肖建華

（福建省三明市清流縣嵩口林業(yè)站）

灰樹花的培養(yǎng)特性與液體菌種栽培技術(shù)思考

肖建華

（福建省三明市清流縣嵩口林業(yè)站）

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們對(duì)生活質(zhì)量和生活環(huán)境也有了更高的要求，為了滿足社會(huì)發(fā)展和人們生活的需求，對(duì)生物植被的研究逐漸深入。灰樹花作為代表性的生物菌種不僅起著生態(tài)研究的作用，還可以滿足食用和醫(yī)用的需要，為了保證灰樹花的可持續(xù)生長(zhǎng)繁殖和人們生活的需求，需要對(duì)其進(jìn)行良好的培養(yǎng)和栽培。本文通過多種實(shí)驗(yàn)的方法簡(jiǎn)單的介紹了灰樹花的培養(yǎng)特性，對(duì)灰樹花液體菌種栽培技術(shù)進(jìn)行分析，以供參考。

灰樹花；培養(yǎng)特性；液體菌種栽培技術(shù)

灰樹花也是貝葉多孔菌、蓮花菇、舞茸等別稱，可以直接食用，也可以形成藥物成分，但是由于其生長(zhǎng)環(huán)境特殊，在海拔較高的地區(qū)生長(zhǎng)較好，所以我國(guó)很多地方不存在灰樹花這一物種；其次灰樹花主要在中溫型的環(huán)境中生長(zhǎng)，具有一定的局限性，為了更好的發(fā)揮其經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益，就需要利用先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)和栽培。目前我國(guó)對(duì)灰樹花的研究還處于初步發(fā)展階段，對(duì)液體菌種的栽培還不夠成熟，需要進(jìn)一步的完善和發(fā)展，在自我實(shí)驗(yàn)探索的同時(shí)借鑒國(guó)外的先進(jìn)技術(shù)和豐富經(jīng)驗(yàn)，然后結(jié)合我國(guó)的環(huán)境和灰樹花的培養(yǎng)特性進(jìn)一步的改進(jìn)和完善，使其對(duì)灰樹花的培養(yǎng)能夠達(dá)到預(yù)期的效果，促進(jìn)其繁殖生長(zhǎng)。

1 灰樹花的培養(yǎng)特性

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

①PDAA培養(yǎng)基：選擇去皮的馬鈴薯201g，瓊脂21g、葡萄糖21g，然后加入一定量的水，一般來(lái)說需要1000mL的水。②馬鈴薯半組合培養(yǎng)基：馬鈴薯半組和培養(yǎng)基所需的馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖以及水的含量沒有的差異，在選擇上可以采用同樣的量，但是需要增加適當(dāng)?shù)牡鞍纂撕土姿岫溻?，一般?lái)說需要增加5g的蛋白胨和5g的磷酸二氫鉀即可。③MEA培養(yǎng)基：選取12.6g的麥芽糖、20g瓊脂、然后加入1000mL左右的水。④馬鈴薯綜合培養(yǎng)基：采用綜合的方法時(shí)需要的馬鈴薯和瓊脂都相對(duì)較多，同時(shí)也需要增加適量的硫酸鎂和維生素B1等相應(yīng)物質(zhì)[1]。

進(jìn)行二級(jí)液體菌種培養(yǎng)基的選擇：①選取5%左右的玉米粉、2%左右的葡萄糖以及0.2%的蛋白胨，增加適量的磷酸二氫鉀和硫酸鎂，形成一個(gè)玉米粉、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基，并且保證pH值在6～7之間，保證其酸堿性適中。②將玉米粉調(diào)整為馬鈴薯，其他成分含量相同，形成一個(gè)馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基。③將玉米粉改為麥麩，增加米糠，其他成分極其相應(yīng)含量不變，形成的麥麩、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基其酸堿性不變，pH值在6～7之間，呈現(xiàn)穩(wěn)定的狀態(tài)。④將葡萄糖換為蔗糖，仍然使用玉米粉，但是玉米粉的含量需要適當(dāng)減少，調(diào)整到1%即可，增加2%的蔗糖和3%的酵母膏，將磷酸二氫鉀和硫酸鎂的成分適當(dāng)降低[2]。⑤直接采用酵母膏，形成一個(gè)酵母膏、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基時(shí)葡萄糖含量降低，增加酵母膏成分，磷酸二氫鉀和硫酸鎂的成分也隨之降低。

