譚 翔，曹利雅

（貴陽市建材質(zhì)量檢驗中心 ，貴州 貴陽 550009；2.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

UPLC-TUV測定啤酒中亮藍(lán)含量

譚 翔1，曹利雅2

（貴陽市建材質(zhì)量檢驗中心 ，貴州 貴陽 550009；2.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

摘 要：利用超高效液相色譜法測定啤酒中人工合成色素亮藍(lán)的含量。采用色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm（2.1mm×50mm Column），流動相為甲醇-0.02mol·L-1乙酸銨（39∶61），流速0.3mL·min-1，檢測波長628nm，柱溫16.1℃，進樣量5μL。檢測結(jié)果表明，亮藍(lán)在1.0～25mg·L-1（r=0.9994）間線性關(guān)系良好，平均回收率為98.7%，RSD=0.49%，在3種市場所售啤酒中均未檢測到亮藍(lán)。該方法可以用于檢測啤酒中是否添加人工合成色素亮藍(lán)，為市場上銷售啤酒質(zhì)量檢測提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：超高液；啤酒；亮藍(lán)；含量測定

啤酒是深受大眾喜愛的酒精飲料之一?，F(xiàn)代有些苦瓜啤酒制造商為了讓啤酒的色澤光鮮通常都會加入人工合成色素亮藍(lán)［1-3］。亮藍(lán)作為可食用色素適用于糕點、糖果和配制酒的著色［4-6］。但《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760-2014）中規(guī)定，亮藍(lán)在飲料、汽水、配制酒等的最大使用量為0.025g·kg-1［7］，含量超標(biāo)會影響人體健康［8］。

由于常規(guī)性發(fā)酵啤酒中不允許加入合成色素，為了檢測市場上常規(guī)性發(fā)酵啤酒中是否添加色素亮藍(lán)，本文基于超高效液相色譜的優(yōu)良性能，建立了一種更快、更簡捷、靈敏度更高的啤酒中亮藍(lán)含量的測定方法［9-10］。

1 儀器與試藥

Waters ACQUITY超高效液相色譜儀，色譜柱: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m（2.1mm×50mm Column）。

亮藍(lán)對照品（1mg·mL-1），甲醇（色譜純），乙酸銨（分析純），檸檬酸（分析純），氨水（分析純），無水乙醇（分析純），純凈水。

啤酒3種（市售）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm（2.1mm×50mm Column）；流 動 相:甲醇-0.02mol·L-1乙酸銨（39∶61），流速0.3mL·min-1，檢測波長628nm，柱溫16.1℃，進樣量5μL。

通訊聯(lián)系人：曹利雅，貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院。E-mail:591404002@qq.com

2.2 對照品溶液的制備

取1mg·mL-1的亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液于容量瓶，加純凈水分別稀釋成濃度為1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮藍(lán)溶液。

2.3 供試品溶液制備

移取50mL供試品，加熱驅(qū)除CO2和乙醇，用200g·L-1的檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH=6，加熱至60℃，將1g聚酰胺粉加水調(diào)成粥狀，倒入供試品溶液中，攪拌，抽濾，用60℃、pH=4的檸檬酸水溶液洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸（6+4）混合溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水（7+2+1）混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸發(fā)至干，加2.00mL水溶解，經(jīng)0.22μm濾膜過濾。

2.4 線性關(guān)系

分 別 吸 取 濃 度 為1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮藍(lán)溶液5μL注入超高效液相色譜儀，按2.1的色譜條件進行測定，以峰面積 （Y）對濃度（X，mg·L-1）進行線性回歸，亮藍(lán)在1.0～25mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=21425X+1588.9，R2=0.9994。

2.5 精密度考察

精密吸取25mg·L-1的對照品溶液，按照2.1的色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算得到RSD=1.18%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

按照2.3的方法配制供試品溶液6份，再按照2.1的色譜條件進行測定，記錄峰面積，計算得到RSD=1.25%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液，按2.1的色譜條件分別在0、4、8、12、16、20、24、48、72h進樣，記錄峰面積，計算得到RSD=1.88%，表明供試品溶液在72h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率

取6份同一啤酒樣品溶液各1mL，分別加入濃度為1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL，搖勻，按2.1的色譜條件注入超高液相色譜儀，記錄峰面積。計算加樣回收率，平均回收率為99.21%，RSD=0.49%，結(jié)果見表1。

表1 樣品加樣回收率結(jié)果

2.9 含量測定

取3種市售啤酒，按照2.3的方法制備供試品溶液3份，按照2.1的色譜條件進行測量，結(jié)果都未檢測到亮藍(lán)。

3 討論

本文建立了超高效液相色譜快速測定啤酒中人工合成色素亮藍(lán)含量的方法，該方法簡便準(zhǔn)確、靈敏度高，避免了常規(guī)亮藍(lán)含量測定時梯度洗脫帶來的繁瑣和比例不易調(diào)節(jié)等缺點，可為食品和市場監(jiān)管部門對啤酒質(zhì)量的監(jiān)控提供理論依據(jù)和參考價值。

參考文獻：

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［10]楊燕飛，張俊燕，陳曉風(fēng).五味子中非法添加莧菜紅、日落黃、亮藍(lán)的檢測［J］.食品與藥品，2015，17（1）:53-55.

中圖分類號：O 657.7+2

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1671-9905（2016）02-0034-02

作者簡介：譚翔（1988-），男，漢族，四川梓潼人，助理工程師，研究方向:分析檢測

收稿日期：2015-12-24

Determine of Brilliant Blue Content in Beer by UPLC-TUV

TAN Xiang1， CAO Li-Ya2
（1. Guiyang City Building Materials Quality Inspection Center， Guiyang 550009， China；2.School of Public Health， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China）

Abstract:Ultra high performance liquid chromatography was applied to determine the content of brilliant blue in beer with ACQUITY UPLC BEH column C18 1.7μm（2.1mm×50mm Column）， mobile phase was methanol- 0.02mol/L ammonium acetate（39∶61）， fow rate was 0.3mL/min， the wavelength was 628nm， column temperature was 16.1℃， and sample size was 5μL. The result showed that brilliant blue had a good linear relationship between 1.0～25mg/L. The average recovery was 98.7%， RSD=0.49%.

Key words:UPLC； beer； brilliant blue； content detection