奶牛布魯菌病血清學(xué)調(diào)查及病原分離鑒定

莫合塔爾·阿布力孜，帕提古麗·托乎提，古麗呢嘎爾·麻合塔爾

（1.新疆巴州動物疾病控制與診斷中心，新疆 庫爾勒 841000；2.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

奶牛布魯菌病血清學(xué)調(diào)查及病原分離鑒定

莫合塔爾·阿布力孜1，帕提古麗·托乎提1，古麗呢嘎爾·麻合塔爾2

（1.新疆巴州動物疾病控制與診斷中心，新疆 庫爾勒 841000；2.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

2015—2016年應(yīng)用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗對新疆維吾爾自治區(qū)巴音郭楞蒙古自治州21個奶牛場、503個奶牛養(yǎng)殖戶所飼養(yǎng)的奶牛進(jìn)行了布魯菌病血清學(xué)調(diào)查，虎紅平板凝集試驗陽性率為1.10%，試管凝集試驗陽性率為0.82%。對2013—2016年4年內(nèi)在該地區(qū)收集的奶牛流產(chǎn)胎兒、胎衣、陰道分泌物等243份病料進(jìn)行布魯菌的分離鑒定，結(jié)果分離出2株羊種2型布魯菌和2株牛種3型布魯菌。血清學(xué)調(diào)查及布魯菌分離鑒定結(jié)果佐證了在該地區(qū)存在布魯菌病，建議奶牛養(yǎng)殖場（戶）和有關(guān)部門切實做好布魯菌病的檢疫及防控工作。

布魯菌；血清學(xué)調(diào)查；病原分離；菌型鑒定；奶牛

新疆維吾爾自治區(qū)巴音郭楞蒙古自治州（以下簡稱巴州），下轄1個縣級市、7個縣和1個自治縣，是一個半農(nóng)半牧自治州，全州有21個奶牛場、503個奶牛養(yǎng)殖戶。定期對該地區(qū)奶牛進(jìn)行布魯菌病的血清學(xué)調(diào)查，可掌握該地區(qū)布魯菌病的疫情動態(tài)。

2013—2016年4年內(nèi)，新疆巴州動物疾病控制與診斷中心疫病檢測科在巴州地區(qū)收集奶牛流產(chǎn)胎兒、胎衣、陰道分泌物、強(qiáng)陽性奶牛的全血、公牛的精液、牛奶、臟器、胃液等病料共243份樣品，分離出4株布魯菌。并于2015—2016年應(yīng)用2種試驗方法進(jìn)行了奶牛布魯菌病的血清學(xué)調(diào)查?，F(xiàn)將該地區(qū)奶牛布魯菌病血清學(xué)調(diào)查及分離菌菌型鑒定結(jié)果報如下：

1 材料與方法

1.1 材料 平板凝集試驗、虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗抗原和陽性血清均由新疆維吾爾自治區(qū)動物預(yù)防控制中心提供?；⒓t平板凝集試驗抗原，哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)日期2016年2月，批號為20160203，有效期12個月；試管凝集試驗抗原，哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，批號為201501，生產(chǎn)日期2015年5月8日，有效期18個月。血清：2015—2016年在巴州地區(qū)21個奶牛場、503個奶牛養(yǎng)殖戶中共采集奶牛血清19 498份。標(biāo)準(zhǔn)菌株和布魯氏菌A、M、R因子血清均由中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所提供；硫堇、堿性復(fù)紅等試劑均由新疆維吾爾自治區(qū)動物疾病控制中心布魯菌病實驗室提供。所用生物制品、試劑均在有效期內(nèi)。病料為2013—2016年4年內(nèi)收集的流產(chǎn)胎兒、胎衣、陰道分泌物、陽性奶牛的牛奶、公牛的精液、胃液、臟器等。

1.2 方法

1.2.1 血清學(xué)調(diào)查：采用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗進(jìn)行奶牛布魯菌病的血清學(xué)調(diào)查［1-3］。2種試驗均按國家農(nóng)業(yè)部頒布的《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行。