1.2 研究方法

在無(wú)菌條件下采用實(shí)驗(yàn)的方法對(duì)灰樹花的培養(yǎng)特性進(jìn)行分析。①用一定直徑大小的打孔器竊取質(zhì)地相同、數(shù)量相等的灰樹花菌塊，然后將這些在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的灰樹花菌塊在上述中的PDA、馬鈴薯半組和以及MEA培養(yǎng)基上進(jìn)行接種工作，為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，一般會(huì)進(jìn)行三次接種；②將培養(yǎng)箱放置于中溫型的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，定期對(duì)灰樹花菌塊的特性進(jìn)行觀察分析，包括灰樹花的生長(zhǎng)速度、菌落的顏色形態(tài)以及周圍區(qū)域的結(jié)構(gòu)變化等宏觀特性和新生菌絲體、氣生菌絲體的類型和分割情況，擔(dān)子和無(wú)性孢子的的生長(zhǎng)結(jié)構(gòu)和特點(diǎn)等微觀特性，通過宏觀和微觀的結(jié)合更好的了解灰樹花的特性，為液體菌種的栽培提供一定的參考[3]。

通常對(duì)三方面進(jìn)行檢測(cè)，包括酚氧化酶檢測(cè)、不同環(huán)境的檢測(cè)以及不同pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。酚氧化酶檢測(cè)研究方法主要是將一定量的愈創(chuàng)木酚的乙醇溶液滴在菌落的邊緣，如果檢測(cè)區(qū)域出現(xiàn)變化，呈現(xiàn)紅色狀態(tài)，就說明菌落中有酚氧化酶的存在，如果檢測(cè)區(qū)域無(wú)明顯變化，酚氧化酶存在的可能性較小；不同溫度的檢測(cè)，通過將接種后的灰樹花菌塊放置于不同的溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，觀察菌絲的生長(zhǎng)顏色、形態(tài)等生長(zhǎng)情況，然后觀察不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響；不同pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響，pH值的研究需要采用馬鈴薯綜合培養(yǎng)基，將pH值進(jìn)行不同酸堿度的設(shè)置，然后將接種后的菌落放置中溫的環(huán)境下，用不同的pH值進(jìn)行調(diào)試，對(duì)菌落的生長(zhǎng)半徑進(jìn)行觀察分析。

2 灰樹花液體菌種的栽培技術(shù)

2.1 一級(jí)種培養(yǎng)基的篩選

根據(jù)材料PDA、馬鈴薯半組合、馬鈴薯綜合培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)試管斜面的一級(jí)種，觀察不同培養(yǎng)基對(duì)菌落生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)趨勢(shì)的影響；然后將性質(zhì)相同數(shù)量相等的灰樹花菌塊在試管斜面的中心分別進(jìn)行接種工作，放置中溫型的環(huán)境下重復(fù)試驗(yàn)后，在一定的時(shí)間內(nèi)對(duì)菌落的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察分析，從而選擇適合一級(jí)種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基[4～5]。

2.2 二級(jí)液體菌落培養(yǎng)基的選擇

上文中提到五種二級(jí)液體菌落培養(yǎng)基，將這些培養(yǎng)基注入100mL的三角瓶中，培養(yǎng)基的注入量一般低于三角瓶的容量；然后將PDA培養(yǎng)基上的菌落放入液體培養(yǎng)基中，將其封好后放置在中溫型的環(huán)境中對(duì)菌絲的生長(zhǎng)情況進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)菌絲的生長(zhǎng)情況選擇合適的液體菌落培養(yǎng)基，從而促進(jìn)菌落的生長(zhǎng)。

2.3 三級(jí)種栽培袋的制作與培養(yǎng)

栽培袋為菌落的生長(zhǎng)提供了良好的環(huán)境和條件，一般分為拌料、裝袋、高壓滅菌、接種和培養(yǎng)這六個(gè)步驟。首先要對(duì)栽培袋進(jìn)行高壓滅菌工作，然后將液體菌種導(dǎo)入已經(jīng)滅菌的栽培袋中，將栽培袋封好，放入避光適溫的環(huán)境中，在保證培養(yǎng)箱濕度、溫度適合的前提下進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)菌絲的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察[6]。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 在PDA培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性

