張倩勉（廣西-東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，廣西南寧530021）

HPLC-MS法測定米酒中的甜蜜素含量

張倩勉
（廣西-東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，廣西南寧530021）

摘要：通過HPLC-MS方法，同時采用正負離子模式進行多反應(yīng)檢測（MRM），對米酒中的甜蜜素進行測定。結(jié)果表明，該方法的標準曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，檢出限（3S/N）為0.1 μg，回收率在85.4%～97.8%之間，RD值為2.9%～4.5%。該方法快速、簡便、靈敏、準確，適宜于米酒中甜蜜素的快速測定。

關(guān)鍵詞：HPLC-MS；米酒； 甜蜜素；含量

甜蜜素（sodium cyclamate），化學(xué)名為環(huán)己基氨基磺酸鈉，是食品生產(chǎn)中常用的合成甜味劑之一，廣泛應(yīng)用于各類食品。酒是糧食或水果經(jīng)發(fā)酵而成的飲料產(chǎn)品，富含人體需要的營養(yǎng)成分，適量飲用可預(yù)防多種疾病。隨著我國人民生活水平的提高，酒的消費量呈現(xiàn)了快速增長的趨勢，同時人們對酒中添加的人工合成甜味劑安全性的關(guān)注也越來越高［1-3］。GB 2760—2014《食品添加劑使用標準》明確規(guī)定，除了在配制酒中可以使用甜蜜素，而且最大使用量為0.65 g/kg外，在蒸餾酒和發(fā)酵酒中均不得使用甜蜜素。但是甜蜜素濫用現(xiàn)象時有發(fā)生，如果長期食用甜蜜素超標的食品，就會因攝入過量而對人體造成危害。因此監(jiān)測和評估甜蜜素的風險非常重要。目前測定酒中甜蜜素的方法，主要有液相色譜法［4-6］、氣相色譜法［7-10］、LC-MS法［11-19［20］、離子色譜法［21-23］、分光光度法［24］。由于酒中成分復(fù)雜，存在的干擾物質(zhì)較多，使得檢測結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。本試驗采用HPLC-MS法測定米酒中甜蜜素的含量，主要通過正負離子兩種模式進行多反應(yīng)檢測，物質(zhì)色譜峰的保留時間與標準工作液相應(yīng)化合物的保留時間一致，且樣品譜圖中組分定性定量離子的相對豐度比與濃度相當標準工作液譜圖中對應(yīng)組分的定性定量離子的相對豐度比一致，允許偏差參照歐盟標準（2002/657/EC）。使用該方法測定米酒中甜蜜素的含量更為準確、靈敏、高效。

1　材料與方法

1.1材料、試劑及儀器

米酒，抽檢；甜蜜素對照品，純度≥98.0%，xStandard公司；乙酸、甲醇均為色譜純；水為超純水。

儀器設(shè)備：Agilent-1260高效液相色譜-Triple Quad 5500質(zhì)譜儀，美國AB公司；S205DU分析天平。

1.2實驗方法

1.2.1對照品儲備液

準確稱取甜蜜素111.56 mg，置于10 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，即得甜蜜素對照品儲備液，濃度為10.93 mg/mL。

1.2.2對照品工作液

精密量取對照品儲備液1 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻（濃度為109.3 μg/mL），精密量取該溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得對照品工作液（濃度為1.093 μg/mL）。

1.2.3標準曲線

取5個10 mL容量瓶，分別加入對照品工作液0.1 mL、0.3 mL、0.6 mL、1.2 mL、2.0 mL，加水定容至刻度，搖勻，即得曲線L1、L2、L3、L4、L5，甜蜜素濃度分別為10.93 ng/mL、32.80 ng/mL、65.58 ng/mL、131.2 ng/mL、218.7 ng/mL。

1.2.4色譜條件

色譜柱：XBridge-C184.6 mm×75 mm，2.5 μm；流動相組成為0.1%乙酸水溶液-甲醇，流速：0.4 mL/min；柱溫30℃；進樣量：5 μL。梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1　流動相洗脫程序

1.2.5質(zhì)譜條件

1.2.5.1負離子模式

離子源：電噴霧離子源；檢測方式：MRM；氣簾氣流速：35 L/min；離子源溫度：650℃；碰撞氣流速：6 L/min；噴霧電壓：-4500V；輔助氣流速：50 L/min；其余質(zhì)譜條件見表2。

1.2.5.2正離子模式

離子源：電噴霧離子源；檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；氣簾氣流速：35 L/min；離子源溫度：650℃；碰撞氣流速：6 L/min；噴霧電壓：5500 V；輔助氣流速：50 L/min；其余質(zhì)譜條件見表2。

表2　甜蜜素檢測的質(zhì)譜條件

1.2.6樣品處理

1.2.6.1供試品溶液制備

取10 mL容量瓶，精密加入供試品10 mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22 μm濾膜過濾，濾液待上機分析。

1.2.6.2加標回收率實驗

取6個10 mL容量瓶，精密加入空白供試品10 mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，分為3組，分別加入0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL對照品工作液，并用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22 μm濾膜過濾，濾液待上機分析。

1.2.6.3檢出限溶液制備

取2個10 mL容量瓶，精密加入空白供試品10 mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，加入0.1 mL對照品工作液，并用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22 μm濾膜過濾，濾液待上機分析。

