李春艷，石登紅

(貴陽學(xué)院 生物與環(huán)境工程學(xué)院，貴州 貴陽 550005)

3種茶葉中黃酮含量的測定分析

李春艷，石登紅

(貴陽學(xué)院 生物與環(huán)境工程學(xué)院，貴州 貴陽 550005)

確定茶葉中總黃酮含量。采用紫外分光光度法測定茶葉中總黃酮的含量。茶葉中總黃酮的最佳提取條件為85%乙醇，料液比為1∶40(g/mL),提取溫度為80 ℃，提取時間為60 min。得出3種茶葉中春葵的黃酮化合物含量較高為37.45 mg/g,雪蕊次之為 34.87 mg/g,金毫最低為27.64 mg/g。所用方法簡便，準(zhǔn)確，快速、可靠、重復(fù)性好，回收率高達(dá)到98.355%，用于茶葉中總黃酮含量的測定分析。

總黃酮；紫外分光光度計；茶葉；測定

黃酮類化合物分布廣泛，種類繁多，其中黃酮醇類化合物占黃酮類化合物總數(shù)的 1/3左右[1-2]。有研究顯示其在抗氧化，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，預(yù)防心血管疾病，防癌、抗癌方面效果明顯[3-5]，茶葉中的黃酮含量比較豐富。我國茶區(qū)遼闊，茶產(chǎn)量逐年增加且品種繁多[6]目前，對于茶葉中黃酮類化合物的研究比較多，但大多集中在單一茶葉中黃酮類物質(zhì)的提取方法的工藝研究上，對于其含量的測定及不同品種黃酮類化合物含量的比較鮮有報道。本文通過研究其含量的測定，為茶葉的研究及購買提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 材料

雪蕊、春葵(翠芽)、金毫(紅茶)由德江縣鴻泰茶業(yè)有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 試劑

95%乙醇、無水乙醇、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(≥98%)。

1.1.3 儀器

UV-2550型紫外可見分光光度計(日本島津公司)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司)；電子分析天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)

1.2 方法

1.2.1 測定波長的選擇

準(zhǔn)確稱取6.4 mg的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解、定容至刻度25 mL，濃度為0.256 mg/mL，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL于10 mL的比色管中，依次加入超純水1.5mL、0.5mL5%亞硝酸鈉溶液，混勻，放置6 min后加入10%硝酸鋁溶液0.5 mL，混勻，靜置6min后加入5 mL4%氫氧化鈉溶液，超純水稀釋至刻度10 mL，混勻，靜置15 min?？瞻讓φ諡橐陨喜缓?%的亞硝酸鈉溶液。蘆丁溶液在400-800nm范圍內(nèi)掃描，蘆丁溶液的最大波長為513 nm，即為本實驗的最大波長。

1.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別移取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL瀘定標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL比色管中，超純水稀釋至3.0 mL后加入0.5mL5%亞硝酸鈉溶液，混勻，放置6 min后加入10%硝酸鋁溶液0.5 mL，混勻，靜置6 min后加入5mL 4%氫氧化鈉溶液，超純水稀釋至刻度10 mL，混勻，靜置15 min。依次在513 nm波長下測吸光度，并以蘆丁溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸收度(A)為縱坐標(biāo)，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出一元線性方程Y=9.782 61-0.118 23，相關(guān)系數(shù)r=0.999 76。結(jié)果說明，蘆丁溶液在0.012～0.077 mg/mL范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與吸光度線性關(guān)系良好。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 rutin standard curve

1.2.3 單因素實驗

采用單因素實驗設(shè)計分別研究4個因素，即乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時間對茶葉黃酮提取量的影響。

1) 乙醇體積分?jǐn)?shù)。精密稱取4份干茶葉各1 g于100 mL圓底燒瓶中，分別加入體積分?jǐn)?shù)為65%、75%、85%、95%的乙醇溶液25 mL，80 ℃下回流1 h，趁熱過濾，收集濾液，濾渣重復(fù)提取一次，趁熱過濾，合并濾液，用相應(yīng)的體積濃度的乙醇定容至100 mL的容量瓶中，搖勻，制得茶葉黃酮提取液。移取1 mL，按1.2.1的方法顯色，在513 nm波長測吸光度，代入1.2.2中一元線性方程求出樣品溶液總黃酮濃度(mg/mL)， 根據(jù)以下公式計算樣品總黃酮質(zhì)量和含量：樣品中總黃酮質(zhì)量(mg)=樣品溶液總黃酮濃度×10×100/0.5，樣品總黃酮含量(mg/g)=樣品總黃酮質(zhì)量/樣品質(zhì)量。

2) 料液比 精密稱取4份1 g樣品于100 mL圓底燒瓶中,加入體積分?jǐn)?shù)為65%料液比分別為(1∶10、1∶25、1∶40、1∶55)g/mL的乙醇，水浴加熱80 ℃回流提取1 h，趁熱抽濾，用相應(yīng)的體積濃度的乙醇定容至100mL容量瓶，搖勻，制得茶葉黃酮提取液。移取0.5 mL，按1.2.1的方法顯色，測吸光度，計算總黃酮含量。

3)提取溫度 精密稱取4份1 g樣品于100 mL圓底燒瓶中,加入25 mL體積分?jǐn)?shù)為65%提取溫度分別為(60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃)g/mL的乙醇，水浴加熱回流提取1 h，趁熱過濾，收集濾液，濾渣重復(fù)提取一次，趁熱過濾，合并濾液，用相應(yīng)的體積濃度的乙醇定容至100 mL的容量瓶中，搖勻，制得茶葉黃酮提取液。移取0.5 mL，按1.2.1的方法顯色，測吸光度，計算總黃酮含量。

