不同炮制方法對(duì)火麻仁飲片中甘油三亞油酸酯的影響*

鄧仕任，王春嬌，夏林波，王　鑫，朱夏敏，蔡明宸

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧　大連　116600)

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不同炮制方法對(duì)火麻仁飲片中甘油三亞油酸酯的影響*

鄧仕任，王春嬌，夏林波，王鑫，朱夏敏，蔡明宸

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連116600)

以火麻仁飲片中的甘油三亞油酸酯為指標(biāo)性成分，比較不同炮制方法對(duì)甘油三亞油酸酯含量的影響。采用清炒法、微波法、烘法對(duì)三個(gè)不同產(chǎn)地的火麻仁飲片進(jìn)行炮制，采用HPLC法測(cè)定不同炮制品及生品中甘油三亞油酸酯的含量。結(jié)果表明：火麻仁經(jīng)過(guò)炮制后甘油三亞油酸酯的含量均有不同程度的升高，其中清炒法和微波法提升幅度較大，烘法次之。炮制可以提高火麻仁中甘油三亞油酸酯的含量，且以清炒法和微波法為佳。

火麻仁；炮制；甘油三亞油酸酯；含量

火麻仁藥材為?？浦参锎舐镃annabis sativa L.的干燥成熟果實(shí)，火麻仁飲片則需將火麻仁藥材“除去雜質(zhì)及果皮”[1]，即為大麻的干燥成熟種子?；鹇槿手髦窝摻蛱潱c燥便秘等癥[1]。火麻仁油脂是火麻仁飲片中的主要成分(其含量占飲片總重量的40%～50%)[2]，也是其藥效成分。有研究表明，火麻仁油脂具有潤(rùn)滑腸壁，軟化大便、輕度興奮腸管、增加蠕動(dòng)、減少大腸吸收水分的作用。火麻仁油脂是由一系列甘油三酯類(lèi)化合物組合而成，其中的代表性成分即為“甘油三亞油酸酯”[3]?；鹇槿试诠欧街械呐谥品椒ㄝ^多，有炒法、蒸法、煅法等，而今的主流炮制方法僅有清炒法一種。本實(shí)驗(yàn)擬采用清炒法、微波法和烘法等三種不同的炮制方法對(duì)火麻仁飲片進(jìn)行研究，以甘油三亞油酸酯含量為指標(biāo)，采用非水反相色譜法測(cè)定三種不同炮制方法對(duì)甘油三亞油酸酯含量的影響，為火麻仁的炮制提供一定的依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)藥品

火麻仁飲片購(gòu)于大連市陽(yáng)光大藥房，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室翟延君教授鑒定為?？浦参锎舐?Cannabis Sativa L.)的干燥成熟種子。對(duì)照品甘油三亞油酸酯,購(gòu)自美國(guó)NU-CHEK公司。乙腈(色譜純)，甲醇(分析純)，天津大茂試劑廠(chǎng)；水為娃哈哈純凈水。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

島津LC-10AT高效液相色譜儀；伊利特Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；FA1004B型電子天平,上海精密科學(xué)儀器有限公司；DFT-100型手提式高速萬(wàn)能粉碎機(jī),溫嶺市林大機(jī)械有限公司；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海亞榮生化儀器廠(chǎng)；KQ2200型超聲清洗器,昆山市超聲儀器有限公司。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1火麻仁炮制品制備

2.1.1清炒法

取火麻仁生品飲片20 g，文火炒至火麻仁呈微黃色，有香氣。

2.1.2微波法

取火麻仁生品飲片20 g，中火加熱3 min至火麻仁呈微黃色，有香氣。

2.1.3烘法

取火麻仁生品飲片20 g，200 ℃烘4 min至火麻仁呈微黃色，有香氣。

2.2飲片及炮制品中脂肪油總量測(cè)定

取火麻仁飲片及不同炮制品10 g，粉碎過(guò)二號(hào)篩，精密稱(chēng)定，正己烷250 mL索氏提取3 h，濾液置水浴上減壓回收至盡，精密稱(chēng)定，即得油脂含量。

2.3飲片及炮制品中甘油三亞油酸酯含量測(cè)定

2.3.1色譜條件

采用伊利特Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)，以乙腈-異丙醇(75:25)為流動(dòng)相；流速為1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為205 nm；柱溫為25 ℃。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備

取甘油三亞油酸酯對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加乙腈-異丙醇-正己烷(2:2:1)制成每1 mL含1.0 mg的對(duì)照品儲(chǔ)備液。將儲(chǔ)備液稀釋10倍，即得對(duì)照品溶液。

2.3.3供試品溶液的制備

取火麻仁油脂(按2.2項(xiàng)下方法制得)約0.1 g，精密稱(chēng)定，用乙腈-異丙醇-正己烷(2:2:1)定容于100 mL，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取甘油三亞油酸酯對(duì)照品儲(chǔ)備液，配制成濃度分別為0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.50 mg/mL的系列溶液，按在2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。以峰面積Y對(duì)濃度X(mg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為Y=2.1×107X+125110，r2=0.9996；表明甘油三亞油酸酯在0.025～0.50 mg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3.5精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各自峰面積，計(jì)算甘油三亞油酸酯峰面積的RSD為1.38%，表明本法精密度良好。

2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一產(chǎn)地火麻仁飲片樣品6份，按2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，計(jì)算甘油三亞油酸酯含量為66.5 mg·g-1，RSD為2.09%，表明本法重復(fù)性度良好。

