Wnt2、dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)和評(píng)價(jià)

常慧新汶礦業(yè)集團(tuán)孫村煤礦醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東新泰　271219

Wnt2、dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)和評(píng)價(jià)

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目的 探究Wnt2、dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)及意義。方法 整群收集2014年12月—2015年12月該院確診的食道鱗癌手術(shù)切除標(biāo)本131例和131例健康食管組織標(biāo)本，檢測(cè)Wnt2、Dvl，分析與臨床病理特征關(guān)系。結(jié)果在食管鱗癌組織中Wnt2及Dvl陽(yáng)性率分別為89.3%和78.2%，正常食管組織中Wnt2及Dvl的陽(yáng)性率分別為11.9%、8.6%，P＜0.05。且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織陽(yáng)性率較高。結(jié)論Wnt2、Dvl蛋白的表達(dá)異?？赡芘c食管鱗癌的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。

Wnt2蛋白；Dvl蛋白；食管鱗癌

［Abstract］Objective To investigate the Wnt2，DVL protein in esophageal squamous cell carcinoma tissue expression and significance.Methods In December 2014 to December 2015 diagnosed esophageal carcinoma resection specimens of 131 cases and 131 healthy esophageal tissue specimens，detection of Wnt2 and DVL，analysis and clinical pathological features. Results In esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）positive rate of Wnt2 and DVL were 89.3%and 78.2%，the positive rate of normal esophageal tissues Wnt2 and DVL were 11.9%8.6%P＜0.05.And lymph node metastasis tissue the positive rate is high.Conclusion Wnt2，the abnormal expression of Dvl protein may be closely related to the occurrence and development of esophageal squamous cell carcinoma.

［Key words］Dvl protein；Wnt2 protein；Esophageal squamous cell carcinoma

食道癌是常見的消化道惡性腫瘤，在我國(guó)十大鱗癌占90%以上。目前食管癌的有效治療手段主要依賴早期手術(shù)，但由于食道癌患者在早期無(wú)明顯的特異癥狀，故80%患者發(fā)現(xiàn)并就診時(shí)已為晚期［1］。因此明確特異的分子指標(biāo)用于食管癌的人群篩查，對(duì)早期診斷及治療都有重大意義［2］。該研究采用免疫組織化法檢測(cè)了2014年12月—2015年12月該院收治的131例食道癌患者的食道鱗癌組織及健康食管組織中的Wnt2、Dvl蛋白的表達(dá)，探究其對(duì)食道癌發(fā)生的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

整群收集2014年12月—2015年12月該院收治的診斷明確為食道鱗癌手術(shù)切除標(biāo)本131例，所有患者均未經(jīng)放化療。該次研究均經(jīng)過所有患者或者其家屬知情并同意，并由該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施。其中男79例，女52例，年齡27～79（57.6±11.29）歲。按照2001年國(guó)際抗癌聯(lián)合會(huì)修訂的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)［3］，Ⅰ+Ⅱ期76例，Ⅲ+Ⅳ期55例。其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例。同時(shí)收集131例健康食管組織作為對(duì)照組。兩組患者在年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 試劑與方法

1.2.1 主要試劑山羊抗人Wnt2及Dvl單克隆抗體由美國(guó)Santa Cruz公司提供，通用二抗購(gòu)自上海魯汶生物科技有限公司。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法①1.1中獲得的食道鱗癌手術(shù)切除標(biāo)本放置于隔水式60℃恒溫烘烤12 h；②脫蠟與水化：組織標(biāo)本在二甲苯中浸泡10 min 2次后，依次用無(wú)水乙醇、95%乙醇、70%乙醇分別浸泡5 min；③PBS洗3次，每次5 min，將組織標(biāo)本置于過氧化氫的甲醇溶液（90%甲醇），室溫靜置10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響；④PBS液洗3次各5 min后滴加山羊血清封閉液，室溫30 min后傾多余液體；⑤加入適量一抗：Wnt及Dvl，在4℃下過夜，次日在37℃復(fù)溫45 min后，PBS洗3次各5 min；⑥加入相應(yīng)的二抗后靜置30 min，PBS洗3次各5 min；⑦DAB顯色，并在顯微鏡下觀察染色程度，PBS沖洗10 min；⑧蘇木精復(fù)燃2 min后用不同濃度酒精脫水后沖洗10 min；⑨二甲苯透明、中性樹膠封片后，光鏡下觀察；⑩PBS取代一抗制備的陰性對(duì)照

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件來(lái)完成，計(jì)數(shù)資料以［n（%）］表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 Wnt2及Dvl蛋白在食管鱗癌組織及正常食管組織中的表達(dá)

