段鵬杰，張慧林，劉　宇，于翔宇，劉鯤鵬，拓艷云，齊晨陽(yáng)，劉小林，賀　花

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西楊凌　712100)

?

秦川牛 MYH8基因多態(tài)性及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析

段鵬杰，張慧林，劉宇，于翔宇，劉鯤鵬，拓艷云，齊晨陽(yáng)，劉小林，賀花

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西楊凌712100)

摘要為研究秦川牛 MYH8基因的多態(tài)性及其與秦川牛生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)性，選取163頭健康的30月±2月齡秦川牛，采用DNA測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn) MYH8基因外顯子上的SNP位點(diǎn)，并以PCR-RFLP技術(shù)分析秦川牛群 MYH8基因型，研究其遺傳多樣性，再通過(guò)SPSS 19.0軟件分析SNP位點(diǎn)與秦川牛體尺性狀和胴體性狀的關(guān)聯(lián)性。研究結(jié)果表明，在 MYH8基因第33外顯子上存在3個(gè)SNP位點(diǎn)，分別在基因序列26 064、26 094和26 100 bp 3處，且26 064 bp處(T>C)為同義突變，26 094 bp處(T>C)為錯(cuò)義突變，26 100 bp處(C>G)為錯(cuò)義突變。關(guān)聯(lián)分析顯示， C26100G突變發(fā)生在體斜長(zhǎng)指標(biāo)，表現(xiàn)為GG基因型個(gè)體的群體均值顯著高于GC、CC基因型個(gè)體(P<0.05)；而其他突變中不存在顯著性差異。某些基因型(T26064C突變處TC基因型和T26094C突變處CT基因型)可能為優(yōu)勢(shì)基因型，但還需通過(guò)更多個(gè)體驗(yàn)證。說(shuō)明： MYH8基因?qū)η卮ㄈ馀ＩL(zhǎng)性狀存在一定影響。

關(guān)鍵詞秦川牛； MYH8；PCR-RFLP；多態(tài)性；關(guān)聯(lián)分析

伴隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和各種生物技術(shù)的廣泛運(yùn)用，分子標(biāo)記技術(shù)在秦川牛育種過(guò)程中逐漸發(fā)揮著重要作用，比如從分子水平研究基因與重要經(jīng)濟(jì)性狀之間的關(guān)聯(lián)性，可以提高選擇效率與準(zhǔn)確性，快速篩查出具有優(yōu)良基因的種牛，對(duì)家畜育種繁殖和生產(chǎn)具有重要意義。肌球蛋白作為骨骼肌纖維的主要成分，在骨骼肌纖維的收縮特性方面有重要作用[1]。研究發(fā)現(xiàn)，作為肌球蛋白主干的肌球蛋白重鏈(MHC)具有多種不同組成形式[2]：哺乳動(dòng)物橫紋肌中至少有9種MHC異型體[3]，人類基因組的2種MHC亞型存在于14號(hào)染色體、6種MHC亞型存在于17號(hào)染色體，而在成年骨骼肌中MHC有4種類型[4]。

