一株窖泥己酸菌株的多相鑒定及產(chǎn)酸研究

薛正楷，薛　原（1.瀘州職業(yè)技術(shù)學(xué)院白酒學(xué)院，四川瀘州646005；2.瀘州市生物醫(yī)學(xué)工程研究所，四川瀘州646005；.同濟大學(xué)理學(xué)院化學(xué)系，上海200016）

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一株窖泥己酸菌株的多相鑒定及產(chǎn)酸研究

薛正楷1，2，薛原3
（1.瀘州職業(yè)技術(shù)學(xué)院白酒學(xué)院，四川瀘州646005；2.瀘州市生物醫(yī)學(xué)工程研究所，四川瀘州646005；3.同濟大學(xué)理學(xué)院化學(xué)系，上海200016）

摘要：采用常規(guī)形態(tài)、生理生化指標(biāo)，并結(jié)合16s RNA基因序列分析進行多相鑒定方法及氣相色譜分析技術(shù)，對分離自瀘州老窖180年窖池的1株產(chǎn)己酸菌株（K-2）進行分類鑒定和代謝產(chǎn)物分析，結(jié)果表明，K-2菌株能利用D-葡萄糖、甘露醇、菊糖、L-阿拉伯糖、D-蔗糖等多種碳源，具有脲酶、七葉靈和明膠酶水解活性；K-2菌株16s RNA基因序列（1346bp）與Clostridium celerecrescens一致率為99%，Strain K-2 16s RNA基因序列在系統(tǒng)進化樹中位于Clostridium屬分支，與Clostridium celerecrescens序列相似性最近，本研究將其鑒定為梭菌屬（GenusI Clostridium）中的Clostridium celerecrescens菌株，該菌株有高效的產(chǎn)己酸（547.26 mg/100mL）和丁酸能力（382.45 mg/100mL）能力，但幾乎不產(chǎn)己酸乙酯和丁酸乙酯。此研究為國內(nèi)外首次報道從濃香型白酒窖池窖泥中分離出Clostridium celerecrescens菌株，且具有高效的產(chǎn)己酸特性。

關(guān)鍵詞：窖泥；己酸菌；濃香型白酒；多相鑒定

優(yōu)先數(shù)字出版時間：2016-04-25；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20160425.1613.020.html。

目前，中國白酒分為12種香型，其中濃香型白酒最受青睞，其年總產(chǎn)量占中國白酒年產(chǎn)量的70%。據(jù)分析，濃香型白酒風(fēng)味物質(zhì)多達(dá)近674種，定量檢測成分有近342種，關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)為乙酸乙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯、乙酸、丁酸和己酸，其中己酸乙酯為主體香（Core fragrance），其含量的多少及其在關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)中的比例，決定著濃香型白酒風(fēng)格的典型性及品質(zhì)［1-4］。

己酸乙酯的產(chǎn)生源于濃香型白酒泥窖發(fā)酵糟醅過程中己酸與乙醇在生香酵母、細(xì)菌和霉菌的復(fù)雜過程。乙醇是發(fā)酵過程的最豐富產(chǎn)物，己酸乙酯產(chǎn)量的高低，取決于糟醅中己酸濃度的高低，因此，選育高效產(chǎn)己酸菌菌株，成為濃香型白酒科研單位及企業(yè)提高濃香型白酒品質(zhì)的重要課題［1，5-7］。

濃香型白酒的釀造采用的是傳統(tǒng)固態(tài)天然發(fā)酵工藝，泥窖是其特有的發(fā)酵容器，其中的窖泥是釀酒微生物菌群棲息繁衍的場所，經(jīng)過長期高酸度、高酒精度和長期密閉發(fā)酵等釀酒環(huán)境的篩選和馴化，窖泥中逐漸富集了大量具有產(chǎn)酸生香的微生物，主要是厭氧的甲烷菌、己酸菌、乳酸菌、硫酸鹽還原菌、硝酸鹽還原菌等，泥窖連續(xù)使用的時間越長，富集的產(chǎn)酸生香微生物，尤其是己酸菌越多，其生產(chǎn)的濃香型白酒的品質(zhì)也越高，這也是古諺語“千年老窖萬年糟，酒好全憑窖池老”的科學(xué)機理［8-11］。