在食管鱗癌組織中Wnt2及Dvl的陽(yáng)性率分別高于正常食管組織中表達(dá)，P＜0.05。見表1。

表1　Wnt2及Dvl蛋白在食管鱗癌組織及正常食管組織中的表達(dá)［n（%）］

2.2 食管鱗癌組織中Wnt2、Dvl的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Wnt2、Dvl的表達(dá)在性別、年齡上不存在顯著性差異（P＞0.05）；在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期Wnt2及Dvl陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ+Ⅱ表達(dá)率，P＜0.05。在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中Wnt蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2　食管鱗癌組織中Wnt2、Dvl的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3　討論

腫瘤的產(chǎn)生與發(fā)展過程極其復(fù)雜，涉及多種因素及基因，需要經(jīng)過多個(gè)階段才能最終形成。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，癌基因組學(xué)及信號(hào)通路學(xué)等學(xué)科的不斷發(fā)展，人們對(duì)細(xì)胞癌變的機(jī)制認(rèn)識(shí)日趨豐富［4］。目前在人類染色體中已發(fā)現(xiàn)19種Wnt基因家族成員，其中Wnt2與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。當(dāng)Wnt2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被異常激活時(shí)，Wnt2蛋白在細(xì)胞膜上與跨膜受體結(jié)合，結(jié)合物可以刺激細(xì)胞，激活其中的Dvl。Dvl可以抑制β-catenin與腳手架蛋白、蛋白激酶GSK-3β等結(jié)合生成降解化合物，從而避免了β-catenin的降解。當(dāng)胞質(zhì)的β-catenin積累到一定濃度時(shí)，可移入細(xì)胞核內(nèi)與核內(nèi)的TCF/LEF結(jié)合，形成β-catenin-TCF/LEF復(fù)合物，該復(fù)合物可啟動(dòng)靶基因細(xì)胞周期蛋白（cyclin）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-7、干細(xì)胞標(biāo)志物CD44等的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)［5］。

李韶等［6］研究證實(shí)Wnt2經(jīng)典信號(hào)通路及其下游靶基因β-catenin的表達(dá)在食管癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，且隨病理分期的升高表達(dá)逐漸增強(qiáng)。該次研究在探討食管鱗癌組織中Wnt2、Dvl的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系時(shí)也發(fā)現(xiàn)：在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期Wnt2及Dvl陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ+Ⅱ表達(dá)率，P＜0.05。在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中Wnt蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。與王勇濤等［7］文獻(xiàn)中結(jié)果一致。王勇濤等研究發(fā)現(xiàn)Wnt2、Dvl蛋白在癌組織中的相對(duì)表達(dá)量明顯高于正常組織［8］。該研究結(jié)果表明食管鱗癌組織中，Wnt2及Dvl的陽(yáng)性率分別為88.5%和 77.9%，而正常食管組織中Wnt2及Dvl的陽(yáng)性率分別為12.2%、8.4%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，Wnt2與Dvl蛋白質(zhì)食管鱗癌表達(dá)上調(diào)過程中表現(xiàn)出高度的一致性，有望成為食管鱗癌診斷和治療的新型生物標(biāo)記物。此外TNM分期較晚，Wnt2與Dvl表達(dá)量高，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此有效抑制Wnt、Dvl的表達(dá)，或許可以減少食管鱗癌的發(fā)生，為食管鱗癌的預(yù)防及治療提供了新的思路。但是由于Wnt通路涉及多種蛋白，其具體作用與機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

［1］郭變琴，吳立翔，汪先桃，等.Wnt2在乳腺癌組織及患者血清中的表達(dá)及意義［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2013，29 （6）：633-636.

［2］謝亮海，蔣晗，吳福生.Wnt/β-catenin信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌中的促進(jìn)作用［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，34（6）：913-917.

［3］吳國(guó)慧，孫莉.Wnt10B在腫瘤和疾病發(fā)生中的作用［J］.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，35（11）：1174-1177，1181.

［4］李華，周德俊.Wnt2/β-catenin信號(hào)通路及其在腫瘤中的作用［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2015，36（2）：320-323.

［5］王凱，李建遠(yuǎn).Wnt/β-catenin信號(hào)通路與發(fā)育和疾病研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（11）：160-161.

［6］李韶，張?jiān)茟c，徐飛.Wnt2與β-catenin蛋白在食管癌中的表達(dá)特點(diǎn)及病理意義［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（2）：142-145.

［7］王勇濤，汪洋，尚自強(qiáng)，等.食管鱗癌組織中Wnt2、DvlmRNA和蛋白表達(dá)變化及意義［J］.山東醫(yī)藥，2016，56（6）：4-6.

［8］王勇濤，王洪江，王興名.Wnt2與Dvl蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.天津醫(yī)藥，2016，44（2）：210-212.

Expression and Evaluation of DVL and Wnt2 Protein in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

CHANG Hui
Department of Laboratory of Xinwen Mining Group Suncun Coal Mine Hospital，Xintai，Shandong Province，271219 China

R5

A

1674-0742（2016）07（a）－0033-02

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.19.033

?；坌裕?980.1-），女，山東泰安人，本科，主管檢驗(yàn)師，研究方向：檢驗(yàn)科。

2016-04-05）