分別對(duì)菌落和菌絲在PDA培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性進(jìn)行觀察。菌落特性表現(xiàn)為生長(zhǎng)速度沒有達(dá)到快速的標(biāo)準(zhǔn)，呈中速平穩(wěn)的狀態(tài)；生長(zhǎng)新區(qū)均勻，沒有出現(xiàn)散落稀疏的狀況，有些氣體菌絲升高的濃密性較好能夠延伸到生長(zhǎng)區(qū)的邊緣；菌落的顏色呈現(xiàn)白色狀態(tài)，初期為毛絨狀，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)后逐漸轉(zhuǎn)變呈現(xiàn)氈狀，而且愈創(chuàng)木酚在檢測(cè)后呈現(xiàn)紅色，說明菌落中含有酚氧化酶。菌絲的特征表現(xiàn)為菌絲的形態(tài)、間隔情況等，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)新區(qū)的菌絲呈現(xiàn)透明狀態(tài)，而且大部分為簡(jiǎn)單分隔狀；后壁的纖維菌絲與新生區(qū)相比，菌絲寬、分支少，氣生菌絲和新生區(qū)菌絲狀態(tài)差異性很小，這些不同的菌絲和不同的環(huán)境呈現(xiàn)的狀態(tài)也不相同[7]。

3.2 不同溫度對(duì)灰樹花菌絲生長(zhǎng)的影響

通過在不同溫度下進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在5℃以下菌絲不生長(zhǎng)，在中溫環(huán)境下生長(zhǎng)速度較快，生長(zhǎng)半徑較大，如果溫度過高菌絲的生長(zhǎng)又會(huì)呈現(xiàn)下滑趨勢(shì)，詳情見圖1。

圖1 不同溫度對(duì)灰樹花菌絲生長(zhǎng)情況的影響

3.3 不同pH值對(duì)灰樹花菌絲生長(zhǎng)的影響

將 pH 分為不同的等級(jí)，為 4、5、6、7、8、9 這六個(gè)等級(jí)，然后進(jìn)行不同等級(jí)菌落的培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)pH值在4～5之間時(shí)菌絲的生長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，在5～6之間生長(zhǎng)情況最好，菌絲生長(zhǎng)半徑最大，超過5后呈現(xiàn)下滑趨勢(shì)，詳情見圖2。

圖2

4 結(jié)束語(yǔ)

綜上所述，灰樹花的培養(yǎng)特性具有一定的特殊性，傳統(tǒng)的栽培技術(shù)已經(jīng)不能滿足灰樹花成活和生長(zhǎng)的需要，為了提高灰樹花的成活率好生長(zhǎng)繁殖速度，需要完善栽培技術(shù)，液體菌種栽培技術(shù)能夠生產(chǎn)大量的菌絲，在栽培過程中能夠不僅能夠縮短生長(zhǎng)周期，還在一定程度上保證了灰樹花的生長(zhǎng)質(zhì)量，所以液體菌種栽培技術(shù)的應(yīng)用也就成為了必然選擇。筆者提出，灰樹花的培養(yǎng)在不同的情況下會(huì)呈現(xiàn)不同的特性，本文通過多種培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)體現(xiàn)了灰樹花的宏觀和微觀特性，從而根據(jù)這些數(shù)據(jù)分析出適合灰樹花生長(zhǎng)的培養(yǎng)基；液體菌種栽培技術(shù)對(duì)于灰樹花的培養(yǎng)和栽培起著至關(guān)重要的作用。希望通過本文的簡(jiǎn)單分析能夠幫助相關(guān)工作人員更好的開展研究工作。

[1]王玉，李政，郝利民，等.培養(yǎng)基優(yōu)化提高灰樹花菌絲體的研究[J].北方園藝，2011，19（4）：190～191.

[2]汪維云，吳梧桐.灰樹花深層培養(yǎng)的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)與計(jì)算機(jī)模擬[J].生物數(shù)學(xué)學(xué)報(bào)，2002，17（4）：494～498.

[3]杜巍，華澤釗.灰樹花的深層培養(yǎng)工藝及其影響因素的研究[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2004，20（2）：231～234.

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[5]李磊，王衛(wèi)國(guó)，郭家瑞，等.幾株灰樹花菌株液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)多糖性能的比較[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，31（2）：71～75.

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[7]律鳳霞.灰樹花一級(jí)菌及栽培菌種培養(yǎng)基的篩選優(yōu)化[J].北方園藝，2010，18（7）：167～168.

S567.3

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1005-7897（2016）08-0091-02

2016-4-9

肖建華（1964-），男，漢族，江蘇人，助理工程師，中專，從事營(yíng)林生產(chǎn)林改管理護(hù)林防火等工作。