本研究擬通過對窖泥微生物的分離、純化、鑒定及產(chǎn)酸代謝分析，為濃香型白酒企業(yè)白酒生產(chǎn)提供高產(chǎn)菌種和科學(xué)研究提供優(yōu)良的出發(fā)菌。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1窖泥

取自瀘州老窖集團萬賓酒業(yè)有限公司180年窖池窖底。

1.1.2培養(yǎng)基

富集培養(yǎng)基：醋酸鈉0.5%，硫酸鎂0.02%，硫酸銨0.05%，酵母膏0.1%，磷酸氫二鉀0.04%，pH 6.8～7.0，121℃滅菌20min，接種前單獨加入2%除菌的無水乙醇。

強化梭菌瓊脂：牛肉粉0.5%，胰酪蛋白胨0.5%，酵母粉0.015%，葡萄糖0.025%，可溶性淀粉0.005%，氯化鈉0.025%，醋酸鈉0.015%，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.0025%，瓊脂6.25%，加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15min，備用。

發(fā)酵培養(yǎng)基：醋酸鈉0.5%，酵母膏0.1%，碳酸鈣0.5%，1∶3糟醅浸出液50%，無菌無水乙醇20mL（接種前單獨加入），pH7.0～7.2，121℃高壓滅菌15min，備用。

1.1.3試劑

快速DNA提取擴增套裝（KG201）、Universal DNA純化回收試劑盒（DP214）、DNAMakrer（DL2000）均購自天根生化科技有限公司；Taq酶、PCR10×buffe、dNTP均購自TaKaRa公司；正己酸、正丁酸、己酸乙酯、丁酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購自天津市精細(xì)化工研究所；無水乙醇（色譜純）購自成都科龍化學(xué)試劑廠。細(xì)菌16S rDNA通用引物：27F，5'- AGAGTTTGATCCTGGCTCAG- 3'；1541R，5'-AAGGAGGTGATCCACCC-3'，由上海生工生物工程有限公司提供。氣相色譜法高純度氮氣、空氣及氫氣購自瀘州天一氣體有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1初篩

稱取窖泥1 g，加入含有100mL無菌水的三角瓶中，以180r/min振蕩30min，在85℃水浴鍋內(nèi)水浴10min，無菌條件下吸取1mL稀釋液加入裝有20mL富集培養(yǎng)基的厭氧瓶中，在35℃、0.06 MP真空培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d。

1.2.2分離純化

挑選出產(chǎn)氣早、氣泡多的厭氧瓶于85℃水浴10min，待冷卻后，采用平皿稀釋法分離，將己酸菌液依次稀釋到10-1～10-6，然后取最后3個稀釋度的己酸菌液各50 L加入50℃強化梭菌培養(yǎng)基中進行混合培養(yǎng)，置于35℃、0.06 MP真空培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d，觀察菌落形態(tài)。

1.2.3復(fù)篩

挑取菌落呈乳黃色、生長速度快、直徑較大的菌落分離純化菌株于裝滿發(fā)酵培養(yǎng)基的厭氧培養(yǎng)瓶中，置于35℃、0.06 MP真空培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10d。

1.2.4發(fā)酵液的預(yù)處理

取發(fā)酵液460μL加入2%丁酸乙酯、己酸乙酯、丁酸和己酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液各10μL，超聲處理10min，調(diào)pH2.0，1000r/min離心10min，取上清液200μL進行色譜分析；棄上清液，菌體中加入460μL生理鹽水，振蕩混勻后進行細(xì)菌計數(shù)。

1.2.5發(fā)酵液色譜分析

色譜柱：AT.LZP-930白酒專用色譜柱（25m×0.32mm，0.25μm）。

色譜條件：氫火焰離子檢測器，柱溫采取程序升溫，初始溫度為65℃，保持5min，然后以3.5℃/min的速率升溫，升至150℃時保持0min；進樣器溫度為200℃，檢測器溫度為200℃，載氣（高純氮氣）流速，1.0mL/min，分流比37∶1，進樣量為1μL。

