田　笑，李明亮

(中國人民解放軍第二〇二醫(yī)院,沈陽 110000)

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·臨床研究·

血小板相關(guān)免疫球蛋白的檢測在妊娠合并免疫性血小板減少性紫癜患者中的應(yīng)用

田笑，李明亮

(中國人民解放軍第二〇二醫(yī)院,沈陽 110000)

摘要:目的探討應(yīng)用流式細胞術(shù)(FCM)檢測血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)在妊娠合并免疫性血小板減少性紫癜(ITP)患者中的應(yīng)用價值。方法選取100例妊娠合并ITP的患者作為試驗組，同時選取100例健康妊娠婦女作為對照組，依據(jù)血小板計數(shù)(PLT)結(jié)果，將試驗組分為4組(1～4組)，再用FCM檢測各組PAIg水平。結(jié)果試驗組患者PLT<70×109/L時,PAIgA、PAIgG和PAIgM顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PLT與PAIgA、PAIgG和PAIgM的陽性率呈負相關(guān)性(r<0,P<0.05)。結(jié)論FCM檢測PAIg具有快速、靈敏、簡便、可靠等特點，可用于妊娠合并ITP的輔助診斷。

關(guān)鍵詞:妊娠；血小板；免疫球蛋白；紫癜；流式細胞術(shù)

產(chǎn)后出血是產(chǎn)科的嚴重并發(fā)癥，引起產(chǎn)后出血的原因很多而且很復(fù)雜，其中凝血功能障礙是重要原因之一，而妊娠合并免疫性血小板減少性紫癜(ITP)又是造成孕產(chǎn)婦凝血功能障礙的原因之一。雖然妊娠和ITP的發(fā)生沒有絕對的聯(lián)系，但有過ITP病史的女性一般認為妊娠合并ITP發(fā)生率較健康人群高[1]，提示雌激素可能參與ITP的發(fā)病。ITP是一種免疫性血小板破壞過多造成的疾病[2]。其中一部分抗體針對血小板表面多種抗原抑制血小板功能,使出血嚴重；一部分能活化血小板,加劇血小板的減少[3]。由于患者機體免疫系統(tǒng)異常，體內(nèi)產(chǎn)生血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)增多導致血小板破壞增加，血小板生存時間縮短，其特點是廣泛的皮膚、黏膜、內(nèi)臟出血；骨髓中巨核細胞幼稚化；出血時間延長，血塊收縮不良，束臂試驗陽性等。PAIg是由機體免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)紊亂而產(chǎn)生的一種自身免疫性抗體，它可以引起多種臨床疾病或者癥狀，比如血小板減少癥、ITP,輸血后紫癜等[4]，PAIg的檢測是ITP診斷的重要指標。目前臨床多采用流式細胞術(shù)(FCM)來檢測患者血液中的PAIg，包括PAIgA、PAIgG 和PAIgM[5]。本試驗通過檢測妊娠合并ITP患者血小板計數(shù)(PLT)和PAIg水平，以探討在妊娠合并ITP患者預(yù)防產(chǎn)后出血中的作用及臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料試驗組100例，來自2015年3～9月在本院住院、門診和優(yōu)生優(yōu)育中心就診的妊娠合并血小板減少的婦女，入選標準：初產(chǎn)婦，無其他合并癥，排除其他病史及繼發(fā)性血小板減少性因素，且未服用過影響PLT功能及凝血功能的藥物，所有患者均符合妊娠合并ITP的診斷標準。年齡24～35歲，平均27歲。對照組100例均來自健康產(chǎn)檢的健康妊娠婦女，年齡24～32歲，平均28歲。

1.2儀器與試劑主要儀器是美國BD公司生產(chǎn)的BD Calibur流式細胞儀，采用其原裝數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，試劑采用的是BD Pharmingen IgM-APC、BD Pharmingen IgG-PE和BD Pharmingen IgA-FITC、PBS緩沖液。輔助儀器是德國西門子ADVIA2120全自動細胞分析儀。所有儀器原裝質(zhì)控品測試結(jié)果均在控。

1.3方法

1.3.1采血用真空采血管采集受試者肘靜脈血2管，每管各3 mL,一管用EDTA-K2抗凝，用于全血細胞分析；另一管用枸櫞酸鈉按1∶9抗凝，用作PAIg的檢測。

1.3.2全血細胞分析檢測應(yīng)用德國西門子ADVIA2120全自動細胞分析儀檢測PLT，并依據(jù)PLT結(jié)果進行分組。

1.3.3PAIg的測定應(yīng)用BD Calibur流式細胞分析儀進行測定。取受試者富血小板血漿，用PBS緩沖液洗滌后，免疫熒光染色，同時設(shè)同型對照管，以下步驟均按流式細胞儀操作規(guī)程操作。將處理好的樣本蓋好，避光保存于2～8 ℃，以待上機檢測。儀器自帶軟件分析結(jié)果以百分率表示，比例超過5.0%為陽性。

