雷曼紅，姜仁軍，陳生熬

（1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆　阿拉爾　843300；2.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆　阿拉爾　843300）

葉爾羌高原鰍“腸積水”病因調(diào)查及防治措施

雷曼紅1，姜仁軍2，陳生熬1

（1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾843300；2.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾843300）

doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.06.017

葉爾羌高原 鰍 Triplophysa（Hedinichthgs）yarkandensis（Day），屬鯉形目（Cyprinidformes），鰍科（Cobitidae），高原鰍屬（Triplophysa），俗稱“狗頭魚(yú)”，廣泛分布于塔里木河流域，因其肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，受到廣大消費(fèi)者的歡迎。由于資源銳減，近年來(lái)，有關(guān)人員從野外捕撈野生葉爾羌高原鰍進(jìn)行馴養(yǎng)。人工養(yǎng)殖條件下，該魚(yú)夏、秋季常暴發(fā)“腸積水”病，該病發(fā)病快，病死率高，幾乎為100%，給生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的損失。2014年，筆者項(xiàng)目組對(duì)該病從病原菌的分離鑒定、疾病防治措施等方面進(jìn)行了研究，以期為葉爾羌高原鰍大規(guī)模人工養(yǎng)殖的病害防治提供一定的理論指導(dǎo)。

1　材料及方法

1.1材料

瀕死的葉爾羌高原鰍，來(lái)自塔里木大學(xué)水產(chǎn)試驗(yàn)站，體長(zhǎng)10～20 cm；健康的葉爾羌高原鰍為來(lái)自塔河的野生葉爾羌高原鰍，體長(zhǎng)10～15 cm。

1.2癥狀觀察

取瀕臨死亡的病魚(yú)數(shù)尾進(jìn)行體表及體內(nèi)病癥觀察，以確定該病的典型癥狀。

1.3病原的分離與鑒定

1.3.1病毒學(xué)試驗(yàn)選取瀕死高原鰍肝胰臟，加l mL生理鹽水，在研缽中進(jìn)行研磨，加入青、鏈霉素溶液，作用15 min后，4 000 r/min離心10 min，之后取上清液，注射10尾健康的高原鰍，每尾0.1 mL，然后飼養(yǎng)在盛有50 L水的魚(yú)缸中，觀察7 d。

1.3.2細(xì)菌的分離選取有典型病癥的魚(yú)，用70%的酒精擦拭體表，無(wú)菌操作取其肝胰臟、腎臟，于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和兔血瓊脂平板上劃線分離，28℃恒溫培養(yǎng)24 h后取優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行純化，最后轉(zhuǎn)接到兔血瓊脂平板上培養(yǎng)。

1.3.3回染試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用魚(yú)為體長(zhǎng)10～15 cm的健康無(wú)傷的葉爾羌高原鰍，從塔里木河捕撈，在魚(yú)缸飼養(yǎng)30 d后進(jìn)行回染試驗(yàn)，設(shè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。每組實(shí)驗(yàn)魚(yú)各10尾，實(shí)驗(yàn)水溫28℃。

用無(wú)菌生理鹽水清洗分離菌株的菌苔，用麥?zhǔn)媳葷岱y(cè)定并調(diào)節(jié)菌懸液濃度為6×108cells/mL，然后對(duì)高原鰍進(jìn)行腹腔注射，每尾注射0.1 mL；對(duì)照組注射相同劑量的無(wú)菌生理鹽水。連續(xù)7 d觀察魚(yú)的發(fā)病癥狀及死亡情況，發(fā)現(xiàn)死魚(yú)及時(shí)撈出，檢查其體表及內(nèi)臟器官的病變情況，同時(shí)做細(xì)菌分離。1.3.4病原菌鑒定將純化的病原菌株置于兔血瓊脂平板上培養(yǎng)，于28℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落特征，然后將病原菌株接種于鮮血瓊脂平板上，28℃條件下培養(yǎng)24 h，挑取單菌落混于生理鹽水中，用可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)測(cè)量并配成0.5×108cells/mL的菌懸液后，利用全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)VITEKAMS儀、革蘭陰性桿菌鑒定卡（GNI）進(jìn)行鑒定。

1.3.5藥敏試驗(yàn)用涂布法接種菌株，然后將藥敏紙片（購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司）貼在培養(yǎng)基上，28℃條件下培養(yǎng)24 h后，測(cè)定抑菌圈直徑，根據(jù)《現(xiàn)代診斷學(xué)手冊(cè)》標(biāo)準(zhǔn)，判斷致病菌株對(duì)藥物的敏感程度。

2　結(jié)果

2.1癥狀

肉眼觀察：病魚(yú)腹部異常膨大，腹部?jī)蓚?cè)有點(diǎn)狀出血，鰓部組織、體表黏液明顯增多。解剖發(fā)現(xiàn)：病魚(yú)腹腔中沒(méi)有水，即不是“腹水病”。腸道明顯鼓脹，充滿大量淡黃色積水，腸壁很薄，伴有少量氣體，大多數(shù)魚(yú)腸道內(nèi)沒(méi)有食物，腸壁明顯充血。肝胰臟呈磚紅色，具淤血斑；腎充血、出血；腹腔內(nèi)基本上看不到脂肪。

2.2病毒學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

將10尾注射了滅菌組織懸液的葉爾羌高原鰍飼養(yǎng)兩周，無(wú)一發(fā)病，也無(wú)其他異常，說(shuō)明此病不是由病毒引起的。

2.3菌落形態(tài)