產(chǎn)物濃度的計算：采用白酒分析方法GB/T 10345—2007提供的方法進行，每個樣品重復(fù)3次，取3次平均值作為樣品濃度。

1.2.6發(fā)酵液細(xì)菌計數(shù)

取細(xì)菌計數(shù)板對發(fā)酵10d單克隆菌液，在100倍油鏡下計數(shù)完100方格后總數(shù)除100，得到每格的平均值，乘稀釋度，除1/4000計算得到的數(shù)字為每立方毫米的細(xì)菌數(shù)，每個樣品重復(fù)3次，取3次平均值作為細(xì)菌濃度。

1.2.7高效發(fā)酵己酸菌的鑒定

本研究對產(chǎn)己酸菌采用形態(tài)學(xué)特征、生理生化指標(biāo)及16S rRNA比對分析進行分類學(xué)鑒定。

1.2.7.1形態(tài)學(xué)觀察

將在梭菌強化培養(yǎng)基中培養(yǎng)3d，菌株置于100倍油鏡下觀察其菌體特征。

1.2.7.2生理生化鑒定

細(xì)菌主要生理生化鑒定，參考東秀珠等《常見細(xì)菌鑒定手冊》進行試驗［12］。

1.2.7.3分離菌株的分子生物學(xué)鑒定

菌株總DNA的提?。禾舾咝Мa(chǎn)己酸鑒定的單菌落菌體于34℃真空培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d發(fā)酵液，按天根生化科技有限公司的快速DNA提取擴增套裝（KG201）使用說明書提取菌株總DNA。

PCR擴增及測序：以高效發(fā)酵菌株總DNA為模板，采用16s DNA通用引物進行16s RNA基因PCR擴增，反應(yīng)體系：10ng DNA模板，1×Taq reaction buffer，引物各4 pmol，4 μmol dNTP，0.5單位Taq酶（Ferments），總體積10μL。反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，52℃復(fù)性1min，72℃延伸90s，30個循環(huán)后72℃延伸10min，PCR產(chǎn)物進行1%瓊脂電泳。在PCR產(chǎn)物純化操作按天根公司Universal DNA純化回收試劑盒提供的使用說明書進行，純化產(chǎn)物送上海生物工程公司測序。

測序結(jié)果分析及分子進化樹構(gòu)建：測序結(jié)果用Chromas軟件參照正反序列圖譜人工校對后，采用NCBI數(shù)據(jù)庫BLAST工具進行比對，獲得已知近緣種的相似性。采用CLUSTALW對高效菌株及其若干近緣種16S rRNA基因序列進行多序列比對，并采用MEGA5.0軟件，按鄰位連接法進行1000次的相似度重復(fù)計算，構(gòu)建高效產(chǎn)己酸菌株與鄰近物種的16S rDNA序系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.8數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS17軟件包和excel進行。

2結(jié)果與分析

2.1單菌落發(fā)酵產(chǎn)物色譜分析

按1.2.5節(jié)的色譜條件對培養(yǎng)基和發(fā)酵15d的單菌落發(fā)酵液進行氣相色譜檢測，內(nèi)標(biāo)和產(chǎn)物色譜圖見圖1。

從圖1可知，無論是培養(yǎng)基和15d發(fā)酵后培養(yǎng)液內(nèi)物質(zhì)均不干擾氣相色譜對內(nèi)標(biāo)物質(zhì)和發(fā)酵產(chǎn)物的檢測，各個檢測成分的出峰時間分別是：乙酸正戊酯（A）的出峰時間為3.7min左右，乙酸（B）的出峰時間為7.7min左右，丁酸乙酯（C）的出峰時間為9.4min左右，丁酸（D）的出峰時間為15.4min左右，己酸乙酯（E）的出峰時間為18min左右，2-乙基丁酸（F）的出峰時間為21min左右，己酸（G）的出峰時間為24min左右。