目前，關(guān)于肌球蛋白重鏈基因的研究多集中于肌球蛋白重鏈基因的分離克隆、結(jié)構(gòu)、表達(dá)及功能分析等方面。龔亮等[5]克隆和分析小菜蛾肌球蛋白重鏈部分cDNA序列；ZHANG等[6]揭示成年牛骨骼肌中MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱa、 MHC-Ⅱb、 MyHC-Ⅱx 4種亞基在西門(mén)塔爾雜交牛背最長(zhǎng)肌、半腱肌和比目魚(yú)肌中的表達(dá)情況，及其與肌內(nèi)脂肪間的聯(lián)系；李錫癸[7]通過(guò)基因芯片及生物信息學(xué)技術(shù)對(duì) CMT2L轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行全基因組差異表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn) MYH1、 MYH4與肌肉蛋白、動(dòng)力蛋白結(jié)合、肌肉收縮有關(guān)；焦青貞[8]分離克隆豬 MYH1、 MYH2、 MYH4基因的5-側(cè)翼序列和其中的ATZ元件，發(fā)現(xiàn)了1個(gè)位于 MYH4基因5-側(cè)翼序列的SNP位點(diǎn)；羅建杰[9]在肉仔雞胸肌蛋白質(zhì)組學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)， MYH1、MYH3、MYH6、MYH7B、MYH9是與細(xì)胞骨架構(gòu)建相關(guān)的功能蛋白；Bryson等[10]研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)類MHC基因?qū)儆诙嗷蚣易宄蓡T，且基因產(chǎn)物的表達(dá)受組織器官、發(fā)育階段及環(huán)境因子等因素的影響。另外，也有學(xué)者對(duì) MYH8基因進(jìn)行研究。Munazzah等[11]探討 MYH8基因突變與牙關(guān)緊閉假屈曲指綜合征的關(guān)系；張鶯鶯等[12]利用基因芯片技術(shù)篩選秦川牛公牛與閹牛肌肉組織差異表達(dá)基因，并用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)部分差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn) MYH3和 MYH8等直接影響肌原纖維構(gòu)成和肌纖維組織學(xué)特性的基因在公牛肌肉中的表達(dá)量顯著高于閹牛，而且 MYH3基因和 MYH8基因可能是調(diào)控秦川牛公、閹牛肉質(zhì)性狀差異包括嫩度差異的重要基因[13]；趙春平[14]通過(guò)探索因外科手術(shù)引起的創(chuàng)傷性強(qiáng)烈應(yīng)激對(duì)牛肉肉質(zhì)性狀的影響，初步確定 MYH3、 MYH8基因可能是影響牛肉質(zhì)性狀的重要基因。有研究通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)， MYH8基因在肌肉發(fā)育過(guò)程中表現(xiàn)出發(fā)育階段特異性[15]；而Zhao等[16]通過(guò)功能蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)， MYH8基因與牛肉嫩度相關(guān)?；谝陨涎芯?，表明 MYH8基因可能是影響秦川牛胴體和生長(zhǎng)性狀的候選基因，有必要對(duì)其基因多態(tài)性進(jìn)行進(jìn)一步分析。

鑒于 MYH8基因?qū)η卮ㄅＨ赓|(zhì)性狀的重要影響，且在秦川牛 MYH8基因的多態(tài)性及其SNP位點(diǎn)與體尺、胴體性狀關(guān)聯(lián)性方面的研究較少，本研究以秦川牛 MYH8基因作為研究目標(biāo)，通過(guò)對(duì) MYH8基因的多態(tài)性的檢測(cè)及其SNP位點(diǎn)與體尺、胴體性狀的關(guān)聯(lián)分析，為秦川牛的選育、留種提供理論基礎(chǔ)，為秦川牛肉用性能的提高和新品系的培育提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材 料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物 隨機(jī)選擇163頭健康的30月±2月齡的秦川牛(由陜西省秦寶牧業(yè)發(fā)展有限公司提供)，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相似。

1.1.2試劑蛋白酶K、TaqDNA聚合酶、含染料2×TaqMaster Mix、DNA Marker Ⅰ等，均購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司。檸檬酸、檸檬酸鈉、葡萄糖、NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、Tris堿、HCl、十二烷基磺酸鈉、NaOH、乙醇、乙二胺四乙酸二鈉、瓊脂，均為分析純。

1.1.3主要儀器設(shè)備凝膠成像系統(tǒng)、冷凍離心機(jī)、電子分析天平、PCR儀、微量移液器、微量紫外分光光度計(jì)、普通冰箱、干燥箱、磁力攪拌器、微波爐、冷凍柜、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、全溫立式搖床、三恒電泳儀、水平電泳槽、小型離心機(jī)、超低溫冰箱、恒溫水浴鍋等。

1.1.4軟件工具通過(guò)Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，通過(guò)chromas軟件進(jìn)行序列比對(duì)與分析；采用Excel和SPSS 19.0進(jìn)行各性狀指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)與分析；通過(guò)POPGENE軟件進(jìn)行遺傳多態(tài)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)與計(jì)算。

1.2方 法

1.2.1血樣采集當(dāng)牛只處于自然狀態(tài)時(shí)，通過(guò)頸靜脈采血，ACD抗凝處理[V(ACD)∶V(血液)=1∶6]后置于冰上，-80 ℃超低溫冰箱保存，備用。

