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糖肝康對(duì)TAA致糖尿病模型大鼠肝損傷肝臟TLR4表達(dá)的影響

錢衛(wèi)斌1,錢秋海2

(1.日本鳥取大學(xué)醫(yī)學(xué)部，日本 鳥取683-8503; 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東 濟(jì)南250011)

Effect of Tanggankang on immunohistochemical expression of TLR4 in acute damaged liver rat model

QIAN Wei-bin1,QIAN Qiu-hai2

(1.DeptofMedicine,TottoriUniversity,Tottori683-8503,Japan; 2.DeptofEndocrinology,theAffiliatedHospitalofShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250011,China)

中國(guó)圖書分類號(hào)：E-332；R282.71；R322.47；R392.11；R575.022； R587.1

關(guān)鍵詞:糖肝康；TLR4；免疫組化；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；糖尿?。患毙愿螕p傷

Key words:Tanggankang; TLR4; immunohistochemistry;animal experiment; diabetes; acute damaged liver

糖尿病可累及肝臟缺血缺氧，ALT、AST活性增加，膽紅素代謝紊亂，重者可致肝壞死[1-2]；肝損傷又使血糖難控制，二者惡性循環(huán)，致糖脂代謝紊亂。有實(shí)驗(yàn)證明，肝纖維化等慢性肝病時(shí)，TLR4可經(jīng)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路致肝損傷。本實(shí)驗(yàn)采用STZ+TAA造成DM急性肝損傷大鼠模型，觀察糖肝康對(duì)模型大鼠肝臟TLR4免疫組化表達(dá)的影響。

1材料

1.1動(dòng)物及分組健康♂ Wistar大鼠200只，體質(zhì)量(200±20) g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。取Wistar大鼠190只，用2%鏈脲佐菌素制成糖尿病模型。選取150只成模大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分3大組(n=50)：TAA 100、200、300 mg·kg-1組；每種造模方式隨機(jī)分5小組(n=10)：模型動(dòng)物+生理鹽水組、模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組、模型動(dòng)物+糖肝康小、中、大劑量組。另取10只正常大鼠作為正常動(dòng)物+生理鹽水組。

1.2藥物及試劑糖肝康顆粒：山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科加工，實(shí)驗(yàn)時(shí)將顆粒水煎煮開后制成糖肝康煎劑；護(hù)肝寧：貴州信邦制藥股份有限公司，批號(hào)20120303041。鏈脲佐菌素(STZ)：Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)020106；硫代乙酰胺(TAA)：上海展云化工有限公司，批號(hào)1106017；一抗Anti-TLR4，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號(hào)bs-1375R；SP-9000 HistostainTM-Plus kits免疫組化染色試劑盒，批號(hào)20090921，濃縮型DAB試劑盒，批號(hào)20091021，均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3儀器LXJ-Ⅱ型離心沉淀機(jī)，上海第二分析儀器廠生產(chǎn)；LEICA ASP600全自動(dòng)生物脫水機(jī)，LEICA公司生產(chǎn)；OLYMPUS CX51顯微鏡；LEICA ASP2135病理切片機(jī)；醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，型號(hào)HPIAS1000，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)千屏影像工程公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1給藥模型動(dòng)物+生理鹽水組和正常動(dòng)物+生理鹽水組給予生理鹽水ig；模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組給予護(hù)肝寧混懸液0.04 g·mL-1ig；模型動(dòng)物+糖肝康小、中、大劑量組分別給予1、2、4 g·mL-1的糖肝康ig。各組給藥容積均為10 mL·kg-1。

2.2造模連續(xù)給藥12周后，TAA 100、200、300 mg·kg-1組分別給予TAA 100、200、300 mg·kg-1腹腔注射，制成糖尿病急性肝損傷模型。

