唐德智

摘要：目的 建立HPLC波長切換法測(cè)定銀花芒果片中芒果苷、橙皮苷含量的方法。方法 采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 ?m）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，柱溫30 ℃，波長切換時(shí)間序列采樣（0～20 min為258 nm，20～50 min為283 nm）。結(jié)果 芒果苷進(jìn)樣量在0.042～0.761 ?g 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 9），平均回收率為99.86%，RSD=1.5%（n=9）；橙皮苷進(jìn)樣量在0.076～1.361 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 8），平均回收率為99.91%，RSD=0.7%（n=9）。結(jié)論 本方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：銀花芒果片；芒果苷；橙皮苷；波長切換法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.025

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2016）07-0098-03

HPLC Wavelength Switching Simultaneous Determination for the Contents of Mangiferin and Hesperidin in Yinhua Mangguo Tablets TANG De-zhi （Guangxi Nanning Institute for Food and Drug Control， Nanning 530021， China）

Abstract： Objective To establish an HPLC method of wavelength switching simultaneous determination for the contents of mangiferin and hesperidin in Yinhua Mangguo Tablets. Methods Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 （4.6 mm×150 mm， 5 ?m） column was used. The mobile phase was methanol-water containing 0.2% phosphoric acid with gradient elution mode at the flow rate of 1.0 mL/min； the detection wavelength was 258 nm （0–20 min） for mangiferin， 283 nm （20–50 min） for hesperidin. Results Mangiferin had a good linearity in the range of 0.042–0.761 ?g， and the average recovery was 99.86%， with RSD of 1.5% （n=9）. Hesperidin had a good linearity in the range of 0.076–1.361 ?g， and the average recovery was 99.91%， with RSD of 0.7% （n=9）. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible， which can be used to the quality control of Yinhua Mangguo Tablets.

Key words： Yinhua Mangguo Tablets； mangiferin； hesperidin； wavelength switching

銀花芒果片是由芒果葉、陳皮、蒲公英、桔梗、金銀花、百部、甘草等制成的中藥成方制劑，有疏風(fēng)清熱、止咳化痰的功效，臨床用于外感風(fēng)熱所致的咽痛、喉癢、咳嗽、上呼吸道感染、急性支氣管炎等癥，收載于《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科肺系（二）分冊(cè)》。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為測(cè)定陳皮中的橙皮苷含量，但對(duì)處方中另一味主要藥物芒果葉只有薄層鑒別實(shí)驗(yàn)，未進(jìn)行定量測(cè)定，難以有效全面地反映制劑的質(zhì)量。芒果葉具有止咳化痰的功效，芒果苷是其中的主要活性成分[1]。本試驗(yàn)選擇芒果苷和橙皮苷為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用HPLC波長切換法測(cè)定銀花芒果片中芒果苷和橙皮苷的含量。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀（美國沃特斯公司），S180H型超聲波清洗器（德國Elma公司），XS205DU型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），UV-2550型紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津公司）。

芒果苷對(duì)照品（批號(hào)110607-200402）、橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)110721-201316，純度95.3%），中國食品藥品檢定研究院；銀花芒果片（廣西南珠制藥有限公司，市售藥品，規(guī)格0.5 g/片，批號(hào)20130915、20140501、20140601、20140624、20140802）；甲醇、磷酸為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（5 ?m，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相A為甲醇、B為0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫（0～15 min，25%A；15～20 min，25%～35%A；20～50 min，35%A）；檢測(cè)波長：0～20 min為258 nm（芒果苷），20～50 min為283 nm（橙皮苷）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 ?L。