1.2.2牛血液基因組DNA提取秦川牛血液基因組DNA的提取采用常規(guī)的酚-氯仿抽提法[17]，提取后用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA質(zhì)量濃度。

1.2.3引物設(shè)計(jì)與合成 以NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中GenBank公布的牛 MYH8基因序列(AC_000176.1)為參考，通過(guò)Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)13對(duì)牛 MYH8基因外顯子的PCR引物(表1)，送至南京金斯瑞生物科技有限公司合成。

1.2.4PCR擴(kuò)增體系和程序PCR擴(kuò)增采用15 μL體系，最佳反應(yīng)體系：2×TaqMaster Mix 7.5 μL，上、下游引物各0.3 μL，DNA模板0.6 μL，超純水6.3 μL。根據(jù)每對(duì)引物產(chǎn)物大小，其退火溫度為50～60 ℃(表2中的X表示不同引物對(duì)應(yīng)的最適退火溫度)，循環(huán)30～36次，其他反應(yīng)過(guò)程變化不大，具體程序見(jiàn)表2。

1.2.5PCR產(chǎn)物測(cè)序隨機(jī)挑選出30個(gè)個(gè)體，每個(gè)體吸取1 μL DNA，組成混合DNA樣本。以混合DNA樣本為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物回收、檢測(cè)后，交由生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果通過(guò)Chromas軟件進(jìn)行序列比對(duì)及分析。

1.2.6擴(kuò)增產(chǎn)物的PCR-RFLP將經(jīng)PCR獲得的產(chǎn)物用15 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，確定為目的片段后，用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物用30 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，確定基因型。

采用的限制性內(nèi)切酶包括：MboⅠ、TaqⅠ、DdeⅠ。其中，TaqⅠ在65 ℃反應(yīng)，其他2種酶均在37 ℃反應(yīng)。

酶切反應(yīng)體系為10 μL，反應(yīng)時(shí)間為10～14 h，最佳反應(yīng)體系見(jiàn)表3。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

1.3.1遺傳多樣性指標(biāo)分析采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，通過(guò)POPGENE軟件分析常用遺傳多樣性指標(biāo)(基因型頻率、等位基因頻率、哈代-溫伯格平衡檢驗(yàn)、位點(diǎn)純合度、雜合度、有效等位基因數(shù)和多態(tài)信息含量)。

表1　秦川牛 MYH8基因的引物序列及相關(guān)信息

表2　PCR反應(yīng)程序

表3　酶切反應(yīng)體系

1.3.2相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)模型通過(guò)SPSS 19.0軟件的一般線性模型GLM分析群體中不同基因型個(gè)體與生長(zhǎng)性狀指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性。建立的統(tǒng)計(jì)模型如下：

Yijk=μ+Gj+Eijk

其中，Yijk為個(gè)體表型記錄；μ為總體均數(shù)；Gj為標(biāo)記的基因型效應(yīng)；Eijk為隨機(jī)誤差。

2結(jié)果與分析

2.1 MYH8基因的遺傳變異檢測(cè)

2.1.1 MYH8基因測(cè)序結(jié)果及序列分析PCR擴(kuò)增結(jié)果經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離出目的條帶，回收后送測(cè)序，結(jié)果顯示，F(xiàn)12處有2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，即秦川牛 MYH8基因在26 064 bp處存在T/C突變，在26 100 bp處存在C/G突變；F13處有1個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，即秦川牛 MYH8基因在26 094 bp處存在T/C突變(圖1)。將測(cè)序結(jié)果與牛 MYH8基因序列比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)3個(gè)多態(tài)位點(diǎn)均位于 MYH8基因的第33外顯子，且T26064C、C26100G、T26094C分別為MboⅠ、TaqⅠ和DdeⅠ的酶切位點(diǎn)。

