用兩種方法測(cè)定葡萄酒中甲醇含量的比較

譚桂華（湖南省南縣市場(chǎng)和質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，湖南 南縣 413200）

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用兩種方法測(cè)定葡萄酒中甲醇含量的比較

譚桂華（湖南省南縣市場(chǎng)和質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，湖南 南縣 413200）

本文通過(guò)與蒸餾法-氣相色譜外標(biāo)法比較，采用氣相色譜頂空外標(biāo)法測(cè)定了葡萄酒中甲醇含量。結(jié)果表明，甲醇含量在（0～2000）μg/mL范圍內(nèi)呈線性，同時(shí)做了回收率和精密度試驗(yàn)，取得了滿意的結(jié)果，說(shuō)明了氣相色譜頂空外標(biāo)法的可行性。

頂空；外標(biāo)法；回收率；精密度

葡萄酒是用新鮮的葡萄或葡萄汁經(jīng)發(fā)酵釀成的酒精飲料。適度飲用紅葡萄酒具有美容養(yǎng)顏、抗衰老的功能。

但近些年來(lái)，有些企業(yè)投機(jī)倒把，從中牟取暴利。如果有用工業(yè)酒精酒精、香精和色素調(diào)配而成，工業(yè)酒精中含大量的甲醇；有的葡萄酒在釀制發(fā)酵過(guò)程中也會(huì)產(chǎn)生甲醇，如釀制不當(dāng)，就會(huì)產(chǎn)生大量的甲醇。甲醇對(duì)人體具有強(qiáng)烈的毒性，其在人體新陳代謝中會(huì)氧化成比它毒性強(qiáng)得多的甲醛和蟻酸 （甲酸的俗稱），飲用含有甲醇的酒可導(dǎo)致人頭暈、頭痛等，還可造成失明、肝病，甚至是死亡。葡萄酒中含有大量糖類、氨基酸、色素、維生素等多種難揮發(fā)成分。這些物質(zhì)因極性大而在氣相色譜毛細(xì)管色譜柱中死吸附，造成色譜柱的污染和柱效大大降低，從而使檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性都受到影響，造成色譜柱的使用壽命降低。加之葡萄酒中含有大量糖類，從而使之粘度大大增加，如果直接強(qiáng)行進(jìn)樣，會(huì)使進(jìn)樣針損壞，造成實(shí)驗(yàn)成本大大增加。GB/T15038-2006采用了蒸餾后對(duì)其行預(yù)處理，去除樣品中不揮發(fā)性物質(zhì)以保護(hù)色譜柱，直接進(jìn)樣-氣相色譜外標(biāo)法和由于甲醇的沸點(diǎn)比較低，采用了氣相色譜頂空法，兩種方法進(jìn)行了比較。蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法定量（圖1甲醇出峰時(shí)間：4.09min），并用75%色譜純乙醇做了空白 （圖3乙醇的出峰時(shí)間：4.51min）。氣相色譜頂空法定量（圖2甲醇出峰時(shí)間：1.97min），并用75%色譜純乙醇做了空白（圖4乙醇的出峰時(shí)間：2.15min）（如圖5～6）。

圖1　蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖

圖2　氣相色譜頂空法測(cè)定甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖

圖3　蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定75%色譜純乙醇?xì)庀嗌V圖

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

氣相色譜儀 （附氫火焰離子化檢測(cè)器 （FID））：GC-2010型，日本島津；

圖4　氣相色譜頂空法測(cè)定75%色譜純乙醇?xì)庀嗌V圖

圖5　蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定葡萄酒樣品中甲醇?xì)庀嗌V圖

圖6　氣相色譜頂空法測(cè)定葡萄酒樣品中甲醇?xì)庀嗌V圖

頂空進(jìn)樣器（與GC-2010配套）：HSS86.50意大利丹尼；

電子分析天平：AEY-210型，長(zhǎng)沙湘儀；

無(wú)水乙醇、無(wú)水甲醇：色譜純（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.9%），德國(guó)默克。

1.2方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：30.0m×1.50μm（膜厚）×0.53mm（內(nèi)徑）Rtx-1毛細(xì)管柱；

檢測(cè)器：溫度為：250℃，附氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）；流速：載氣（N2）30mL/min，空氣400mL/min，氫氣40mL/min；

溫度：柱溫60℃，保留10min（蒸餾法-氣相色譜外標(biāo)法）或4min（氣相色譜頂空法）；

氣化室：溫度為250℃，分流進(jìn)樣（分流比為1：10）；

進(jìn)樣量：1μL；

頂空進(jìn)樣器爐溫：70℃。

1.2.2分析步驟

（1）樣品制備

①蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法：取葡萄酒樣100mL于100mL容量瓶中，倒入蒸餾瓶中，分別用50mL超純水洗滌容量瓶三次，合并于蒸餾瓶中，用原100mL容量瓶作接收瓶。當(dāng)蒸餾接近100mL時(shí)停止蒸餾，并用超純水補(bǔ)齊至刻度。

②氣相色譜頂空外標(biāo)法：用10mL容量瓶準(zhǔn)確移取10mL的葡萄酒樣品，然后倒入20mL頂空瓶中，用標(biāo)配膠塞封口。上機(jī)備用。

