伍文彬，謝淑玲，雷鳴1,，張廷模，張文文

·炮制制劑·

益智安神口服液提取工藝研究

伍文彬1,2*，謝淑玲2，雷鳴1,2，張廷模2，張文文3

目的：優(yōu)選益智安神口服液的提取工藝。方法：以梔子苷含量和固含物的綜合評(píng)分為考察指標(biāo)，以揮發(fā)油提取量為考察因素設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，以溶媒量、提取時(shí)間、提取次數(shù)等3個(gè)因素設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)選益智安神口服液提取工藝。結(jié)果：最優(yōu)工藝為益智、郁金、川芎藥材加6倍量水，提取4 h，收集揮發(fā)油。再將藥渣與三七、梔子等藥材用10倍藥材量的水提取2次，每次2 h。3批樣品驗(yàn)證試驗(yàn)的梔子苷提取量平均為3313.90 mg，RSD=2.10%（n=3），固含物總量平均為73.12 g，RSD=2.36%（n=3）。結(jié)論：按照研究的優(yōu)選工藝參數(shù)能夠生產(chǎn)出合格的產(chǎn)品，且樣品性質(zhì)穩(wěn)定，本研究工藝可作為益智安神口服液的制備工藝。

益智安神口服液；制備工藝；梔子苷；固含物；單因素試驗(yàn)；正交試驗(yàn)

益智安神口服液為成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院老年病科多年臨床使用經(jīng)驗(yàn)方，由益智、三七、川芎、郁金、梔子等組成，具有補(bǔ)腎安神、開郁逐痰、活血通絡(luò)之功效，臨床療效確切，主要用于年老體虛、久病耗損等引起的神情淡漠、智能減退、反應(yīng)遲鈍、善忘、腰膝酸軟、痰多吐涎、面色晦暗或口唇爪甲青紫、甚則二便失禁，舌暗，脈澀等，屬于輕度認(rèn)知障礙、阿爾茨海默病見以上表現(xiàn)者。由于本方臨床服用采用傳統(tǒng)水煎煮的方法，存在攜帶不便、服藥量較大、口感不佳等缺點(diǎn)，且制備工藝不一、質(zhì)量控制缺乏，嚴(yán)重影響該品種在臨床中廣泛使用。本研究在保障有效性的基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代制劑技術(shù)，將其制成安全有效、質(zhì)量可控、服用方便的口服液。為尊重臨床應(yīng)用實(shí)際，本研究各藥材仍以水提法為主要工藝路線，通過單因素正交設(shè)計(jì)結(jié)合正交試驗(yàn)的方法，以梔子苷含量和固含物為指標(biāo)，對益智安神口服液提取工藝進(jìn)行研究，為益智安神口服液的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

依利特UV230Ⅱ型高效液相色譜儀（DAD檢測器，二元泵；大連依利特儀器有限公司）；DZTW型電子調(diào)溫電熱套（天津市靜?？h工興電器廠）；BSA224S-CW電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；HH-S6型恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）。

益智、三七、川芎、郁金、梔子等購自于四川省中藥材公司，經(jīng)四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥劑科何林主任藥師鑒定，符合2015年版《中國藥典》相關(guān)項(xiàng)下要求；梔子苷（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號(hào)：097F-59P7）；乙腈、甲醇均為色譜純（GR，SIGMA-ALDRICH）。

2 方法與結(jié)果

2.1 固含物測定

按正交試驗(yàn)所得的提取液濃縮至60 mL左右，精密吸取3 mL，移至恒重蒸發(fā)皿中，水浴蒸干至膏狀，殘?jiān)儆?05 ℃烘箱中干燥3 h，取出，迅速移至干燥器中冷卻至室溫，精密稱定質(zhì)量。

2.2 梔子苷含量測定

2.2.1 色譜條件 采用Agilent C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈-水（15：85）為流動(dòng)相，檢測波長為238 nm，流速為1 mL．min-1，進(jìn)樣量10 μL。

2.2.2 溶液的制備 對照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對照品4.03 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.403 g．L-1的對照品溶液。

供試品溶液的制備：分別取益智安神口服液提取液1 mL，置于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，待用。

陰性樣品制備：按處方組成與比例，除去梔子藥材，按工藝要求制得不含梔子的益智安神口服液陰性樣品，再按照方法制成陰性樣品溶液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取對照品溶液，進(jìn)樣分析，測定峰面積。以峰面積積分為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得回歸方程為y=1222.2x-33.44（r2=0.9994），表明梔子苷在0.403～2.015 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取0.0806 g．L-1梔子苷對照品溶液10 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，平行測定6次，記錄峰面積，梔子苷平均峰面積RSD為0.2431%（n =6），表明儀器精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液分別在0.5，1，1.5，2h進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，梔子苷峰面積RSD為0.6385%，表明供試品溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密移取同一提取液6份，按照“2.2.2”項(xiàng)下的方法處理，分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積。梔子苷峰面積RSD為0.724%（n=6），表明樣品處理方法重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收率 精密吸取3份已知梔子苷含量為13.98 g．L-1口服液10 mL，稀釋成100倍，取2 mL稀釋液，再加入0.12019 g．L-1的梔子苷對照品2 mL，混合，搖勻，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測試，梔子苷的平均加樣回收率為100%，RSD為0.2757%（n=3）。

表1 加樣回收率

2.2.8 樣品梔子苷含量測定 精密吸取正交試驗(yàn)安排表下各樣品適量，按照供試品溶液樣品處理方法處理后，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。