2.1.2 MYH8基因的RFLP檢測(cè)結(jié)果分析 MYH8基因的F12、F13兩對(duì)引物經(jīng)PCR-RFLP分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)12區(qū)域的2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)中，T26064C經(jīng)MboⅠ酶切后呈現(xiàn)3種基因型，分別命名為T(mén)T型、TC型和CC型。其中，TT型酶切后產(chǎn)生3個(gè)條帶，大小分別為48、102和180 bp；TC型酶切后產(chǎn)生5個(gè)條帶，大小分別為32、48、102、148和180 bp；CC型酶切后產(chǎn)生4個(gè)條帶，大小分別為32、48、102和148 bp。32和48 bp條帶不清晰，102、148和180 bp條帶清晰，故可根據(jù)102、148和180 bp 3個(gè)條帶判斷不同個(gè)體基因型(圖2)。C26100G經(jīng)TaqⅠ酶酶切后呈現(xiàn)3種基因型，分別命名為GG型、GC型和CC型。其中，GG型酶切后只有1個(gè)條帶，大小為330 bp；GC型酶切后產(chǎn)生3個(gè)條帶，大小分別為147、183和330 bp；CC型酶切后產(chǎn)生2個(gè)條帶，大小分別為147和183 bp(圖3)。F13區(qū)域的多態(tài)位點(diǎn)T26094C經(jīng)DdeⅠ酶切后呈現(xiàn)3種基因型，分別命名為CC型、CT型和TT型。其中，CC型酶切后產(chǎn)生3個(gè)條帶，大小分別為57、67和467 bp；CT型酶切后產(chǎn)生5個(gè)條帶，大小分別為57、67、120、347和467 bp；TT型酶切后產(chǎn)生4個(gè)條帶，大小分別為57、67、120和347 bp。57、67和120 bp條帶不清晰，347和467 bp條帶清晰，故可根據(jù)347 bp和467 bp 2個(gè)條帶判斷不同個(gè)體基因型(圖4)。

A.T26064C；B.C26100G；C.T26094C

CK為空白對(duì)照　CK means blank control；下同　The same below

圖3　 MYH8基因C26100G位點(diǎn)PCR-RFLP電泳圖譜

圖4　 MYH8基因T26094C位點(diǎn)PCR-RFLP電泳圖譜

2.2 MYH8基因的群體遺傳結(jié)構(gòu)分析

共檢測(cè)163頭秦川牛個(gè)體的 MYH8基因，其群體的基因型頻率、基因頻率及部分遺傳參數(shù)見(jiàn)表4。由表4可知，F(xiàn)12處的2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)T26064C和C26100G均有3種基因型。其中，T26064C位點(diǎn)有2種等位基因T和C，且T等位基因分布頻率大于C；經(jīng)χ2適合性檢驗(yàn)可知，該位點(diǎn)的秦川牛群體處于Hardy-Weinberg不平衡狀態(tài)(P<0.05)，說(shuō)明可能受基因突變、漂變、外部基因交流等因素影響，人工選育對(duì)此多態(tài)位點(diǎn)的選擇壓力較大，平衡狀態(tài)已經(jīng)被打破。C26100G位點(diǎn)有2種等位基因C和G，且C等位基因分布頻率大于G；經(jīng)χ2適合性檢驗(yàn)可知，該位點(diǎn)的秦川牛群體處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P>0.05)，說(shuō)明人工選育對(duì)此多態(tài)位點(diǎn)的選擇壓力不強(qiáng)，在基因突變、漂變、人工選育等因素作用下仍處于平衡狀態(tài)。F13處多態(tài)位點(diǎn)T26094C有3種基因型，該位點(diǎn)有2種等位基因T和C，且T等位基因分布頻率大于C；經(jīng)χ2適合性檢驗(yàn)可知，該位點(diǎn)的秦川牛群體處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P>0.05)，說(shuō)明人工選育對(duì)此多態(tài)位點(diǎn)的選擇壓力不強(qiáng)。根據(jù)多態(tài)信息含量PIC的分類：PIC<0.25，為低度多態(tài)信息含量；0.250.5，為高度多態(tài)信息含量。由此可知，3個(gè)多態(tài)位點(diǎn)中，T26064C位點(diǎn)和C26100G位點(diǎn)為中度多態(tài)，揭示該位點(diǎn)在秦川牛群體中多態(tài)性較高，遺傳變異較大，選擇潛力也較大；T26094C位點(diǎn)為低度多態(tài)，揭示該位點(diǎn)在秦川牛群體中多態(tài)性低，選擇潛力小。

表4　秦川牛 MYH8基因突變區(qū)域的群體遺傳學(xué)參數(shù)

注：n表示秦川牛頭數(shù)。χ2是對(duì)該位點(diǎn)不同基因型分布的哈代-溫伯格平衡檢驗(yàn)。下同。

Note：nis the quantity of Qinchuan cattle. χ2is Hardy-Weinberg equilibrium test value of genotype distribution on the testing locus. The same below.