1.2.2 布魯菌分離和鑒定：無菌操作取肝、脾、肺、心、腎、胃液、淋巴結(jié)等病料接種胰蛋白胨培養(yǎng)基（1式接種2份，分別置于大氣環(huán)境和5%～10%CO2環(huán)境），放在37℃恒溫箱培養(yǎng)，定期觀察菌落生長情況［4-6］。取可疑菌落涂片，用革蘭氏和柯茲羅夫斯基法染色，鏡檢。按聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織（FAO/WHO）頒布的CO2需要、H2S產(chǎn)生、硫堇和堿性復(fù)紅試驗以及A、M、R因子凝集試驗進(jìn)行鑒定［7-8］。試驗在新疆維吾爾自治區(qū)動物疾病控制中心布魯菌病實驗室進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)調(diào)查結(jié)果 2015—2016年采用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗對采集的19 498份奶牛血清進(jìn)行了奶牛布魯菌病檢測。其中，216份血清虎紅平板凝集試驗陽性，陽性率為1.10%；160份血清試管凝集試驗陽性，陽性率0.82%。

2.2 病原的分離培養(yǎng) 培養(yǎng)3～7 d后，有4份血清培養(yǎng)基上形成細(xì)小、濕潤、閃光、隆起的菌落。取菌落涂片，用革蘭氏和柯茲羅夫斯基法染色，鏡檢，為革蘭氏陰性短小桿菌，多散在，柯茲羅夫斯基法染色為紅色。采用布魯菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清和生理鹽水，對可疑菌落作玻片直接凝集試驗，4株分離菌株對布魯菌陽性血清呈明顯的凝集反應(yīng)，而對布魯菌陰性血清和生理鹽水不產(chǎn)生凝集。

2.3 病原鑒定 將從奶牛病料中分離的4株菌移管增菌，送新疆維吾爾自治區(qū)動物疾病控制中心布魯菌病實驗室進(jìn)行菌型鑒定。其中，有2株菌不需要CO2，不產(chǎn)生H2S，A因子血清凝集，M、R因子不凝集，1∶2.5 萬硫堇中不生長，1∶5 萬、1∶10 萬硫堇中生長，1∶5萬和1∶10萬堿性復(fù)紅均生長，與國際標(biāo)準(zhǔn)菌株羊種2型布魯菌的特性完全一致；另外2株需要CO2、產(chǎn)生H2S，A因子血清凝集，M、R因子不凝集，硫堇（1∶2.5 萬、1∶5 萬、1∶10 萬）和堿性復(fù)紅（1∶5萬和1∶10萬）均生長，與國際標(biāo)準(zhǔn)菌株牛種3型布魯菌的特性完全一致。

3 討論

2015—2016年的血清學(xué)調(diào)查涉及巴州8個縣1個市21個奶牛場、503個奶牛養(yǎng)殖戶，血清學(xué)調(diào)查結(jié)果佐證了在該地區(qū)存在布魯菌病。從2013—2016年收集的病料中，分離到了羊種2型和牛種3型布魯氏菌，說明該地區(qū)布魯菌病病原復(fù)雜，不同生物型布魯菌在各種動物間存在轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，從而給預(yù)防工作帶來一定的難度。

近幾年來，奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展較快，由于部分養(yǎng)殖場（戶）受到利益的驅(qū)動，對布魯菌病檢疫陽性奶牛處理不徹底，導(dǎo)致防疫和檢疫工作難度較大。建議奶牛養(yǎng)殖場（戶）和有關(guān)部門切實做好布魯菌病防控工作，采取“檢、殺、消、管”綜合防控措施，“檢”即檢疫監(jiān)測，“殺”即撲殺凈化，“消”即消毒滅源，“管”即流通監(jiān)管，要有效控制當(dāng)前布魯菌病疫情蔓延擴(kuò)散，一定要把好購進(jìn)奶牛布魯菌檢疫關(guān)，抓好奶牛規(guī)?；B(yǎng)殖場和專業(yè)戶的定期檢疫工作，以確保奶牛養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展，保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，為消費者的健康及生命安全提供保障。

［1］祁巧芬.吐魯番地區(qū)家畜布魯氏桿菌病血清學(xué)及病原學(xué)調(diào)查［J］.新疆畜牧業(yè)，2014（10）：33-34.

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S851.3；S858.232.61

A文章順序編號：1672-5190（2016）10-0104-02

2016－07－21

項目來源：新疆維吾爾自治區(qū)少數(shù)民族專業(yè)技術(shù)人員特培項目（201523110）。

莫合塔爾·阿布力孜（1960—），男，高級獸醫(yī)師，主要研究方向為動物布魯菌病和結(jié)核病防治。

（責(zé)任編輯：錢英紅）