免疫組化法測定IgE、P物質(zhì)表達情況并進行比較。結(jié)果：觀察組過敏原注射1min內(nèi)出現(xiàn)過敏性休克，30min死亡率為80%(8只)。對照組未有變化；解剖兩組尸體，觀察組存在心腔擴張、喉頭水腫表現(xiàn)，鏡檢顯示肺泡壁薄、肺泡擴張。對照組未有變化；觀察組的IgE物質(zhì)含量和P物質(zhì)含量較對照組高，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：IgE、P物質(zhì)在過敏性休克死亡豚鼠臟器中的表達較高，以免疫組化法測定IgE、P物質(zhì)表達情況，可為過敏性休克死亡提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]過敏性休克；IgE；P物質(zhì)；臟器；法醫(yī)學(xué)

為探討IgE、P物質(zhì)在過敏性休克死亡豚鼠臟器中的表達水平及其法醫(yī)學(xué)意義，筆者選取成年健康豚鼠，建立過敏性休克模型，測定IgE、P物質(zhì)含量。現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1材料

實驗選取成年健康豚鼠20只，隨機分為觀察組、對照組各10只，無性別限制，重量155～198g。

多人混合血清、冰醋酸液(0.5%)、電阻培養(yǎng)箱、高速離心機、光學(xué)顯微鏡、發(fā)光免疫分析系統(tǒng)、制片儀器。

1.2方法

制備致敏原注射液，取多人混合血清，離心(1500r/min)，取上清液，生理鹽水稀釋(1∶9)為致敏原，液氮(-70℃)保存；動物致敏，觀察組給予致敏原注射(0.2mL)，位置為右側(cè)后爪內(nèi)。對照組給予注射生理鹽水(0.2mL)。置于相同環(huán)境下飼養(yǎng)觀察21d；動物發(fā)敏，第29天，觀察組尾靜脈注射致敏原注射液(1mL)，對照組給予注射生理鹽水(1mL)。觀察組60min內(nèi)未死亡的再次注射致敏原。對照組使用脊椎脫臼法處死；樣本處理，兩組標本死亡冷藏48h內(nèi)，或冷凍7d內(nèi)，選取標本組織(脾、胃、肺、氣管等器官組織)甲醛 (4%)固定→he染色→切片→鏡檢→脫蠟→鹽酸分離→水洗→脫水處理；免疫組化處理(IgE、P物質(zhì))，免疫組化法[1]測定血清IgE含量：收集死亡后觀察組和對照組標本右心血，靜置，每分鐘1500r離心，收集上清液，置于低溫下(-70℃)保存，依照ELISA法實施檢測[2]，測定P物質(zhì)含量。

2結(jié)果

2.1豚鼠死亡情況和重要臟器病理學(xué)變化

觀察組過敏原注射1min內(nèi)出現(xiàn)過敏性休克，30min死亡率為80%(8只)。對照組未有變化。

表1　兩組IgE、P物質(zhì)含量比較

注：因本實驗中試劑盒靈敏度是1U/mL，故0代表<1U/mL。

解剖兩組尸體，觀察組存在心腔擴張、喉頭水腫表現(xiàn)，鏡檢顯示肺泡壁薄、肺泡擴張。對照組未有變化。

2.2兩組IgE物質(zhì)含量和P物質(zhì)含量

觀察組IgE物質(zhì)含量和P物質(zhì)含量較對照組高，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

3討論

過敏性休克為超敏反應(yīng)，癥狀嚴重，極易猝死，臨床較常見。藥物及生物制劑等是導(dǎo)致過敏性休克的主要致病原因，其中青霉素為引起過敏性休克的主要藥物。由于敏性休克和多種因素相關(guān)，患者極易死亡，但很難找到死亡證據(jù)，給法醫(yī)學(xué)鑒定帶來不便[3]。過敏性休克發(fā)生機制為：抗原刺激作用，IgE類抗體產(chǎn)生(B細胞)，抗體結(jié)合受體，出現(xiàn)過敏狀態(tài)。當(dāng)機體受再次接觸到抗原，會將肥大細胞激活，產(chǎn)生組胺等生物活性物質(zhì)，出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)(Ⅰ型)。目前臨床主要依靠實驗測定，靶向目標為IgE抗體、釋放因子(肥大細胞)等，需要注意選擇靶向目標，部分靶向目標(組胺等)，易被降解、自溶，無法得到準確結(jié)果。使過敏性休克死亡診斷難度增加。高效、準確診斷敏性休克死亡，成為相關(guān)領(lǐng)域研究重點[4]。

