卵巢癌組織中肺癌抑癌基因1基因啟動子甲基化狀態(tài)及其臨床意義

游顏杰　劉佳佳　苑　藝　高鳳蘭

(漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，河南　漯河　462000)

?

卵巢癌組織中肺癌抑癌基因1基因啟動子甲基化狀態(tài)及其臨床意義

游顏杰劉佳佳苑藝高鳳蘭

(漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，河南漯河462000)

〔摘要〕目的探討肺癌抑癌基因1(TSLC1)在卵巢癌中基因啟動子甲基化狀態(tài)及臨床意義。方法應(yīng)用甲基化特異性PCR檢測TSLC1基因啟動子在50例卵巢癌組織和10例正常卵巢組織中的甲基化狀態(tài)并結(jié)合臨床病理資料進行分析。 結(jié)果在卵巢癌組織中TSLC1甲基化陽性率(36%，18/50)，正常卵巢組織未出現(xiàn)TSLC1甲基化。TSLC1甲基化與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Silverberg分期密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論TSLC1甲基化可能是參與卵巢癌發(fā)展的重要分子事件。

〔關(guān)鍵詞〕肺癌抑癌基因1；卵巢癌；DNA甲基化

肺癌抑癌基因1(TSLC1)介導(dǎo)細胞間相互黏附、胞內(nèi)信號傳導(dǎo)及膜蛋白與細胞骨架之間的交聯(lián)，其表達下調(diào)是惡性腫瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因素之一〔1〕。已有研究證實，基因啟動子區(qū)域異常甲基化是導(dǎo)致其TSLC1基因表達降低或沉默的重要機制〔2～4〕。本實驗旨在深入探討TSLC1基因在卵巢癌組織中甲基化狀態(tài)及其臨床意義。

1材料與方法

1.1一般資料收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院在2004～2010年間手術(shù)切除50例原發(fā)卵巢癌組織標(biāo)本?；颊吣挲g22～71歲，中位年齡50.2歲，患者均在入院后經(jīng)病理確診，術(shù)前未接受放化療。依據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000)分期。收集正常卵巢組織27例為實驗對照。

1.2主要試劑GTpureTM石蠟組織DNA提取試劑盒購自基因科技公司，EpiTect Kit與HotStar Taq熱啟動酶購自Qiagen公司；dNTP與合成引物購自大連Takara公司，其他常規(guī)化學(xué)試劑均為進口或國產(chǎn)分析純。

1.3基因組DNA提取與亞硫氫酸鹽修飾石蠟組織標(biāo)本基因組DNA提取使用GTpureTM組織DNA提取試劑盒，以EpiTect Kit進行上述樣本亞硫酸氫鹽修飾與純化，各項操作按說明書進行。

1.4甲基化特異性PCR(MSP)檢測TSLC1基因啟動子甲基化狀態(tài)反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；94℃變性60 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，35個循環(huán)。引物序列見表1。甲基化狀態(tài)判定標(biāo)準(zhǔn)如下，僅非甲基化引物擴增出相應(yīng)片段為甲基化陰性；僅有甲基化引物擴增出相應(yīng)片段即為完全甲基化，甲基化引物與非甲基化引物均擴增出相應(yīng)片段為不完全甲基化，完全甲基化和不完全甲基化均計為甲基化檢測陽性。

表1　MSP引物序列

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件行t及χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1卵巢癌中TSLC1基因啟動子甲基化狀態(tài)MSP分析顯示，50例食管癌組織中18例檢測TSLC1甲基化陽性(18/50，36%)，而在27例正常對照卵巢組織中未出現(xiàn)TSLC1甲基化(圖1)。

圖1　MSP檢測TSLC1基因在卵巢癌組織與正常卵巢中的甲基化狀態(tài)

2.2TSLC1甲基化與臨床病理參數(shù)的關(guān)系表2可見，結(jié)合臨床病例資料統(tǒng)計分析，TSLC1甲基化陽性在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.002)，在Silverberg分期G3期高于G1+G2期(P<0.001)，而與患者年齡、絕經(jīng)情況、FIGO分期、病理分型、雌激素受體(ER)表達、孕激素受體(PR)表達及Ki-67表達等因素?zé)o關(guān)。

3討論

TSLC1屬于免疫球蛋白超家族成員，其基因定位于人染色體11q23.2，全長約300 kb，編碼由442個氨基酸殘基組成的跨膜糖蛋白，通過介導(dǎo)細胞間相互黏附、胞內(nèi)信號傳導(dǎo)及膜蛋白與細胞骨架之間的交聯(lián)〔5〕。TSLC1的亞細胞定位結(jié)構(gòu)特征與上皮細胞鈣黏蛋白、連接素等經(jīng)典的黏附分子相似，此外TSLC1還是誘導(dǎo)細胞周期的停滯及細胞凋亡過程中的關(guān)鍵分子〔6〕。啟動子甲基化引起的TSLC1表達下調(diào)或缺失與食管癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展的密切相關(guān)〔2～4,7,8〕。然而，對于TSLC1基因甲基化在卵巢腫瘤中的研究目尚未有相關(guān)報道。本研究結(jié)果表明TSLC1甲基化可能在卵巢癌發(fā)展過程中的特異發(fā)生的重要分子事件之一，是潛在的卵巢癌診治的分子標(biāo)志物。明確TSLC1甲基化與卵巢癌臨床病理的關(guān)系可以指導(dǎo)臨床醫(yī)生對患者制定更加完善的個體化治療方案，從而提高卵巢癌的整體治療水平。

4參考文獻

1Murakami Y.Involvement of a cell adhesion molecule,TSLC1/IGSF4,in human oncogenesis〔J〕.Cancer Sci,2005;96(9):543-52.

2Ito T,Shimada Y,Hashimoto Y,etal.Involvement of TSLC1 in progression of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Cancer Res,2003;63(19):6320-6.

3Xu PW,Xu HY,Liu XN,etal.Aberrant promoter methylation of cell adhesion-related genes associated with clinicopathologic features in non-small cell lung cancer in China〔J〕.Cancer Biomark,2013;13(2):115-22.

4Liang QL,Chen GQ,Li ZY,etal.Function and histopathology of a cell adhesion molecule TSLC1 in cancer〔J〕.Cancer Invest,2011;29(2):107-12.

5Wakayama T,Iseki S.Role of the spermatogenic-Sertoli cell interaction through cell adhesion molecule-1 (CADM1) in spermatogenesis〔J〕.Anat Sci Int,2009;84(3):112-21.

6Ito A,Hagiyama M,Oonuma J.Nerve-mast cell and smooth muscle-mast cell interaction mediated by cell adhesion molecule-1,CADM1〔J〕.J Smooth Muscle Res,2008;44(2):83-93.

7Heller G,Geradts J,Ziegler B,etal.Downregulation of TSLC1 and DAL-1 expression occurs frequently in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res Treat,2007;103(3):283-91.

8Chen K,Wang G,Peng L,etal.CADM1/TSLC1 inactivation by promoter hypermethylation is a frequent event in colorectal carcinogenesis and correlates with late stages of the disease〔J〕.Int J Cancer,2011;128(2):266-73.

〔2015-02-18修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目：河南省科技攻關(guān)計劃項目(142102310464)；漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校自然科學(xué)項目(2013，Y-J You)

通訊作者：高鳳蘭(1966-)，女，教授，碩士，主要從事腫瘤病理學(xué)研究。

〔中圖分類號〕R73

〔文獻標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)13-3200-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.13.051

第一作者：游顏杰(1977-)，男，博士后，講師，主要從事腫瘤分子病理與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究。