對代謝產(chǎn)物采用1.2.5節(jié)的色譜條件獲得內(nèi)標(biāo)及產(chǎn)物峰面積，用GB/T 10345—2007提供的計算公式進行代謝產(chǎn)物的計算：f=（A1/A2）×（d2/d1），X1=f×（A3/A4）×I。式中：f為校正因子，A1為待測產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰面積，A2為待測內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積，d1為待測產(chǎn)物的濃度，d2為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度，X1為己酸濃度（mg/100mL），A3為待檢測產(chǎn)物的峰面積，A4為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積，I為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度（mg/100mL）。其結(jié)果見表1。

將K-2產(chǎn)物濃度數(shù)據(jù)，采用spss軟件包中成對數(shù)據(jù)T檢驗（paired-samples T test）對發(fā)酵0d和15d產(chǎn)物進行比較，從T檢驗結(jié)果可知：（1）K-2菌株的代謝產(chǎn)物丁酸乙酯和己酸乙酯濃度，在發(fā)酵0d和15d時，發(fā)酵液均無顯著差異（P=0.2，0.19＞0.05），表明K-2均不能產(chǎn)2種酯，發(fā)酵液中的2種酯濃度可認(rèn)為是培養(yǎng)基中乙醇與丁酸、己酸自然化合的產(chǎn)物；（2）K-2菌株的代謝產(chǎn)物丁酸濃度，在0d和15d時的發(fā)酵液中，表現(xiàn)為差異極其顯著（P=0.004＜0.01），表明K-2能高效產(chǎn)丁酸；其己酸濃度，在0d和15d時的發(fā)酵液中，表現(xiàn)極為顯著差異（P=0.001＜0.01），表明該菌株有極高效的產(chǎn)己酸能力；（3）比較K-2菌株0d和15d時的發(fā)酵液中丁酸和己酸濃度，0d發(fā)酵液中的丁酸與己酸濃度之間不顯著（P=0.059＞0.05）15d發(fā)酵液中的丁酸與己酸濃度之間差異極其顯著（P= 0.002＜0.01），表明，K-2菌株產(chǎn)己酸能力超過產(chǎn)丁酸能力，丁酸是己酸生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)物。

圖1 K-2菌株氣相色譜圖

表1 K-2菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的代謝產(chǎn)物氣相色譜檢測結(jié)果

表2 K-2菌株生理生化鑒定試驗結(jié)果

總之，本試驗數(shù)據(jù)分析表明，K-2菌株具有高效的產(chǎn)丁酸和己酸能力，且產(chǎn)己酸能力超過產(chǎn)丁酸能力，幾乎不產(chǎn)己酸乙酯和丁酸乙酯。

2.2形態(tài)學(xué)觀察

在強化梭菌瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)3d，菌體桿狀，革蘭氏陽性，0.6×（2.5～4.5）μm，單個或鏈狀排列菌落呈白色，近透明的液滴狀，圓形，有光澤（圖2）。

圖2菌株K-2菌落和菌體形態(tài)

2.3采用法國梅里埃芽孢桿菌鑒定系統(tǒng)生理生化鑒定

K-2菌株生理生化鑒定試驗結(jié)果見表2。

從表2可知，K-2菌株與梭菌屬（Clostridium）在C源同化及水解酶活性方面基本一致，K-2菌株應(yīng)屬于梭菌屬（Clostridium），為屬水平鑒定結(jié)果。

2.416S rDNA序列鑒定及進化分析

將K-2菌株總DNA經(jīng)16S rDNA基因引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物純化后進行測序，將K-2菌株16S rDNA序列（1346 bp）測序結(jié)果，采用NCBI數(shù)據(jù)庫中blast工具（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）在Genebank進行比對，結(jié)果表明，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫中，K-2菌株與Clostridium celerecrescens 16S rDNA序列相似度最高，一致性（Identifity）高達(dá)99%，表明K-2菌株極有可能是Clostridium celerecrescens。

采用MEGA5.0軟件，按鄰位連接法進行1000次的相似度重復(fù)計算，構(gòu)建K-2菌株與相關(guān)物種的16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹，見圖3。

圖3菌株K-2與鄰近物種的系統(tǒng)發(fā)育樹

從圖3可知，K-2菌株與與Clostridium celerecre-scens DSM 5628T位于同一分枝上，Bootstrap支持率為98%，該結(jié)果表明K-2為Clostridium celerecrescens。