2.3 揮發(fā)油提取工藝優(yōu)選

處方中益智、川芎及郁金含揮發(fā)油[1-4]，其揮發(fā)油的作用廣泛，應(yīng)先對其進(jìn)行提取。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，稱取益智50 g，加入1500 mL水，浸泡一小時(shí)后分別加入郁金100 g，繼續(xù)浸泡2 h后，再分別加入川芎100 g，接上冷凝管和揮發(fā)油提取器開始加熱提取，收集揮發(fā)油，并記錄時(shí)間及揮發(fā)油收集的量。結(jié)果顯示，從第4 h開始，隨著時(shí)間的增加，揮發(fā)油的量不再增加，故益智、川芎、郁金揮發(fā)油提取最佳時(shí)間為4 h。

表2 提取時(shí)間的選擇結(jié)果

2.4 水提取工藝參數(shù)研究

2.4.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以水為提取溶媒，選取加溶媒量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）為考察因素，以梔子苷含量及固含物量為考察指標(biāo)（二者的加權(quán)比例設(shè)定為7：3），采用L9（34）正交表安排試驗(yàn)。提取工藝優(yōu)選因素水平見表3。稱取處方量三七、梔子等[5]，與揮發(fā)油提取后的藥渣，按照表3安排試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)束后收集提取液，混勻并測定梔子苷及固含物。

表3 提取工藝因素水平表

2.4.2 結(jié)果分析 通過方差分析表可知，各因素影響順序?yàn)镃＞A＞B，其中提取次數(shù)、溶媒用量對提取效果顯著性影響，其它因素對總權(quán)重顯著性差異不顯著。根據(jù)正交試驗(yàn)直觀分析，確定藥材的最佳提取工藝為A3B3C3，但考慮到B因素顯著性差異不顯著，實(shí)驗(yàn)時(shí)間過長，故選擇最佳工藝條件為A3B2C3，即加10倍量水，提取2次，每次提取時(shí)間2 h。

表4 益智安神口服液正交試驗(yàn)分析

表5 正交試驗(yàn)方差分析表

2.4.3 方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 稱取處方量益智、郁金、川芎，按比例加水煎煮，收集揮發(fā)油，再稱取處方量三七、梔子等[4]，分別與揮發(fā)油提取后的藥渣，按最佳提取工藝條件A3B2C3進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6，說明優(yōu)選工藝的提取工藝穩(wěn)定可行、重復(fù)性好。因此，確定最佳提取工藝為A3B2C3。

表6 驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本方為臨床經(jīng)驗(yàn)方，在臨床使用時(shí)直接用水煎服，在煎煮的過程中，揮發(fā)油可能隨水蒸氣揮發(fā)而丟失。我們根據(jù)不同藥物所含成分的化學(xué)性質(zhì)，在工藝研究過程中，采用揮發(fā)油提取。據(jù)報(bào)道，益智揮發(fā)油具有抑制乙酰膽堿酯酶活性[6]、抗氧化[7]、增加神經(jīng)遞質(zhì)釋放[8]等作用，川芎揮發(fā)油具有對抗中樞神經(jīng)缺血損傷、改善學(xué)習(xí)記憶能力等作用[9]，因此，在工藝研究過程中，對揮發(fā)油進(jìn)行富集利用，有利于提高制劑臨床療效。

益智安神口服液為成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床協(xié)定處方，前期藥理研究證實(shí)[5]，益智安神液可改善東莨菪堿致記憶獲得性障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，有較好的益智作用。我們在提取工藝研究過程中，以梔子苷提取量及固含物量作為指標(biāo)對提取工藝參數(shù)進(jìn)行篩選，固含物可以從宏觀上表征提取液中藥物成分的量，以梔子苷個(gè)體成分去表征化學(xué)成分提取量，以加權(quán)評(píng)分的方式進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，從而達(dá)到對提取工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)的目的。通過綜合考察選取的提取工藝重復(fù)性好，可操作性強(qiáng)。

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(責(zé)任編輯：何瑤)

Research on extraction process of Yizhi Anshen oral liquid

/WU Wen-bin1,2, XIE Shu-ling2, LEI Ming1,2, ZHANG Ting-mo2, ZHANG Wen-wen3//(1. Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, Sichuan; 2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan;3.Chengdu University, Chengdu 610044, Sichuan)

Objective:To optimize the extraction process of Yizhi Anshen oral liquid.Method:Geniposide content and composite score of solid content were selected as indexes, and extraction volume of volatile was selected as factor to design single factor experiment. The amount of solvent, time and times of extraction were considered as the indicators to optimize the extraction technology of Yizhi Anshen oral liquid by L9(34) orthogonal test.Result:The optimum extraction process was using six volume water of Yizhi, Yujin and Chuanxiong, extracting 4 hours, and collecting the volatile; then mixing the dregs with Sanqi and Zhizi, extracting with 10 volume water 2 times, 2 hours for each time. The average extraction of geniposide was 3313.90 mg with relative standard deviation of 2.10% (n=3). The average content of solid content was 73.12 g with relative standard deviation of 2.36%(n=3).Conclusion:Qualified and stabilized production can be made by the optimized extraction process which can be applied as the preparation technology of Yizhi Anshen oral liquid.

Yizhi Anshen oral liquid；preparation process；geniposide；solid content；single factor test；orthogonal experiment

R 283.6

A

1674-926X(2016)05-008-04

1.成都市科技惠民計(jì)劃項(xiàng)目（益智安神液工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究）；2.成都市科技計(jì)劃項(xiàng)目（益智安神液治療老年性癡呆的應(yīng)用基礎(chǔ)研究，12DXYB307JH）

1 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 四川 成都 610072；

2 成都中醫(yī)藥大學(xué) 四川 成都 610075；

3成都大學(xué) 四川 成都 610044

伍文彬（1981-），男，博士，博士后，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)藥防治老年病基礎(chǔ)與臨床研究

Tel：028-87765509 Email：wwb1201@vip.sina.com

2016-01-07