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備

取芒果苷和橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，置同一50 mL棕色量瓶中，加甲醇制成1 mL含芒果苷84.6 ?g、橙皮苷151.2 ?g的混合對(duì)照品溶液，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品10片，除去包衣，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加入50%甲醇約20 mL，超聲處理（功率300 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45 ?m微孔濾膜過濾，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按處方分別制備缺芒果葉、缺陳皮的陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.5 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取上述對(duì)照品混合溶液的稀釋液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液10 ?L，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與供試品溶液中芒果苷和橙皮苷相同的保留時(shí)間處無干擾峰。色譜圖見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分別置10 mL棕色量瓶中，加甲醇定容，搖勻，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：芒果苷Y=4.235×106X-8.429×104，r=0.999 9（n=6）；橙皮苷Y=1.718×106X-2.427×105，r=0.999 8（n=6）。結(jié)果表明，芒果苷在0.042～0.761 ?g、橙皮苷在0.076～1.361 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果芒果苷與橙皮苷峰面積的RSD分別為1.3%、1.5%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（20140601）的供試品溶液，按上述色譜條件，分別在0、1、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果芒果苷與橙皮苷的峰面積RSD分別為1.6%、1.3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品（20140601）0.5 g，精密稱定6份，分別制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)得樣品中芒果苷平均含量為2.09 mg/g（RSD=1.2%），橙皮苷平均含量為3.74 mg/g（RSD=1.3%），表明該方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

精取稱取已測(cè)定含量的同一批樣品（批號(hào)20140601）0.25 g，共9份，置25 mL棕色量瓶中，分別精密加入混合對(duì)照品溶液（芒果苷0.106 6 mg/mL，橙皮苷0.191 4 mg/mL）4.0、5.0、6.0 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果芒果苷和橙皮苷的平均回收率分別為99.86%、99.91%，RSD分別為1.5%、0.7%，見表1、表2。

2.11 樣品測(cè)定

取5個(gè)批號(hào)銀花芒果片粉末，每批平行3份，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中芒果苷和橙皮苷的含量，結(jié)果見表4。

3 討論

現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)陳皮中的橙皮苷進(jìn)行了定量測(cè)定，而無處方中另一主要藥物芒果葉的含量測(cè)定方法。芒果葉具有止咳化痰的功效，其功效與銀花芒果片疏風(fēng)清熱、止咳化痰的功效相一致。為有效保障藥品質(zhì)量，有必要對(duì)芒果葉的含量進(jìn)行定量控制。本試驗(yàn)采用HPLC波長切換法同時(shí)測(cè)定銀花芒果片中芒果苷和橙皮苷2種成分的含量，方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于銀花芒果片的質(zhì)量控制。

試驗(yàn)過程中對(duì)供試品溶液的處理方法進(jìn)行了考察。采用甲醇索氏提取、加熱回流及超聲振蕩提取，結(jié)果表明，超聲振蕩提取效果較好；再分別以乙醇、甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇作為提取溶劑，采用超聲振蕩法對(duì)供試品進(jìn)行提取，并對(duì)超聲振蕩時(shí)間進(jìn)行考察。結(jié)果表明，以50%甲醇超聲提取30 min效果最好。

本試驗(yàn)分別取芒果苷和橙皮苷的對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果顯示芒果苷和橙皮苷分別在258 nm和283 nm處有最大吸收。為保證各成分在檢測(cè)波長處有最大吸收，本試驗(yàn)采用HPLC波長切換方法，選擇在各自最大吸收波長處同時(shí)測(cè)定芒果苷和橙皮苷的含量。

本試驗(yàn)曾參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)中芒果苷和橙皮苷的含量測(cè)定方法[2-6]，采用等度洗脫法，分離結(jié)果均不理想，故考慮梯度洗脫。試驗(yàn)中分別考察了甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液等多種流動(dòng)相體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用甲醇-0.2%磷酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，能使各成分獲得較好分離。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鄧家剛，鄭作文，曾春暉.芒果苷的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊， 2002，7（12）：37-39.

[2] 黃海濱，李學(xué)堅(jiān)，梁秋云.RP-HPLC法測(cè)定芒果葉中芒果苷的含量[J].中國中藥雜志，2003，28（9）：839-841.

[3] 馮旭，王勝波，鄧家剛，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定芒果葉中芒果苷與高芒果苷的含量[J].中成藥，2008，30（10）：1504-1506.

[4] 皺登峰，高雅，張可峰.不同品種芒果葉中芒果苷含量的測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（6）：2947-2498.

[5] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：176-177.

[6] 楊道納，蔡天進(jìn)，劉金來，等.HPLC測(cè)定中醫(yī)滋補(bǔ)膏方中橙皮苷含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2013，30（5）：511-513.

（收稿日期：2015-08-25）

（修回日期：2015-09-13；編輯：陳靜）