3　討論

己酸菌（hexanoic acid bacteria or caproic acid bacteria）是一大類產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物己酸微生物的總稱，其模式菌株為Closlridium Kluyveri（strain ATCC 8527 / DSM 555 / NCIMB 10680），該菌株最初由H.A.BARKER在1936年從淤泥中分離，1942年被命名為克氏梭菌（Clostridium Kuyveri），其在分類上屬于厚壁菌門（Phylum Firmicutes），芽孢桿菌綱（class Bacilli）、芽孢桿菌目（order Bacillales）、芽孢桿菌科（Bacillaceae）、梭菌屬（Clostridium）［13，14］。目前發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)己酸的菌株還包括同為梭菌屬的Clotridium scatologenes、Clostridium sp.BS-1，以及其他屬的Rhodospirillum rubrum、Eubacterium limosum、Megasphaera elsdenii、Bacillus Megaterium、Bacillus fusiformis等［15-20］。

為了提高濃香型白酒的品質(zhì)，自20世紀(jì)60年代以來，越來越多的己酸菌（Clostridium kluyveri）菌株從濃香型白酒窖泥中分離出來，目前在中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心（China Center of Industrial Culture Collection，CICC）的己酸菌菌株共有30株，其中CICC8022（內(nèi)蒙30#）研究得最為充分。該菌株的形態(tài)、生理、發(fā)酵條件及生產(chǎn)性能均得以分析，但其分類地位有待深入研究［21，22］。

本研究從瀘州老窖集團萬賓酒業(yè)公司180年老窖池中分離出產(chǎn)己酸菌株，其形態(tài)、生理特征與Clostridium kluyveri基本一致［13］，將其產(chǎn)酸能力與其他菌株相比，結(jié)果見表3。

由表3可知，本研究獲得的己酸菌，其產(chǎn)酸能力明顯高于吳衍庸、張彬、苗子健和趙輝等［5，20，23，24］從窖泥中分離獲得的菌株，Byoung Seung Jeon等分離自淤泥的Clostridium sp.BS-1和菌株Megasphaera elsdenii NCIMB 702410［19，25］，但低于內(nèi)蒙30＃［27］，遠(yuǎn)低于分離自牛胃的C.kluyveri 3231B菌株［26］，可見，本研究鑒定的產(chǎn)己酸Clostridium celerecrescens菌株，在從窖泥分離出的產(chǎn)己酸菌中，屬于高產(chǎn)型。

為了獲得K-2菌株的系統(tǒng)分類特征，本研究采用形態(tài)、生理生化及分子生物學(xué)相結(jié)合的多相鑒定技術(shù)，對K-2菌株分類鑒定，結(jié)果表明，本研究分離的K-2菌株，屬于厚壁菌門（Phylum BXIII Firmicutes），梭菌綱（ClassI clostridia）、梭菌菌目（OrderI clostridiales）、梭菌科（FamilyIclostidiaceae）、梭菌屬（GenusI Clostridium），Clostridium celerecrescens菌株［28］。