2.3 MYH8基因多態(tài)性與體尺性狀、胴體性狀的關(guān)聯(lián)分析

將秦川牛 MYH8基因發(fā)現(xiàn)的多態(tài)性位點(diǎn)與體尺性狀、胴體性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示(表5)，T26064C位點(diǎn)在6個(gè)生長(zhǎng)性狀指標(biāo)上，3種基因型間無(wú)顯著差異(P>0.05)，但在整個(gè)群體的3個(gè)胴體性狀中呈TC>TT>CC趨勢(shì)，表明TC基因型可能為胴體指標(biāo)的優(yōu)勢(shì)基因型。C26100G位點(diǎn)，在體高、腰角寬2個(gè)生長(zhǎng)性狀指標(biāo)上，3種基因型間無(wú)顯著差異(P>0.05)，而在體斜長(zhǎng)指標(biāo)上GG基因型個(gè)體的群體均值顯著高于GC、CC基因型個(gè)體；在空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率指標(biāo)上3種基因型之間均無(wú)顯著差異(P>0.05)，但在體高、空腹24 h宰前活體質(zhì)量指標(biāo)上，GG基因型個(gè)體的群體均值也高于GC、CC基因型個(gè)體。T26094C位點(diǎn)在6個(gè)生長(zhǎng)性狀指標(biāo)上，3種基因型間無(wú)顯著差異(P>0.05)，但在體高、腰角寬、空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率指標(biāo)上，CT基因型群體均值高于CC和TT，表明CT基因型可能為優(yōu)勢(shì)基因型。

表5　不同基因型與生長(zhǎng)性狀間關(guān)聯(lián)分析

注：數(shù)據(jù)為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”。 同列數(shù)據(jù)小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)。

Note:Data in the table are “Average ±SE”. Different letter after the same column mean significant difference atP<0.05.

3討 論

3.1 MYH8基因的遺傳變異

本研究利用DNA測(cè)序法結(jié)合PCR-RFLP技術(shù)，篩查 MYH8基因部分序列的SNP位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)該基因第33外顯子上存在3個(gè)SNP位點(diǎn)，分別在基因序列26 064、26 094和26 100 bp 3處。其中，基因序列26 064 bp處是胸腺嘧啶突變?yōu)榘奏?，即T>C，屬于轉(zhuǎn)換型堿基突變，且該突變?yōu)橥x突變；通過(guò)PCR-RFLP技術(shù)對(duì)該位點(diǎn)進(jìn)行MboⅠ酶切，發(fā)現(xiàn)存在T和C 2種等位基因，出現(xiàn)TT、TC和CC 3種基因型。26 094 bp處也是胸腺嘧啶突變?yōu)榘奏?，即T>C，屬于轉(zhuǎn)換型堿基突變，且該突變?yōu)殄e(cuò)義突變，由谷氨酰胺突變?yōu)榫彼?；通過(guò)PCR-RFLP技術(shù)對(duì)該位點(diǎn)進(jìn)行DdeⅠ酶切，發(fā)現(xiàn)存在T和C 2種等位基因，出現(xiàn)TT、CT和CC 3種基因型。26 100 bp處是胞嘧啶突變?yōu)轼B(niǎo)嘌呤，即C>G，屬于顛換型堿基突變，且該突變?yōu)殄e(cuò)義突變，由甘氨酸突變?yōu)榫彼?；通過(guò)PCR-RFLP技術(shù)對(duì)該位點(diǎn)進(jìn)行TaqⅠ酶切，發(fā)現(xiàn)存在C和G 2種等位基因，出現(xiàn)CC、GC和GG 3種基因型。