2結(jié)果

2.1PLT結(jié)果及分組情況本研究共計數(shù)了試驗組100例妊娠合并ITP患者的PLT，根據(jù)PLT結(jié)果，將試驗組分為1～4組，結(jié)果顯示其中PLT在(50～70)×109/L者居多，占納入研究對象的39.00%，對照組PLT為(150～220)×109/L，見表1。

表1　　PLT計數(shù)及分組結(jié)果

2.2PAIg檢測結(jié)果試驗組與對照組PAIg檢測結(jié)果見表2。經(jīng)統(tǒng)計學分析，1、2和3組的PAIgA、PAIgG、PAIgM的測定值與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而4組與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。妊娠合并ITP患者與妊娠健康者PAIg陽性率結(jié)果，見表3。試驗組中1、2、3組的陽性率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其中1組的陽性率為最高，且PLT與PAIg的陽性率呈負相關(guān)性(r<0,P<0.05)。流式細胞儀檢測健康妊娠者和妊娠合并ITP患者PAIg結(jié)果見圖1、2。

表2　　各組PAIg測定結(jié)果

表3　　各組PAIg陽性率比較[n(%)]

圖1　　健康妊娠者PAIg結(jié)果圖

圖2　　妊娠合并ITP患者PAIg結(jié)果圖

3討論

產(chǎn)后出血是指胎兒娩出后，經(jīng)陰道生產(chǎn)的產(chǎn)婦出血量超過500 mL或經(jīng)剖腹生產(chǎn)的產(chǎn)婦出血超過1 000 mL，它不僅是分娩期內(nèi)一種常見的嚴重產(chǎn)科并發(fā)癥，更是導致產(chǎn)婦死亡的主要原因之一[6]。產(chǎn)后出血的主要病因包括子宮收縮乏力、凝血功能障礙、軟產(chǎn)道裂傷及胎盤因素等，其臨床表現(xiàn)為產(chǎn)道出血急而量多，或持續(xù)性小量出血，多發(fā)生在產(chǎn)后2 h內(nèi)，一般發(fā)病較突然，如果短時間內(nèi)不能采取及時有效的措施進行控制，則很可能發(fā)生失血性休克，從而導致產(chǎn)婦死亡。產(chǎn)后出血一旦發(fā)生，就很難控制，后果不堪設(shè)想，因此，防患于未然，如何預(yù)防產(chǎn)后出血就十分重要。

ITP是因免疫機制使血小板破壞增多的一種臨床綜合征，是最常見的一種血小板減少性紫癜，由于本病不影響生育，因此合并妊娠者常見，是產(chǎn)科嚴重并發(fā)癥之一。此外，有過ITP病史的女性，妊娠期容易復(fù)發(fā)，提示雌激素可能參與ITP的發(fā)病。目前認為ITP是一種器官特異性自身免疫性出血性疾病，是由于人體產(chǎn)生了抗自身血小板的抗體導致單核巨噬系統(tǒng)破壞血小板過多造成血小板減少，其發(fā)病原因尚不完全清楚，發(fā)病機制也未完全闡明。臨床診斷主要基于PLT的減少、骨髓中巨核細胞數(shù)正?；蛟龆?，患者血液中存在PAIg。這種由病理性免疫所產(chǎn)生的抗體特異地結(jié)合于血小板膜上，引起血小板的破壞加速[7]。目前認為主要是針對血小板膜糖蛋白(GPⅠb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)的抗體,這些自身抗體稱為PAIg，由于血小板與巨核細胞有共同抗原，因此這類抗體可同樣作用于巨核細胞，導致其成熟障礙，使血小板進一步減少。在FCM測定方法出現(xiàn)之前，PAIg檢測的常用方法是ELISA法[8-9]，但是這種方法耗時長，假陽性高，步驟繁瑣，而FCM法卻能很好地克服這些缺點，特異性地針對細胞膜表面抗體進行檢測[9-10]，且便于操作。FCM法所需標本量少，即使PLT<10×109/L仍可精準分析，方法簡便、省時、可隨時測定單個標本，而且能夠精確地了解血小板上3種不同抗體的分布情況，可以作為一個常規(guī)的臨床輔助診療檢測項目給臨床診斷提供更多的幫助[11]。

本試驗通過對100例妊娠合并ITP患者進行研究，結(jié)果顯示，PLT結(jié)果與PAIg陽性率呈負相關(guān)關(guān)系，因此建議臨床對ITP患者可動態(tài)觀察其PLT，作為判斷、監(jiān)測ITP病情的一個輔助指標[12]；當PLT<70×109/L時，PAIgA、PAIgG、PAIgM的陽性檢出率均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。尤其當PLT<30×109/L時，3種抗體的陽性檢出率達均可以達到100.00%。妊娠合并ITP患者相對于健康妊娠者的PAIg明顯升高，由此可見PAIg升高在妊娠合并ITP發(fā)病機制中的作用不容忽視，并可將其作為監(jiān)測妊娠合并ITP患者病情進展的一項重要指標。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.036

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)14-1990-03

(收稿日期：2016-02-11修回日期：2016-04-29)