戴蕓 胡秀 楊林 等
摘 要:建立測(cè)定歸芍護(hù)肝顆粒中芍藥苷含量的方法。采用HPLC-UV法,Aglient ZORBAX SB-C18柱(4.6 ×250 mm,5 ?m);流動(dòng)相為乙腈-0.1 %磷酸溶液(14:86,v/v)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;柱溫為30 ℃;流速為1 mL/min。芍藥苷在10~100 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為98.79%,RSD 分別為0.92%。該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好,可用于歸芍護(hù)肝顆粒中芍藥苷含量的測(cè)定。
關(guān) 鍵 詞:HPLC;歸芍護(hù)肝顆粒;芍藥苷;含量測(cè)定
中圖分類號(hào):TQ 460 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 文章編號(hào): 1671-0460(2016)03-0476-03
Abstract: A method for determination of peoniflorin content in Guishao Hugan Granules was established. A HPLC-UV method was developed. The separation was performed on a ZORBAX SB-C18 column (4.6×250 mm, 5 ?m). The mobile phase consisted of acetonitrile- 0.1% phosphoric acid (14:86, v/v) at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 230 nm. The column temperature was 30 ℃. The calibration curves of peoniflorin showed good linearity in the range of 10~100 μg/mL. The average recoveries were 98.79% with RSD of 0.92%. The method is simple, accurate, sensitive and reproducible for determination of peoniflorin content in Guishao Hugan Granules.
Key words: HPLC; Guishao hugan granules; Peoniflorin; Content determination
歸芍護(hù)肝顆粒由我院經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)而來(lái),是用于“行氣解郁、活血化瘀、清利濕熱”的中藥顆粒劑,臨床上主要用于輕度肝損傷的治療[1,2]。該方劑由當(dāng)歸、白芍、山藥、茯苓、澤瀉等八味中藥配伍,經(jīng)過(guò)煎煮、濃縮、混勻等工藝制成[3]。為有效控制本品的質(zhì)量,確保療效和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用,該研究建立方中芍藥苷的含量測(cè)定方法。芍藥苷為方中白芍的主要藥效成分,具有補(bǔ)肝養(yǎng)腎澀精之功效。本研究參照相關(guān)文獻(xiàn)[4,5]和前期工作基礎(chǔ)建立歸芍護(hù)肝顆粒中芍藥苷的含量測(cè)定方法。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 藥品與試劑
芍藥苷(純度:96.4%,購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110736-201438);當(dāng)歸、白芍、山藥、茯苓、澤瀉等藥材購(gòu)自湖北蘄州中藥材市場(chǎng);乙腈、甲醇(色譜純,美國(guó)賽默飛世爾公司);無(wú)水乙醇、磷酸(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);水為純凈水。
1.2 儀器
日立L-7000型高效液相色譜系統(tǒng),配有L-7110 型泵,L-7200 型自動(dòng)進(jìn)樣器,L-7420 型UV檢測(cè)器;Sigma 3K15 高速低溫離心機(jī)(Sigma公司);XW-80A 旋渦混合器(上海青浦滬西儀器廠);KQ 250DE型數(shù)控超聲波清潔器(昆山市超聲儀器有限公司);METTLER ME104E型電子天平(瑞士梅特勒公司)。
1.3 溶液制備
1.3.1 對(duì)照品溶液的制備
芍藥苷對(duì)照品適量,精密稱定,置100 mL容量瓶中,加入甲醇定容至刻度,制成每l mL含 200 μg的溶液,即得,保存于4 ℃冰箱備用。
1.3.2 供試品溶液的制備
取本品中粉約0.5 g,精密稱定,置50 mL容量瓶中,加稀乙醇30 mL,超聲處理(功率240 W,頻率45 kHz)30 min,放冷,加稀乙醇至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
1.3.3 陰性供試品溶液的制備
按處方制備不含白芍的歸芍護(hù)肝顆粒10 g,取適量按1.3.2項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。
1.4 色譜條件[6,7]
色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18柱(4.6× 250 mm,5 ?m);以乙腈-0.1 %磷酸溶液(14:86)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;柱溫為30 ℃;流速為1 mL/min,分析時(shí)間25 min。
2 結(jié) 果
2.1 專屬性
取陰性供試品溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液,按1.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,在230 nm記錄供試品溶液色譜圖,芍藥苷保留時(shí)間為14.23 min,陰性對(duì)照品溶液無(wú)此特征峰,如圖1。表明供試品中其它組分對(duì)所測(cè)組分無(wú)干擾。
2.2 線性關(guān)系
分別取不同體積的芍藥苷對(duì)照品溶液置10 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度。配制成含芍藥苷10、20、40、60、80、100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。以芍藥苷的峰面積比值為Y,以芍藥苷的濃度為X,線性回歸得到芍藥苷的回歸方程為Y=4596.4X+23026,相關(guān)系數(shù)為r2=0.999 2,芍藥苷對(duì)照品溶液在10~100 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。