涂畫(huà) 陳雪品 成曦爽 石亞靜 高翔 郭蘭 齊亞娟 韓淑英

摘要：文章探討了蕎麥花葉黃酮對(duì)糖尿病GK大鼠腎組織的保護(hù)作用及其機(jī)制，并以GK大鼠為糖尿病模型，將GK大鼠隨機(jī)分為模型組（MC）、FBFL組（FBFL），另設(shè)同源Wistar大鼠為正常組（NC），結(jié)果表明：FBFL對(duì)糖尿病GK大鼠腎臟具有保護(hù)作用，可能是由于FBFL的降血糖作用或是由于其降低腎系數(shù)，降低血中尿酸、尿素、肌酐的水平，減緩了對(duì)腎組織損傷。

關(guān)鍵詞：蕎麥花葉黃酮；糖尿病；腎病；GK大鼠；Wistar大鼠 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類(lèi)號(hào)：R285 文章編號(hào)：1009-2374（2016）17-0058-02 DOI：10.13535/j.cnki.11-4406/n.2016.17.027

糖尿病腎病是糖尿病常見(jiàn)的并發(fā)癥，是微血管病變的一種，發(fā)病機(jī)制尚不清楚，一般認(rèn)為是由于高血糖增加腎臟的血流量導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)率增高所致。前期研究表明，蕎麥花葉黃酮可以降血糖、血脂改善胰島素抵抗，上調(diào)IRS-2、PI3K蛋白表達(dá)等作用。因此，本實(shí)驗(yàn)以GK大鼠為糖尿病模型，通過(guò)血糖變化、腎系數(shù)、各項(xiàng)生化指標(biāo)以及腎組織行HE染色觀察FBFL對(duì)腎臟的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物。22只雄性SPF級(jí)糖尿病GK大鼠[購(gòu)自上海斯萊克斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司，許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002]，體重310～340g，24～25周齡；10只雄性同源SPF級(jí)Wistar大鼠[購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0002]為正常對(duì)照組（NC），體重320～340g，20～22周齡。

1.1.2 藥物與試劑。蕎麥花葉為甜蕎麥子粒收割后自然干燥的花葉（來(lái)自?xún)?nèi)蒙古通遼市庫(kù)倫旗），F(xiàn)BFL的制備見(jiàn)參考文獻(xiàn)[4]；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)0080-9705）。

1.1.3 主要儀器。電子天平（型號(hào)FA2104N，上海菁海儀器有限公司）；恒溫箱（型號(hào)TO-2123，上海尚域環(huán)境儀器有限公司）；高速低溫離心機(jī)（型號(hào)5180R，德國(guó)Eppendorf公司）；TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；全自動(dòng)生化儀；其他實(shí)驗(yàn)器材及實(shí)驗(yàn)用品由河北省慢性疾病重實(shí)驗(yàn)室和唐山市慢性病臨床基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的確定、分組及給藥。挑選大鼠隨機(jī)血糖及糖負(fù)荷2小時(shí)血糖均高于11.1mmol·L-1，即認(rèn)為已形成糖尿??；剔除2只隨機(jī)血糖未達(dá)到糖尿病標(biāo)準(zhǔn)的GK大鼠，將剩下的20只隨機(jī)分為兩組，分別為模型組（MC）、FBFL組（FBFL）；另外10只Wistar大鼠設(shè)為正常組（NC）。NC與MC灌胃純凈水10ml·kg-1；FBFL灌胃劑量為FBFL的水溶液100mg·kg-1；均于華北理工大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)屏障實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)，以每籠5只進(jìn)行飼養(yǎng)。各組均在上午9∶00～10∶00點(diǎn)灌胃給藥，每天1次，連續(xù)6W。

1.2.2 血糖測(cè)定。給藥后30min后，用羅氏血糖儀尾靜脈取血測(cè)定血糖，每周一次。

1.2.3 腎功能指標(biāo)檢測(cè)。灌胃給藥6W后，大鼠禁食12h，用10%水合氯醛以3mL/kg劑量腹腔注射麻醉大鼠，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，放置2h后4℃2000r/min離心20min，吸取上清，用本實(shí)驗(yàn)全自動(dòng)生化儀測(cè)血清中尿酸（UA）、尿素（UREA）、肌酐（CREA）。

1.2.4 腎系數(shù)的測(cè)定。取雙側(cè)腎臟，用濾紙吸干表面殘留血液，稱(chēng)重。腎系數(shù)（%）=兩側(cè)腎重和（g）/體重（g）×100%。

1.2.5 腎組織病理學(xué)檢查。取部分腎組織浸泡于4%多聚甲醛中，固定24h。用于石蠟包埋、切片腎組織石蠟切片4μm常規(guī)脫蠟入水，行HE染色。光鏡下觀察腎組織病理改變。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。應(yīng)用SPSS17.0處理數(shù)據(jù)。結(jié)果以±s表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較使用LSD法，P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀態(tài)及隨機(jī)血糖的變化