3.2 MYH8基因多態(tài)性對(duì)秦川牛體尺性狀、胴體性狀的影響

肌球蛋白重鏈(MHC)作為肌球蛋白的組成單位，在維持肌細(xì)胞的正常工作中發(fā)揮著重要作用。 MYH8基因作為MHC的一種亞基，對(duì)肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育有一定的影響。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)， MYH8基因可能與牛胴體性狀相關(guān)[18]。王麗君[19]采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)30月齡左右秦川牛組織中 MYH8基因表達(dá)量，發(fā)現(xiàn) MYH8基因在肌肉中的表達(dá)量較高，可能是影響秦川牛生長(zhǎng)性狀與胴體性狀的一個(gè)重要因素。也有研究表明， MYH8基因可能通過(guò)與非編碼基因 MIMT1的相互作用，調(diào)節(jié)印跡基因 PEG3表達(dá)，從而在牛胚胎的早期發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮調(diào)控作用[20-21]。本研究篩選秦川牛 MYH8基因部分外顯子的多態(tài)性，并對(duì) MYH8基因的多態(tài)性與體高、體斜長(zhǎng)、腰角寬、空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率等性狀的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)T26064C位點(diǎn)在體高、體斜長(zhǎng)、腰角寬、空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率指標(biāo)上，不同基因型間差異不顯著，但在空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率指標(biāo)上，TC基因型個(gè)體的群體均值高于其他基因型個(gè)體，呈TC>TT>CC的趨勢(shì)，表明TC在胴體性狀中可能為優(yōu)勢(shì)基因型；T26094C位點(diǎn)在6個(gè)性狀指標(biāo)上，不同基因型間差異也不顯著，但在體高、腰角寬、空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率指標(biāo)上，CT基因型個(gè)體的群體均值高于TT、CC基因型個(gè)體，表明CT可能為優(yōu)勢(shì)基因型；C26100G位點(diǎn)在體高、腰角寬、空腹24 h宰前活體質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率指標(biāo)上，不同基因型間差異不顯著，但在體斜長(zhǎng)指標(biāo)上，GG基因型個(gè)體的群體均值顯著高于GC、CC基因型個(gè)體，且體高、宰前活體質(zhì)量指標(biāo)上，GG基因型個(gè)體的群體均值也高于GC、CC基因型個(gè)體；說(shuō)明 MYH8基因?qū)η卮ㄈ馀ｓw尺性狀、胴體性狀存在一定影響，且T26064C位點(diǎn)上TC基因型個(gè)體、T26094C位點(diǎn)上CT基因型個(gè)體和C26100G位點(diǎn)上GG基因型個(gè)體的性狀相對(duì)優(yōu)良。以上結(jié)論可為秦川肉牛選育、留種提供參考，而T26064C位點(diǎn)上TC基因型個(gè)體、T26094C位點(diǎn)上的CT基因型個(gè)體及C26100G位點(diǎn)上的GG基因型個(gè)體是否需要加強(qiáng)選育，有待進(jìn)一步研究。

本研究在一定程度上拓展秦川牛 MYH8基因多態(tài)性研究，同時(shí)將其多態(tài)性與秦川牛體尺、胴體性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，為后期秦川?；虻难芯刻峁┮恍├碚撘罁?jù)。至于能否將發(fā)現(xiàn)的 MYH8基因多態(tài)位點(diǎn)作為秦川牛相關(guān)性狀的重要分子標(biāo)記，還需要研究更多個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)Reference：

[1]蘇艷紅,周越,王瑞元.運(yùn)動(dòng)與肌球蛋白重鏈研究綜述[J].天津體育學(xué)院學(xué)報(bào),2008,23(4): 328-332.

SU Y H,ZHOU Y,WANG R Y.The review of training and myosin heavy chain [J].JournalofTianjinInstituteofPhysicalEducation,2008,23(4): 328-332 (in Chinese with English abstract).

[2]余蕾,樊小力.骨骼肌肌球蛋白重鏈研究近展[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2014,43(9): 1259-1261.

YU L,FAN X L.Progress on the study of myosin heavy chain of skeletal muscles[J].ShaanxiMedicalJournal,2014,43(9): 1259-1261(in Chinese).

[3]SCHIAFFINO S,REGGIANI C.Molecular Diversity of myofibrillar proteins gene regulation and functional significance[J].PhysiologyReview,1996,72(6): 371-423.

[4]BALDWIN K M,HADDAD F.Plasticity in skeletal,cardiac,and smooth muscle invited review:effects of different activity and inactivity paradigms on myosin heavy chain gene expression in striated muscle[J].JournalofAppliedPhysiology,2001,90(1):346-357.