2.3免疫組化檢測(cè)TLR424 h內(nèi)用戊巴比妥鈉60 mg·kg-1腹腔注射，取血，待測(cè)血糖、肝功能。開腹取出肝臟，嚴(yán)格根據(jù)免疫組化試劑盒操作，檢測(cè)肝臟TLR4的表達(dá)。

3結(jié)果

3.1糖肝康對(duì)TAA急性肝損傷模型大鼠血糖、肝功能的影響造模后，模型動(dòng)物+生理鹽水組大鼠的血糖、ALT、AST水平異常升高，與正常動(dòng)物+生理鹽水組相比(P<0.01)。治療后，模型動(dòng)物+糖肝康小、中、大劑量組和模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組與模型動(dòng)物+生理鹽水組相比，血糖、ALT、AST水平降低(P<0.05或P<0.01)。模型動(dòng)物+糖肝康大劑量組與模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組比較，血糖、ALT、AST水平降低(P<0.05)。模型動(dòng)物+糖肝康中劑量組與模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組比較，ALT水平降低(P<0.05)。

3.2糖肝康對(duì)TAA急性肝損傷模型大鼠肝臟TLR4免疫組化表達(dá)的影響正常動(dòng)物+生理鹽水組大鼠肝臟KC、血管內(nèi)皮細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞及一些肝細(xì)胞有微弱TLR4表達(dá)。造模后，模型動(dòng)物+生理鹽水組大鼠肝組織TLR4表達(dá)明顯增加，TLR4染色位于胞質(zhì)，主要見(jiàn)于竇周，以沿間隔分布的梭形間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)為主，部分肝細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞的膜上TLR4的表達(dá)也有所增強(qiáng)。治療后，與模型動(dòng)物+生理鹽水組比較，模型動(dòng)物+糖肝康中、大劑量組竇周梭行間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)減少，模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組和模型動(dòng)物+糖肝康小劑量組TLR4陽(yáng)性顆粒表達(dá)也減少，模型動(dòng)物+糖肝康用藥組與模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組比較，無(wú)明顯差異。

4討論

糖尿病肝損傷與氧化應(yīng)激、炎癥因子等因素密切相關(guān)。TLR4信號(hào)通路激活后，能啟動(dòng)多種炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和合成[3]。已證明，TLR4通過(guò)MyD88依賴性信號(hào)通路和MyD88非依賴性信號(hào)通路激活NF-κB[4-5]，NF-κB參與免疫調(diào)控介導(dǎo)炎癥和多種生理病理過(guò)程的基因轉(zhuǎn)錄[6]，導(dǎo)致炎性因子大量表達(dá)，參與機(jī)體組織、器官的損害。結(jié)果顯示,模型動(dòng)物+生理鹽水組大鼠血糖、肝功能及肝臟TLR4的表達(dá)較正常動(dòng)物+生理鹽水組大鼠明顯異常，而糖肝康可改善TLR4在肝臟的表達(dá)，對(duì)血糖、肝功能的效果優(yōu)于模型動(dòng)物+護(hù)肝寧組。此外，本研究通過(guò)研究糖肝康對(duì)不同TAA劑量所致糖尿病急性肝損傷的治療，效果無(wú)差別；且糖肝康與護(hù)肝寧相比，差異也無(wú)顯著性。但糖肝康可明顯改善血糖、肝功能，也可降低肝臟TLR4的表達(dá)，進(jìn)而起到保護(hù)肝臟的作用。

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文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2016)02-0295-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.030

作者簡(jiǎn)介：錢衛(wèi)斌(1984-)，男，博士生，E-mail：doctorqwb@126.com;錢秋海(1955-)，男，博士，教授，主任醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)治療內(nèi)分泌代謝性疾病，通訊作者，Tel：0531-68617953，E-mail：qianqiuhai@126.com

基金項(xiàng)目：山東省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No ZR2012HM093)；山東省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(No 2011-038)

收稿日期:2015-11-14,修回日期:2015-12-15

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.060.html

網(wǎng)絡(luò)出版地址：2016-1-25 15:57