過敏性休克的關(guān)鍵介質(zhì)為IgE抗體。研究顯示，正常健康人的血清內(nèi)，IgE含量極少，普通儀器不易檢出[5]。放射免疫法檢測，當(dāng)含量>800ng/mL時即判斷異常。與正常健康人相比，血清IgE抗體含量上升，即判斷為發(fā)生超敏反應(yīng)。故臨床根據(jù)血清IgE抗體總含量診斷過敏性疾病。但臨床不能單純依靠檢測IgE水平來判斷過敏性休克，還需要參考其他指標綜合判斷。

P物質(zhì)為神經(jīng)肽，在神經(jīng)系統(tǒng)中易被檢測到，廣泛參與唾液分泌、痛覺傳導(dǎo)、誘發(fā)炎癥等反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)遞質(zhì)P物質(zhì)具有化學(xué)表達作用。過敏性休克機體內(nèi)肥大細胞可分泌細胞因子、組胺，在過敏反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，影響神經(jīng)元P物質(zhì)釋放，同時此類神經(jīng)肽可導(dǎo)致神經(jīng)源性炎癥，繼而產(chǎn)生炎性反應(yīng)。可見，過敏性休克猝死涉及多個反應(yīng)，激活免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)，進行免疫神經(jīng)調(diào)節(jié)。

IgE、P物質(zhì)聯(lián)合檢測在過敏性休克診斷中具有重要意義。法醫(yī)學(xué)判斷過敏性休克，以病史、表現(xiàn)等因素為參考，結(jié)合實驗檢測分析，明確是否存在過敏反應(yīng)，是否發(fā)生嚴重休克及關(guān)聯(lián)性。IgE檢測可明確是否存在過敏反應(yīng)，但不能單獨作為診斷依據(jù)，且IgE無法確定是否發(fā)生休克以及過敏與休克的關(guān)系。對過敏性休克鑒定具有一定局限性。過敏反應(yīng)影響P物質(zhì)含量，且與休克嚴重程度明顯相關(guān)，和過敏與休克均有關(guān)聯(lián)。本研究顯示，給予過敏原注射制造過敏性休克死亡模型的觀察組與給予注射生理鹽水后使用脊椎脫臼法處死的對照組比較，觀察組過敏原注射1min內(nèi)出現(xiàn)過敏性休克，30min死亡率為80%(8只)。對照組未有變化；解剖發(fā)現(xiàn)，觀察組存在心腔擴張、喉頭水腫表現(xiàn)，鏡檢顯示肺泡壁薄、肺泡擴張。對照組未有變化；觀察組的IgE物質(zhì)含量和P物質(zhì)含量較對照組高(P<0.05)。

綜上所述，IgE、P物質(zhì)在過敏性休克死亡豚鼠臟器中的表達較高，以免疫組化法測定IgE、P物質(zhì)表達情況，可為過敏性休克死亡提供法醫(yī)學(xué)依據(jù)。

[參考文獻]

[1]劉勇，李航，余艦.IL-4與IL-10在過敏性休克中的表達及意義[J]. 重慶醫(yī)學(xué), 2014, 43(15):1898～1900.

[2] 王紅利.白細胞介素-4和白細胞介素-13基因多態(tài)性對哮喘患兒IgE表達的影響[J]. 兒科藥學(xué)雜志, 2015, 22(4):7～9.

[3] 米麗，高衛(wèi)民，杜中波,等. 大鼠過敏性休克死后血清IgE、類胰蛋白酶的變化[J]. 法醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 31(3): 181～184.

[4] 王曉麗，王夕娟.點刺試驗與血清特異性IgE檢測在蒿屬花粉癥中的診斷價值[J]. 濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016, 38(1):57～59.

[5] 郭瑜修，藍柳婷，馮尚克. 桂西及其周邊地區(qū)變應(yīng)性鼻炎兒童過敏原特異性IgE檢測分析[J]. 右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2016,38(1):63～65.

[編輯]劉陽

[收稿日期]2016-02-08

[作者簡介]謝洪波(1982-)，男，主檢法醫(yī)師，碩士生，主要從事法醫(yī)病理學(xué)和法醫(yī)臨床學(xué)的檢案與研究工作，songjiaoyingg@163.com。

[中圖分類號]R363；R89

[文獻標志碼]A

[文章編號]1673-1409(2016)18-0006-02

[引著格式]謝洪波, 許小明. 過敏性休克死亡豚鼠IgE、P物質(zhì)水平及其法醫(yī)學(xué)意義[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版)，2016，13(18)：6～7.