2.3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一火麻仁飲片供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，記錄各自峰面積，甘油三亞油酸酯平均峰面積為2918110，RSD 2.07%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的火麻仁飲片9份，每份約10 g，精密稱(chēng)定。3份為一組，置具塞錐形瓶中，每組精密加入低、中、高濃度甘油三亞油酸酯對(duì)照品貯備液，按2.2及2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，結(jié)果平均加樣回收率100.6%，RSD=1.33%(n=9)。

2.3.9樣品含量測(cè)定

分別稱(chēng)取不同來(lái)源的火麻仁飲片及不同炮制品粉末各約10 g，按2.2及2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件進(jìn)行分析，進(jìn)樣量5 μL，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算各樣品中甘油三亞油酸酯的含量，結(jié)果見(jiàn)圖1、表1所示。

圖1　火麻仁飲片生品及炒品HPLC圖

(mg·g-1)

3　討　論

(1) 火麻仁是一味臨床常用中藥，具有潤(rùn)腸通便作用，主治血虛津虧，腸燥便秘等癥。本課題組在2015版中國(guó)藥典科研課題的資助下，研究發(fā)現(xiàn)，歷版中國(guó)藥典對(duì)于火麻仁藥材及其飲片用藥部位的記載是比較混亂的，時(shí)而果實(shí)，時(shí)而種子。而火麻仁的果實(shí)由果皮和種子組成，且果皮和種子的化學(xué)成分的組成和含量則存在較大的差別，因此二者不能混淆。目前我們從全國(guó)各地藥房收集到的火麻仁飲片，其情況也比較復(fù)雜，大部分地區(qū)的飲片為大麻的整體果實(shí)，僅大連、沈陽(yáng)等少數(shù)地區(qū)為去除果皮的種子。因此，規(guī)范火麻仁飲片的定義為目前火麻仁規(guī)范化研究的首要問(wèn)題。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)考證及化學(xué)成分研究，我們基本認(rèn)定，火麻仁藥材為“?？浦参锎舐椤母稍锍墒旃麑?shí)”，而火麻仁飲片則為“?？浦参锎舐椤母稍锍墒旆N子”[4]。

(2) 關(guān)于火麻仁的研究，目前主要集中在其藥材和脂肪油提取物方面，關(guān)于其飲片的研究較少?；鹇槿实呐谥圃?010版

藥典收載的為清炒法，要求“炒至微黃色，有香氣”。鑒于微波炮制法和烘法具有操作過(guò)程干凈且易于控制，可以避免在炒藥過(guò)程中火候控制不當(dāng)以及有效成分的損失等特點(diǎn)[5]，除了清炒法之外，還采用了微波法和烘法對(duì)火麻仁飲片進(jìn)行了炮制研究。

(3) 含量測(cè)定結(jié)果表明，經(jīng)三種不同的方法炮制之后，火麻仁飲片中藥效成分甘油三亞油酸酯的含量均有不同程度的升高，體現(xiàn)出了炮制的“增效”特點(diǎn)。其原因可能在于火麻仁飲片經(jīng)炮制后，質(zhì)地更酥脆，甘油三亞油酸酯更易于煎出的緣故。同時(shí)結(jié)果還表明，在三種不同的炮制方法中，清炒法和微波法對(duì)甘油三亞油酸酯的含量提升效果較為顯著，烘法次之。因此可初步認(rèn)定，三種炮制方法中，以清炒法和微波法為佳。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010:74．

[2]朱江,蔡明宸,王鑫,等．非水反相色譜法測(cè)定火麻仁中甘油三酯含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015,21(13):53-55．

[3]李寒冰,馬永潔,苗靜靜,等．火麻仁油對(duì)衰老模型小鼠皮膚相關(guān)指標(biāo)的影響[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(9):201-205．

[4]蔡明宸,張北燦,魯雅文,等．HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地火麻仁藥材中胡蘆巴堿的含量[J].化學(xué)工程師，2014(7):29-31．

[5]魏文龍,付娟，李文濤,等．基于UPLC方法的酒當(dāng)歸微波炮制工藝研究[J]．藥物評(píng)價(jià)研究，2014，37(2):150-154．

Influences of Different Processing Methods on the Content of Trilinolein in the Seed of Cannabis Sativa*

DENGShi-ren,WANGChun-jiao,XIALin-bo,WANGXin,ZHUXia-min,CAIMin-chen

(College of Medicine, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Liaoniang Dalian 116600, China)

The influence of the different processing methods on the contents of trilinolein in the seed of Cannabis Sativa was compared. Stir-fired method, microwave method and bake method were used to process the seed of Cannabis Sativa from three different regions, and then an HPLC method was conducted to determine the contents of trilinolein in the seed of Cannabis Sativa prepared by three different processing methods. Results showed that the contents of trilinolein in the processed seed of Cannabis Sativa were all higher than the raw materials. Among all the three processing method, stir-fired and microwave was the best, and bake was the second one. Conclusion: The content of trilinolein in the seed of Cannabis Sativa would increase by processing. Among all the three processing method, stir-fired and microwave was better.

cannabis sativa; processing; trilinolein; content

2015年版中國(guó)藥典一部科研立項(xiàng)(火麻仁藥材及飲片)；2008年遼寧省高等學(xué)?？蒲许?xiàng)目計(jì)劃(2008450)；遼寧省自然科學(xué)基金(2015020713)；全國(guó)中藥飲片炮制規(guī)范(第二批)研究任務(wù)(2015-YP-24);遼寧省高等學(xué)校人才支持計(jì)劃(LJQ2015070)。

鄧仕任(1979-)，男，博士，副教授。

夏林波(1977-)，女，博士，副教授,研究方向?yàn)橹兴幣谥啤?/p>

R284.1

A

1001-9677(2016)03-0077-03