從病魚(yú)肝胰臟中分別分離到2株優(yōu)勢(shì)菌XJ-I 和XJ-II。菌株XJ-I和XJ-II在血瓊脂平板上培養(yǎng)24 h后均形成圓形、邊緣整齊、表面光滑、隆起、有光澤、不易挑取的菌落。

2.4人工回歸感染

將分離純化的菌株XJ-I和XJ-II進(jìn)行人工回歸感染實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，菌株XJ-I和XJ-II對(duì)葉爾羌高原鰍均具有致病作用（表1），而且實(shí)驗(yàn)致死魚(yú)體死亡癥狀與自然發(fā)病魚(yú)體死亡癥狀基本相同。另外，從人工感染的病魚(yú)的肝胰臟中又分離到與實(shí)驗(yàn)菌株形態(tài)及菌落特征一致的菌株。由此表明，該病是由菌株XJ-I和XJ-II感染引起的。見(jiàn)表1。

2.5病原菌鑒定

表1　細(xì)菌的形態(tài)、菌落特征和致死情況

對(duì)供試菌株進(jìn)行革蘭染色、顯微鏡觀察及氧化發(fā)酵試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)2株菌均為革蘭陰性桿菌，無(wú)莢膜，無(wú)芽孢。氧化酶、觸酶陽(yáng)性，葡萄糖發(fā)酵型，經(jīng)全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)VITEK-AMS儀、革蘭陰性桿菌鑒定卡（GNI）鑒定，2株菌均屬于嗜水氣單胞菌群，菌株XJ-I和XJ-II與《伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)》上描述的嗜水氣單胞菌模式菌株（Aeramonas hydrophila）的生理生化形狀基本一致（表2）。

2.6藥敏實(shí)驗(yàn)

菌株對(duì)16種藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。在16種藥物中，菌株對(duì)新霉素、慶大霉素、奈啶酸、氟哌酸、恩諾沙星、磺胺對(duì)甲氧嘧啶6種藥物高度敏感。

3　討論

目前，尚無(wú)葉爾羌高原鰍“腸積水”病的相關(guān)資料報(bào)道。葉爾羌高原鰍生活在淡水中，體液滲透壓大于體外養(yǎng)殖水體滲透壓，為了平衡體內(nèi)外滲透壓，體外水分子通過(guò)鰓、皮膚進(jìn)入體內(nèi)，而不是口腔吞咽的環(huán)境中的水分子進(jìn)入腸道，所以，腸道內(nèi)的積水應(yīng)該來(lái)自葉爾羌高原鰍機(jī)體的組織液。筆者認(rèn)為有如下幾個(gè)方面的原因引起：①養(yǎng)殖水溫升高，葉爾羌高原鰍機(jī)體免疫力下降，條件致病菌有可能乘機(jī)而入。該病的發(fā)病時(shí)間呈現(xiàn)明顯的季節(jié)性，通常集中在水溫25℃以上的夏、秋季發(fā)病，而在水溫較低的冬、春季節(jié)，幾乎無(wú)該病的發(fā)生。由于葉爾羌高原鰍是冷水性魚(yú)類，水溫可能是誘導(dǎo)該病發(fā)生比較重要的因素之一，可能是水溫升高造成葉爾羌高原鰍魚(yú)體新陳代謝紊亂，導(dǎo)致胃、腸的蠕動(dòng)頻率和蠕動(dòng)幅度降低，腸中的水分不能及時(shí)排出體外從而形成積水。由于消化道積水的存在，引起攝食量降低，所以，患病的葉爾羌高原鰍消化道中食物很少或沒(méi)有，這使病情更加惡化，免疫力下降。嗜水氣單胞菌是典型的條件致病菌，一般在魚(yú)體免疫力下降時(shí)才會(huì)感染發(fā)病。②養(yǎng)殖密度高，水中的溶解氧偏低，魚(yú)體機(jī)能下降。葉爾羌高原鰍是需氧較高的魚(yú)類，溶氧一般不能低于5 mg/L。據(jù)觀察，密度高的養(yǎng)殖池的“腸積水”病就較為嚴(yán)重，而密度低的魚(yú)池發(fā)病率較低。因此，養(yǎng)殖密度也可能是影響該病發(fā)生的重要因素之一。

表2　VITEK-AMS儀鑒定結(jié)果

表3　菌株XJ-I和XJ-II的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

關(guān)于葉爾羌高原鰍的“腸積水”病的致病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)葉爾羌高原鰍病原微生物的研究、可供參考的文獻(xiàn)資料甚少，根據(jù)筆者對(duì)葉爾羌高原鰍長(zhǎng)期養(yǎng)殖的經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出以下綜合防治措施，供參考。

高溫季節(jié)采取必要的降溫措施，在魚(yú)池上方蓋遮陽(yáng)網(wǎng)。同時(shí)，在魚(yú)池種植空心菜、水葫蘆等水生植物，改善水質(zhì)。

定期往魚(yú)池潑灑芽孢桿菌等微生物制劑，促進(jìn)魚(yú)池的有機(jī)物分解。同時(shí)，在飼料中定期拌喂復(fù)合維生素、乳酸菌和酵母菌，提高高原鰍的體質(zhì)，促進(jìn)餌料的消化吸收。

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31360635）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)基本科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013BA005）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（201505）

（2015-11-17）