[5]龔亮,鐘國(guó)華,任珍珍,等.小菜蛾肌球蛋白重鏈部分cDNA序列克隆、表達(dá)概況及分析[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,32(1):85-89.

GONG L,ZHONG G H,REN ZH ZH,etal.Cloning,expression profile and sequence analysis of partial cDNA coding for myosin heavy chain from the diamondback moth,Plutellaxylostella[J].ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis,2010,32(1): 85-89(in Chinese with English abstract).

[6]ZHANG M,LIU Y L,FU CH Y,etal.Expression ofMYHCgenes,composition of muscle fiber type and their association with intramuscular fat,tenderness in skeletal muscle of Simmental hybrids[J].MolecularBiologyReports,2014,41(2): 833-840.

[7]李錫癸.運(yùn)用芯片技術(shù)對(duì)CMT2L轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行全基因組差異表達(dá)分析[D].長(zhǎng)沙: 中南大學(xué),2013.

LI X K.Analysis of the whole genome expression of CMT2L transgenic mice using gene chip technology[D].Changsha: Central South University,2013(in Chinese with English abstract).

[8]焦青貞.豬骨骼肌肌肉肥大和肌纖維轉(zhuǎn)化通路中相關(guān)功能基因的表達(dá)規(guī)律研究[D].武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

JIAO Q ZH.Gene expression studies of pig postnatal skeletal muscle hypertrophy and myofiber transformation pathway[D].Wuhan: Huazhong Agricultural University,2009(in Chinese with English abstract).

[9]羅建杰.日糧添加不同益生菌對(duì)肉仔雞益生作用分子研究機(jī)制[D].北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2013.

LUO J J.The probiotic mechanism of several diatery probiotics on broiler[D].Beijing: Chinese Academy of Agricultural Sciences,2013(in Chinese with English abstract).

[10]BRYSON-RICHARDSON R J,DAGGETT D F,CORTES F,etal.Myosin heavy chain expression in zebrafish and slow muscle composition[J].DevelopmentalDynamics,2005,233(3): 1018-1022.

[11]MUNAZZAH T,ROMANA I,ASIMUL I,etal.Structural characterization,homology modeling and docking studies of ARG674 mutation in MYH8 gene associated with trismus-pseudocamptodactyly syndrome[J].LettersinDrugDesign&Discovery,2014,11(10): 1177-1187.

[12]張鶯鶯,昝林森,王洪寶.利用基因芯片技術(shù)篩選秦川牛公牛與閹牛肌肉組織差異表達(dá)基因[J].遺 傳,2010,32(11): 1166-1174.

ZHANG Y Y,ZAN L S,WANG H B.Genome array on differentially expressed genes of muscle tissue in intact male and castrated Qinchuan cattle[J].Hereditas,2010,32(11): 1166-1174(in Chinese with English abstract).

[13]張鶯鶯.中國(guó)主要牛種肌肉組織基因表達(dá)譜特征比較分析[D].陜西楊凌: 西北農(nóng)林科技大學(xué),2010.

ZHANG Y Y.Gene expression patterns analysis and the comparative analysis on transcriptional profiling of muscle tissues from Chinese major species of cattle[D].Yangling Shaanxi: Northwest A&F University,2010(in Chinese with English abstract).

[14]趙春平.創(chuàng)傷性應(yīng)激對(duì)安格斯牛肉品質(zhì)影響機(jī)制研究[D].陜西楊凌: 西北農(nóng)林科技大學(xué),2012.

ZHAO CH P.Mechanism analysis on beef quality variation induced by acute stress[D].Yangling Shaanxi: Northwest A&F University,2012(in Chinese with English abstract).

[15]ZHANG Y,CONG X,WANG A,etal.Identification of the gene as a skeletal muscle-specifically expressed gene and a novel regulator of satellite cell differentiation in cattle[J].JournalofAnimalScience,2014,92(8): 3284-3290.

[16]ZHAO CH P,ZAN L S,WANG Y,etal.Functional proteomic and interactome analysis of proteins associated with beef tenderness in Angus cattle[J].LivestockScience,2014,161: 201-209.

[17]薩姆布魯克 J,拉塞爾D W.分子克隆實(shí)驗(yàn)指南[M].黃培堂,譯.北京: 科學(xué)出版社,2002.