MC、H-FBFL組大鼠較NC組明顯出現(xiàn)多飲、多食、多尿癥狀；體型瘦小，毛色暗沉無(wú)光。MC的血糖高于NC隨機(jī)血糖一倍多，平均值達(dá)到13.38mmol/L，NC、MC各時(shí)間段血糖水平無(wú)明顯變化，于第4周開(kāi)始，F(xiàn)BFL組隨機(jī)血糖低于模型組（P<0.01），并且隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)，血糖水平降低更明顯，說(shuō)明FBFL有能降低GK大鼠血糖的作用。如表1所示。

2.2 腎系數(shù)、血清生化指標(biāo)檢測(cè)

MC、FBFL組GK大鼠腎系數(shù)與NC組存在顯著性差異（P<0.01），F(xiàn)BFL組腎系數(shù)低于MC組，存在顯著性差異（P<0.05）；GK大鼠UA、UREA、CREA均與NC組存在顯著性差異（P<0.01），F(xiàn)BFL組的UA、UREA、CREA均低于MC組（P<0.01）。如表2所示。

2.3 HE染色

NC大鼠腎組織細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)完整，腎小球飽滿(mǎn)、規(guī)則，腎小管排列整齊緊密，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)正常；與NC相比，MC腎小球出現(xiàn)不同程度的萎縮現(xiàn)象，腎小管上皮細(xì)胞橫切面空洞，細(xì)胞核缺失，腎小管之間間隙大，且可見(jiàn)空泡樣水腫，部分腎間質(zhì)可見(jiàn)細(xì)胞纖維化；與MC相比，F(xiàn)BFL組腎小球飽滿(mǎn)，腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞緊密，少見(jiàn)水腫現(xiàn)象，未見(jiàn)腎間質(zhì)纖維化。

3 討論

2型糖尿?。═2DM）是機(jī)體胰島素功能減退或胰島素抵抗所引起的高糖、高脂一種代謝紊亂疾病，老年人為高發(fā)病率者。近期研究表明，糖尿病所致的腎功能障礙占到30%，是糖尿病最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一。血清中生化指標(biāo)尿素、肌酐是臨床廣泛使用于腎小球?yàn)V過(guò)的功能指標(biāo)，由于腎臟有強(qiáng)大代償功能在腎臟損傷的早期并沒(méi)有明顯變化，一旦其測(cè)定結(jié)果超出正常參考范圍就可能已經(jīng)出現(xiàn)不可逆轉(zhuǎn)的嚴(yán)重?fù)p傷。病程中GK大鼠伴有高血糖的同時(shí)，出現(xiàn)腎系數(shù)的增大，血清中尿素、尿酸、肌酐值增高以此可以說(shuō)明，糖尿病GK大鼠病程中伴有糖尿病腎病的發(fā)生，但FBFL對(duì)其有抑制作用，降低腎系數(shù)，降低血尿素、尿酸和肌酐水平，因此FBFL對(duì)GK大鼠糖尿病腎病具有保護(hù)作用。

腎臟HE染色可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比較，模型組腎小球出現(xiàn)不同程度的萎縮現(xiàn)象，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性明顯，細(xì)胞核缺失，動(dòng)脈管壁明顯增厚，水腫現(xiàn)象明顯；與MC相比，F(xiàn)BFL組腎小球飽滿(mǎn)，腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞緊密，動(dòng)脈管壁厚度正常，少見(jiàn)水腫現(xiàn)象，未見(jiàn)腎間質(zhì)纖維化，說(shuō)明FBFL能減緩糖尿病對(duì)腎組織的損害程度。

本研究采用的GK大鼠是被國(guó)際上公認(rèn)的典型非肥胖型2型糖尿病模型，平時(shí)表現(xiàn)為多飲多食多尿癥狀，通過(guò)灌胃給藥干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)FBFL能夠降低GK大鼠血糖，且隨時(shí)間延長(zhǎng)血糖下降明顯，此外實(shí)驗(yàn)還證明了FBFL能降低血中肌酐尿素尿酸的產(chǎn)生，減輕糖尿病所引起的腎組織的損傷。因此FBFL對(duì)腎臟具有保護(hù)作用，可能是由于FBFL的降血糖作用抑制了高血糖、肌酐、尿素和尿酸對(duì)腎組織的損害，或是由于FBFL具有保護(hù)GK大鼠腎組織的作用，減少水腫及纖維化現(xiàn)象，從而減少了糖尿病腎病發(fā)生的幾率。

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作者簡(jiǎn)介：涂畫(huà)（1994-），女，湖南岳陽(yáng)人，華北理工大學(xué)藥學(xué)院學(xué)生，研究方向：中藥藥學(xué)；韓淑英（1959-），女，華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，碩士，研究方向：中藥防治糖尿病及心血管疾病。

（責(zé)任編輯：王 波）