（2）測(cè)定：標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：準(zhǔn)確稱取1.0110g色譜純甲醇于100mL容量瓶中，用75%色譜純乙醇定容至刻度，搖勻作儲(chǔ)備液，此時(shí)甲醇儲(chǔ)備液濃度為10.11mg/mL。分別移取儲(chǔ)備液0mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于50mL容量瓶中，用75%色譜純乙醇定容至刻度，搖勻。此時(shí)的濃度分別為0μg/mL、404.4μg/mL、808.8μg/mL、1213.2μg/mL、1617.6μg/ mL、2022.0μg/mL的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。

采用甲醇作為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析檢測(cè)，以甲醇的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，見(jiàn)圖7～8。

圖7　用氣相色譜頂空外標(biāo)法所建立的甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖8　用蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法所建立的甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

y=548.72x+21571，R2=0.9997

甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

y=540.93x-30512，R2=0.9995

該標(biāo)準(zhǔn)曲線在甲醇濃度在（0～2000）μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

1.2.3甲醇結(jié)果計(jì)算

式中：w——葡萄酒樣品中甲醇的含量，mg/L；

v——試樣的體積，mL；

c——測(cè)定葡萄酒樣品中甲醇的含量，μg/mL；

v定——樣品的定容體積，mL。

2　結(jié)果與分析

2.1兩種方法測(cè)定葡萄酒中甲醇含量的測(cè)定

對(duì)六種不同葡萄酒樣品中的甲醇含量進(jìn)行了測(cè)定，樣品分別按蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法和氣相色譜頂空外標(biāo)法的前處理進(jìn)行了處理。上機(jī)備用。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1～2。

表1　蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定葡萄酒中甲醇含量

表2　氣相色譜頂空外標(biāo)法測(cè)定葡萄酒中甲醇含量

由表1和表2可以看出，氣相色譜頂空外標(biāo)法的結(jié)果明顯高于蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法，這主要是在蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法處理葡萄酒樣品的過(guò)程中，加入了超純水洗滌裝了葡萄酒樣品的容量瓶，另外葡萄酒樣品中也含有大量的水，我們知道甲醇中有羥基，為極性溶劑，它能與水形成氫鍵，從而使范德華力增大，導(dǎo)致甲醇未完全蒸餾出來(lái)，導(dǎo)致結(jié)果偏低。

2.2精密度和回收率的測(cè)定

蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法：在已知質(zhì)量濃度的葡萄酒樣品取80mL于容量瓶中，分別加入3種濃度的甲醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液10mL，用75%乙醇定容至100mL容量瓶中，倒入蒸餾瓶中，分別用50mL超純水洗滌容量瓶三次，合并于蒸餾瓶中，用原100mL容量瓶作接收瓶。當(dāng)蒸餾接近100mL時(shí)停止蒸餾，并用超純水補(bǔ)齊至刻度。每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)定精密度和加標(biāo)回收率（見(jiàn)表3）。

表3　蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法精密度和回收率的測(cè)定

氣相色譜頂空外標(biāo)法：在已知質(zhì)量濃度的葡萄酒樣品取8mL于容量瓶中，分別加入3種濃度的甲醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL，用75%乙醇定容至10mL，再倒入20mL的頂空瓶中制成樣品。由于本實(shí)驗(yàn)采用的是頂空法，進(jìn)入氣相的是取的氣體樣，不具備重復(fù)進(jìn)樣的性質(zhì)，每瓶樣品只能進(jìn)一針，故而把每種濃度制備成樣品6瓶，對(duì)每一種濃度的6個(gè)樣品分別計(jì)算各種濃度加標(biāo)量的精密度和回收率，檢驗(yàn)方法具有穩(wěn)定性和可行性，所得結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　氣相色譜頂空外標(biāo)法精密度和回收率的測(cè)定

由表3～4可知，氣相色譜頂空外標(biāo)法加標(biāo)量的回收率和精密度都明顯高于蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法，這進(jìn)一步確認(rèn)了氣相色譜頂空外標(biāo)法得可行性。

3　結(jié)語(yǔ)

本文通過(guò)與蒸餾-氣相色譜外標(biāo)法比較，建立了氣相色譜頂空外標(biāo)法來(lái)準(zhǔn)確測(cè)量葡萄酒樣品中甲醇含量的方法。這樣避免了在氣相色譜圖中直接進(jìn)樣溶劑的保留時(shí)間與甲醇的保留時(shí)間的部分重疊，從而在很大程度上避免了結(jié)果不準(zhǔn)確。通過(guò)以上數(shù)據(jù)，可以得出：用氣相色譜頂空外標(biāo)法所測(cè)定的葡萄酒樣品中中甲醇的回收率和精密度都達(dá)到了很高的要求，說(shuō)明了氣相色譜頂空外標(biāo)法的可行性；而且前處理簡(jiǎn)便易操作，氣相色譜圖雜質(zhì)引入少，分離效果好，氣相色譜頂空外標(biāo)法線性關(guān)系良好，為我們測(cè)定葡萄酒樣品中甲醇含量時(shí)，提供了一種思路。

譚桂華（1977-），女，工程師，本科，主要從事食品檢測(cè)方面的工作。

TS262.6

A

2095-2066（2016）09-0224-02

2016-3-12