1.2.6.4樣品測定方法

將處理好的待測液放入自動進樣器的樣品盤上，進樣器自動進樣1 μL，數(shù)據(jù)采集采用Analyst Software工作站進行采集處理，采用Quantitative Analysis軟件進行數(shù)據(jù)處理，使用外標法進行數(shù)據(jù)分析，得出樣品溶液中甜蜜素的質(zhì)量濃度。再根據(jù)以下公式得出檢測結(jié)果。

結(jié)果計算公式：

式中：W為樣品中甜蜜素（以環(huán)己基氨基磺酸計）的含量（μg/L）；C為測得濃度（ng/mL）；V為稀釋倍數(shù)；M為樣品取樣量（mL）；0.891為環(huán)己基氨基磺酸鈉與環(huán)己基氨基磺酸的換算系數(shù)。

2　結(jié)果與分析

2.1質(zhì)譜與色譜條件的選擇

將含有1 μg/mL的甜蜜素標準溶液在正離子和負離子模式下進行全掃描，找到最佳的電離模式。結(jié)果表明在正負離子模式下，各有一對離子響應(yīng)較強，分別選擇［M-Na］以及［M+H］作為母離子，進行碰撞能量的優(yōu)化。以負離子模式下的離子對作為定量離子。質(zhì)譜條件見表2。本實驗用含0.1%乙酸的水溶液和甲醇作為流動相，由于酒中成分復(fù)雜，故采用梯度洗脫，使目標化合物能更好地與其他干擾物質(zhì)分離。

2.2線性關(guān)系

把標準品曲線注入液相質(zhì)譜聯(lián)用儀，以峰面積為（Y）軸，相對質(zhì)量濃度為（X）軸建立標準曲線，并求出回歸方程，結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示，用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測甜蜜素在10～200 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R為0.9998，能夠滿足定量分析的需要。結(jié)果偏差參照歐盟標準（2002/657/EC），檢驗結(jié)果用定性定量離子峰面積比進行判定。從所測得待測物的結(jié)果顯示，定性定量離子峰面積比在標準曲線相應(yīng)的定性定量離子峰面積比規(guī)定的標準偏差范圍內(nèi)。所參照的標準偏差見表3，線性關(guān)系及結(jié)果見圖1、表4。

表3　 歐盟標準偏差

2.3回收率

回收率實驗結(jié)果表明，添加不同濃度的甜蜜素，回收率在85.4%～97.8%之間，RD值為2.9%～4.5%。而且回收率結(jié)果的定性定量離子峰面積之比均在歐盟標準規(guī)定的偏差范圍內(nèi)。結(jié)果見表5。

2.4樣品檢測結(jié)果

按照1.2.6對樣品進行前處理，然后進樣分析。用負離子模式的離子對為定量離子，并通過定性定量離子峰面積之比，參照歐盟標準偏差對結(jié)果進行判定，最后根據(jù)標準曲線采用外標法定量，計算樣品中甜蜜素（以環(huán)己基氨基磺酸計）的含量，結(jié)果見表6。

圖1　甜蜜素標準曲線圖

表4　標準曲線、待測樣品、回收率以及檢出限正負離子峰面積的關(guān)系

表6　米酒中甜蜜素的測定結(jié)果

2.5方法檢出限

在本實驗條件下，在空白樣品中添加標準溶液進行測定，以質(zhì)譜儀3倍信噪比計算目標物組分的檢出限為0.1 μg，而且其正負離子峰面積之比在所參考的標準偏差范圍內(nèi)。

表5　線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)和標準加入回收率

3　結(jié)論

本研究建立了米酒中甜蜜素的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，同時采用正負離子模式進行多反應(yīng)監(jiān)測，并參照歐盟標準偏差，大大減少了結(jié)果的假陽性概率，定性的準確性大幅提高。該方法便于操作，靈敏度、重現(xiàn)性良好，檢出限低，可作為米酒中甜蜜素的確證分析。

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優(yōu)先數(shù)字出版時間：2016-03-23；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20160323.1530.006.html。

中圖分類號：TS262.4；TS261.4；TS261.7

文獻標識碼：A

文章編號：1001-9286（2016）07-0116-03

DOI：10.13746/j.njkj.2016002

收稿日期：2016-01-06

作者簡介：張倩勉（1981-），女，廣西北海人，碩士研究生，工程師，研究方向：食品安全檢測。

Determination of Sodium Cyclamate Content in Rice Wine by HPLC-MS

ZHANG Qianmian
（Guangxi&ASEAN Inspection&Testing Center For Food and Drug Safety，Nanning，Guangxi 530021，China）

Abstract:Sodium cyclamate content in rice wine was measured by HPLC-MS coupled with the positive and negative ions modes of MRM. The results showed that a good linearity was obtained for the standard curve of the method，its correlation coefficient was high（r=0.9998），its detection limit was 0.1 μg（3S/N），its recovery rate was between 85.4%-97.8%，and RD value was 2.9%-4.5%.This method was rapid，simple，sensitive and accurate，and it was a suitable method for rapid determination of sodium cyclamate content in rice wine.

Key words:HPLC-MS；rice wine；sodium cyclamate；content