梭菌屬（GenusI Clostridium）是一類厭氧、桿狀、形成內(nèi)生孢子的革蘭氏陽性菌，主要分布于土壤、水體沉積物、厭氧人體或底物組織等富含有機物的環(huán)境中；其營養(yǎng)體及其分泌的胞外酶具有廣闊的利用或降解底物，包括工業(yè)、農(nóng)業(yè)或市政廢棄物（包括CO2、CO、H2等廢氣）、天然和人造有機毒物等簡單或復(fù)雜的含碳化合物，且無降解底物或產(chǎn)物抑制的耐受現(xiàn)象，其多樣化的代謝途徑賦予其生產(chǎn)丁酸、乙酸、乳酸、己酸、丁醇、丙酮、乙醇、氣體物質(zhì)（CO2、H2等）、惡臭化合物（如甲酚等）、異丁酸、吲哚、吲哚酸、乙酸苯酯、戊酸、異戊酸以及抗生素Closthiomide等極其多樣化的產(chǎn)物，因此，梭菌屬是一類極具環(huán)保或工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及生物工程應(yīng)用價值的微生物［29］。目前，該屬共有220余菌株，該屬中的Clostridium kluyveri是最著名的產(chǎn)己酸菌株［13-15］，國內(nèi)從濃香型白酒窖泥中分離出的產(chǎn)己酸幾乎均被鑒定為Clostridium kluyveri；其他產(chǎn)己酸菌還包括Clostridium scatologenes、Clostridium sp.BS-1、Clostridium difficile［30］、Clostridium scatologenes［31］、Clostridium butyricum［32］等，本研究獲得的Clostridium celerecrescens為嚴(yán)格厭氧、桿狀的革蘭氏陽性菌，該菌于1989年由Palop et al首次從富含纖維素的產(chǎn)甲烷培養(yǎng)基中分離并命名［33］，該菌廣泛用于利用纖維質(zhì)生物質(zhì)生產(chǎn)氫氣、乙醇和有機酸工藝；電燃料、用于調(diào)味劑的桂皮酸衍生物；還原FeIII鐵礦石引起環(huán)境酸化作用和金屬的腐蝕，也是引起人與動物組織感染的病原微生物，分布于淤泥、感染的人和動物組織、廢棄的鐵礦和鐵質(zhì)物品表面等環(huán)境［34-37］。

本研究在采用常規(guī)形態(tài)學(xué)、生理生化鑒定方法結(jié)合16s RNA基因序列分析，國內(nèi)外首次從濃香型白酒窖池窖泥中分離得到Clostridium celerecrescens菌株，并確定其具有高效產(chǎn)己酸（547.26 mg/100mL）和丁酸能力（382.45 mg/100mL）能力，為該菌株在濃香型白酒生產(chǎn)和科研中的應(yīng)用，提供了理論和實踐依據(jù)。

表3幾株產(chǎn)己酸菌株的產(chǎn)酸性能比較

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Polyphasic Identification of a Hexanoic Acid Bacteria Strain from the Pit Mud and Study on Its Acid Producing Ability

XUE Zhengkai1，2and XUE Yuan3
（1.School of Liquor-making Engineering，Luzhou Vocational and Technical College，Luzhou，Sichuan 646005；2.Institute of Biomedical Engineering，Luzhou，Sichuan 646005；3.Chemistry Department of Science School，Tongji University，Shanghai 200016，China）

Abstract:Polyphasic identification of a combination of morphological observation，physiological & biochemical indexes，16s RNA gene sequencing analysis was adopted to identify a hexanoic-acid-producing bacteria strain K-2（isolated from the mud of 180-year-old pit）.Then the metabolites of this strain were analyzed by GC.The results showed that，K-2 could utilize various carbon sources including D-glucose，mannitol，inulin，L-arabinose，D-sucrose and it had hydrolysis activities of urease，esculin and gelatin.16s RNA gene sequence（1346 bp）of strain K-2 showed the identity of 99%to Clostridium celerecrescens by NCBI blast，and phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene sequence positioned K-2 in the Clostridium branch，thus we identified it to be Clostridium celerecrescens.Besides，K-2 demonstrated a highly-efficient capability of producing hexanoic acid（547.26 mg/100mL）and butyric acid（382.45 mg/100mL），but it hardly produced ethyl caproate and ethyl butyrate.This study was the first report at home and abroad on a hexanoic-acid-producing Clostridium celerecrescens strain isolated from Nongxiang Baijiu pit mud.

Key words:pit mud；hexanoic acid bacteria；Nongxiang Baijiu；polyphasic identification

中圖分類號：TS262.3；TS261.4；TS261.1

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-9286（2016）06-0065-07

DOI：10.13746/j.njkj.2015089

基金項目：四川省科技支撐計劃項目（NO.2014FZ0018）；四川省教育廳理工重點項目；瀘州市科技局重點項目（NO.2013-S-44（4/8）。

收稿日期：2015-03-10

作者簡介：薛正楷（1968-），男，重慶永川人，博士，副教授，瀘州市生物醫(yī)學(xué)工程研究所所長，研究方向：分子代謝與工程；E-mail：zk.xue988@163.com。