4)提取時間 精密稱取4份1 g樣品于100mL圓底燒瓶中,加入25 mL體積分?jǐn)?shù)為65%提取溫度分別為(20 min、40 min、60 min、80 min)g/mL的乙醇，水浴加熱80 ℃回流提取1 h，趁熱過濾，收集濾液，濾渣重復(fù)提取一次，趁熱過濾，合并濾液，用相應(yīng)的體積濃度的乙醇定容至100 mL的容量瓶中，搖勻，制得茶葉黃酮提取液。移取1 mL，按1.2.1的方法顯色，測吸光度，計算總黃酮含量。

1.2.4 精密度試驗

精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25 mL，按1.2.1方法制備供液，于513 nm處連續(xù)測定6次，并計算吸光度的RSD。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗

精密量取樣品溶液1 mL，按1.2.1方法制備供液，分別在513 nm處于0、15、30、50、70、100 min時測吸光度，并計算吸光度的RSD。

1.2.6 重復(fù)性試驗

精密量取樣品溶液0.5 mL，按1.2.1方法制備供液，平行制備6份于513 nm處測定吸光度，并計算總黃酮平均含量和RSD。

1.2.6 加樣回收試驗

精密量取樣品溶液6份，分別量取0,5 mL，分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.20、0.25、0.30 mL按標(biāo)曲繪制的測定方法，分別在513 nm處測定吸光度，計算加樣回收率和RSD。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酮類化合物是茶葉的主要有效成分之一，近年來對黃酮的提取是研究熱點，目前對茶葉黃酮類化合物提取的方法也有很多，包括紫外分光廣度提取法、超聲波提取法、有機(jī)溶劑提取法。單因素實驗表明乙醇濃度、提取時間、料液比以及提取溫度均會影響總黃酮提取量，隨著體積分?jǐn)?shù)的增加黃酮的含量增大,85%時達(dá)到最高值，但是當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過 85%的時候，總黃酮的提取率反而降低。原因可能是隨 著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，提取物中雜質(zhì)含量增加，而有效成分含量降低，影響提取率。采用1∶10 、1∶25、1∶40、1∶55的料液比在80攝氏度條件下回流60 min，結(jié)果表明，隨著料液比的增加，黃酮含量增大，當(dāng)料液比超過1∶40時，提取量下降。采用紫外分光光度法對提取野生馬齒莧的黃酮含量進(jìn)行測定得到最佳提取工藝條件為乙醇濃度為85%，提取溫度為80 ℃，提取時間是60 min,料液比為1∶40。

2.2 精密度試驗

精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25 mL，按1.2.1方法制備供液，于513 nm處連續(xù)測定6次，并計算吸光度的RSD。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的RSD=2.8%(n=6),表示在此試驗的條件下精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗

精密量取樣品溶液0.5 mL，按1.2.1方法制備供液，分別在513 nm處于0、15、30、50、70、100 min時測吸光度，并計算吸光度的RSD。樣品溶液的吸光度RSD=0.856%，說明樣品溶液在100 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗

精密量取樣品溶液0.5 mL，按1.2.1方法制備供液，平行制備6份于513 nm處測定吸光度，并計算總黃酮平均含量和RSD。樣品溶液的吸光度RSD=0.813%,表明該方法良好。

2.5 加樣回收試驗表1加樣回收

表1 加樣回收Tab.1 Add sample collection

2.6 不同品種茶葉黃酮含量分析

由以上實驗可知 ,提取黃酮的最佳方法為乙醇濃度為 85%, 溫度在 80 ℃.提取時間為60 min，料液比1∶40。 在這個條件下 ，精密量取雪蕊、金毫、春葵1 g在此條件下提取測定。結(jié)果如下：

表2 不同品種茶葉黃酮含量Tab.2 Different varieties of tea flavonoids content

由表2可知，春葵的黃酮化合物含量較高為37.45 mg/g,雪蕊次之為34.87 mg/g,金毫最低為27.64 mg/g。

3 結(jié)論

采用紫外分光光度法測定總黃酮含量時 ,提取黃酮的最佳方法為乙醇濃度為 85%, 溫度在80 ℃.提取時間為60 min，料液比1:40。 在 0.012～0.077 mg/mL 的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 (r= 0.999 9) ,平均回收率 = 98.355%, RSD= 0.516%。三種茶葉中春葵的黃酮化合物含量較高為37.45 mg/g,雪蕊次之為34.87 mg/g但是和春葵相差不大， 金毫的含量最低為27.64 mg/g。

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The determination of flavonoid in the tea

LI Chun-yan,SHI Deng-hong

(Biological and Environmental Engineering of Guiyang University，Guizhou Guiyang 550005，China)

to determine the determination methods of flavonoids content in tea.using uv spectrophotometry for determining the content of flavonoids in tea.the best extraction conditions of flavonoids in tea is 85% ethanol, ratio of feed liquid 1:40 (g/mL), extraction temperature is 80 ℃, extracting time for 60 min.the method is simple, accurate, fast, reliable, good repeatability, high recovery rate of 98.355%, can be suitable for content determination of flavonoids content in tea.

Flavonoids; Ultraviolet spectrophotometer；The tea; Content determination

2016-11-04

貴州省教育廳高等學(xué)校2015年大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目。

李春艷(1995-)，女，穿青人，貴州織金人，生物與環(huán)境工程學(xué)院2013級生物工程專業(yè)本科生。 石登紅(1980-)，女，土家族，貴州德江人，副教授。主要從事方向：植物學(xué)，植物資源利用。

TS272

A

1673-6125(2016)04-0050-03