白建生（甘肅省卓尼縣畜牧工作站，甘肅 卓尼 747600）

甘南地區(qū)牦牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定

白建生
（甘肅省卓尼縣畜牧工作站，甘肅 卓尼 747600）

摘要：為了調(diào)查甘南卓尼縣牦牛隱性乳房炎的流行情況，以便為該縣牦牛隱性乳房炎的控制提供科學(xué)有效地防治措施，本試驗(yàn)選取具有代表性的牦牛為試驗(yàn)對(duì)象，采集乳樣，分離鑒定乳樣中的細(xì)菌，結(jié)合該縣牦牛的飼養(yǎng)管理，與目前對(duì)牦牛疾病防治的現(xiàn)狀，提出了牦牛隱性乳房炎的綜合性防治措施。

關(guān)鍵詞：牦牛；隱形乳房炎；分離鑒定；甘南地區(qū)

乳房炎是奶牛的乳腺受到物理、化學(xué)、微生物等刺激所發(fā)生的一種炎性變化。乳房出現(xiàn)紅腫熱痛的炎性反應(yīng)，乳汁中的體細(xì)胞增多導(dǎo)致乳汁的營(yíng)養(yǎng)成分下降。1978年美國(guó)乳房炎委員會(huì)（NMC）根據(jù)奶牛在乳房部位和和分泌出的乳汁中是否有無(wú)變化，將乳房炎分為隱性乳房炎和臨床型乳房炎兩種。隱性乳房炎因沒(méi)有明顯的臨床癥狀而常被忽視[1]，因此在實(shí)際生產(chǎn)中隱性乳房炎給畜牧業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。

細(xì)菌、病毒等致病微生物存在于乳汁中，當(dāng)乳制品加工過(guò)程消毒不嚴(yán)時(shí)，很容易使致病微生物殘存于牛奶中，飲用后會(huì)導(dǎo)致人體不適，甚至發(fā)病。根據(jù)國(guó)際奶牛聯(lián)合會(huì)統(tǒng)計(jì)，奶牛隱性乳房炎發(fā)病率高達(dá)50％，而臨床型乳房炎發(fā)病率只有2％。在世界范圍內(nèi)，每年因乳房炎損失乳汁估計(jì)可達(dá)380萬(wàn)t。奶牛乳房炎不僅造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，而且還嚴(yán)重危害著奶牛飼養(yǎng)業(yè)的健康發(fā)展。

1　材料與方法

1.1樣品來(lái)源

2015年5月隨機(jī)采集卓尼縣4個(gè)草場(chǎng)的牦牛乳樣品60份。

1.2儀器設(shè)備

生化培養(yǎng)箱，型號(hào)SPX-150B型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號(hào)YXQ-SG46-280SA，上海佳勝試驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)；潔凈工作臺(tái)，型號(hào)SPY-115D型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)；顯微鏡,型號(hào)Motic DMBA450型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)；電子天平(感量0.00019)；以上儀器均由卓尼縣畜牧局實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3試劑藥品

營(yíng)養(yǎng)肉湯、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、5％綿羊血液瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、M-H瓊脂培養(yǎng)基、生化試劑、CMT診斷試劑等。

環(huán)境消毒藥物包括惠福星和立可靈。

1.4奶牛隱性乳房炎的檢測(cè)方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

CMT方法[2]在隱性乳房炎檢查方面具有快速、檢出率高、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),判定標(biāo)準(zhǔn)參照《獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)》[3]。

表1　隱性乳房炎CMT法的判定方法

1.4.1奶牛乳樣的采集采樣前先用溫水清洗采樣乳頭，再用75％酒精棉球消毒乳頭，在每次消毒乳頭后均用消毒紙巾擦干，棄去采樣乳區(qū)的頭兩把乳汁，大約10～15 ml，然后采集乳樣約5～10 ml，擠入滅菌瓶

中，作好標(biāo)記待檢病原菌，處于干奶期的牦牛僅可采1～2 ml奶樣。在每次采樣后均要乳頭消毒，以防細(xì)菌感染。采樣后將樣品迅速放入冰水中或冷藏，盡快送檢。

1.4.2細(xì)菌分離鑒定一是牦牛生活環(huán)境中細(xì)菌的分離及初步分類。樣品采集完成后，立即將放有樣品的平板送回實(shí)驗(yàn)室，置于37℃的溫箱中培養(yǎng)1～2 d，然后用肉眼觀察平板上的細(xì)菌生長(zhǎng)狀況，根據(jù)菌落形態(tài)特征、生長(zhǎng)特性進(jìn)行初步的分類。挑取典型菌落，涂片，用常用的革蘭氏染色最后鏡檢，依據(jù)細(xì)菌形態(tài)特征及革蘭氏染色的特性，將其分離細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性球菌、革蘭氏陰性球菌、革蘭氏陽(yáng)性桿菌、革蘭氏陰性桿菌[4]。二是牦牛奶樣中細(xì)菌的分離鑒定。取適量奶樣，搖勻，每個(gè)樣品無(wú)菌采取0.05 ml，預(yù)先準(zhǔn)備好的血液平皿、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿等。然后接種細(xì)菌，置于37℃下培養(yǎng)1～2 d。觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，根據(jù)菌落形態(tài)特點(diǎn)，挑取較為典型的菌落進(jìn)行涂片，染色，鏡檢。鑒定分離病菌的染色特性，進(jìn)行肉湯接種試驗(yàn)，根據(jù)細(xì)菌的生長(zhǎng)與生化特性進(jìn)一步鑒定細(xì)菌。

根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)特性及其鏡檢結(jié)果，可初步區(qū)別球菌與桿菌。根據(jù)細(xì)菌革蘭氏染色、溶血以及所產(chǎn)生的菌落顏色特性都可以對(duì)細(xì)菌特性進(jìn)行鑒定。

2　乳樣中細(xì)菌的分離結(jié)果

在本次牦牛隱性乳房炎病原菌的調(diào)查中，共檢驗(yàn)了60份患牛奶樣，共分離出了116株細(xì)菌，細(xì)菌檢驗(yàn)結(jié)果如下表3所示，金黃色葡萄球菌和鏈球菌是乳房炎的主要病原菌，其次是大腸埃希氏菌。

表2乳樣中細(xì)菌的分離結(jié)果

參考文獻(xiàn):

[1]陳北亨,王建辰.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)(第二版)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1990.

[2]張慶茹.奶牛隱性乳房炎研究進(jìn)展[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè),2003,(8):56-60.

[3]趙興緒.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2002.

[4]桂炳東,孫敬,徐建民.細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)測(cè)定手冊(cè)[M].南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社,2001.

（編輯：趙鵬飛）

中圖分類號(hào)：S857.2+6

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1006-799X(2016)04-0088-01

作者簡(jiǎn)介：白建生（1976-），男，甘肅卓尼人，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣工作。