SAMBROOK J,RUSSELL D W.Molecular Cloning:a Laboratory Manual[M].HUANG P T,Trans.Beijing: Science Press,2002 (in Chinese).

[18]WANG L J,LIU X L,WANG H L,etal.Expression analysis,single nucleotide polymorphisms and combined genotypes in candidate genes and their associations with growth and carcass traits in Qinchuan cattle[J].MolecularBiologyReports,2013,40 (3): 2335-2346.

[19]王麗君.秦川牛生長(zhǎng)與胴體性狀相關(guān)候選基因的表達(dá)譜,遺傳多樣性及其關(guān)聯(lián)分析[D].陜西楊凌: 西北農(nóng)林科技大學(xué),2013.

WANG L J.Expression patterns,genetic diversity and correlation analysis with related traits of candidate genes in Qinchuan beef cattle[D].Yangling Shaanxi: Northwest A&F University,2013(in Chinese with English abstract).

[20]HELI V,STEFAN B,JUHANI T,etal.Fetal growth restriction caused by MIMT1 deletion alters brain transcriptome in cattle[J].InternationalJournalofDevelopmentalNeuroscience,2013,31 (7): 463-467.

[21]KIM J ,ANNA K,YONATAN G,etal.Identification of many microRNAs that copurify with polyribosomes in mammalian neurons[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2004,101(1): 360-365.

Received 2015-05-13Returned2015-07-09

Foundation itemNational High Technology Research and Development Program “863” Project(No.2011AA100307); the Shaanxi Province Science and Technology Co-ordinating Innovative Plan Projects(No.2015KTCL02-11); Postdoctoral Fund Project(No.2015M570856); College Students’ Scientific and Technological Innovation Projects(No.201310712033).

First authorDUAN Pengjie,male,undergraduate student. Research area:animal science.E-mail:1360483655@qq.com

(責(zé)任編輯：郭柏壽Responsible editor:GUO Baishou)

Polymorphism in MYH8 Gene and Association with Growth Traits of Qinchuan Beef Cattle

DUAN Pengjie,ZHANG Huilin,LIU Yu,YU Xiangyu,LIU Kunpeng,TA Yanyun,QI Chenyang,LIU Xiaolin and HE Hua

(Key Laboratory of Agricultural Molecular Biology in Shaanxi, College of Animal Science and Technology,Northwest A&F University,Yangling Shaanxi712100,China)

AbstractThe aim of the study is to research polymorphism of MYH8 and its association with growth traits of Qinchuan beef cattle,and to provide a theoretical basis for the improvement of Qinchuan beef cattle. 163 Qinchuan cattle were used to detected polymorphism of MYH8 by means of DNA sequencing and PCR-RFLP. The association analysis was conducted between MYH8 gene and growth and carcass traits of Qinchuan cattle with SPSS 19.0 software. The results showed that three SNPs,including one synonymous mutation at 26 064(T>C),two mis-sense mutations at 26 094(T>C) and 26 100(C>G) respectively,were detected in Exon 33 of MYH8 gene. The association analysis indicated that only GG genotype at 26 100 (C>G) had longer body length than GC and CC genotypes,no significant association was detected between other genotypes and growth traits,however,some genotypes tend to have better performance,namely TC genotype at 26 064 (T>C) and CT genotype at 26 094 (T>C),further analysis in larger group may be helpful to classified.The result showed that MYH8 had effect on growth traits in Qinchuan beef cattle.

Key wordsQinchuan beef cattle; MYH8 ; PCR-RFLP; Polymorphism; Association analysis

收稿日期：2015-05-13修回日期：2015-07-09

基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(2011AA100307)；陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃(2015KTCL02-11)；博士后基金(2015M570856)；大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目(201310712033)。

通信作者：張慧林，女，副教授，主要從事動(dòng)物遺傳育種教學(xué)與科研工作。E-mail：Huiling@163.com

中圖分類號(hào)S823.12

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1004-1389(2016)01-0001-08

Corresponding authorZHANG Huilin,female,associate professor. Research area:animal genetics and breeding.E-mail:Huiling@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版日期：2016-01-07

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20160107.2053.002.html

第一作者：段鵬杰，男，本科生，動(dòng)物科學(xué)專業(yè)。E-mail：1360483655@qq.com