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      衛(wèi)生學(xué)檢查中和劑頭孢菌素酶作用范圍研究

      2016-09-02 05:32:25沈祝飛王丹丹
      關(guān)鍵詞:衛(wèi)生學(xué)內(nèi)酰胺類抗生素

      吳 揚(yáng),余 輝,沈祝飛,王丹丹

      (杭州北望生物技術(shù)有限公司,杭州 310011)

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      衛(wèi)生學(xué)檢查中和劑頭孢菌素酶作用范圍研究

      吳揚(yáng),余輝,沈祝飛,王丹丹

      (杭州北望生物技術(shù)有限公司,杭州 310011)

      為給生產(chǎn)廠家選擇頭孢菌素酶提供參考依據(jù),探討頭孢菌素酶去除各種常見頭孢菌素類抗生素抑菌性的能力.采用抑菌圈的方法,對(duì)比試驗(yàn)組和空白對(duì)照組頭孢菌素酶對(duì)20種頭孢菌素類和3種碳青霉烯類(培南類)藥敏紙片去除抑菌性能力的大小,判斷頭孢菌素酶能否有效地水解各種頭孢菌素β-內(nèi)酰胺環(huán)的酰胺鍵,使其降低或喪失抑菌活性.結(jié)果表明,頭孢菌素酶對(duì)大多數(shù)頭孢菌素類抗生素均有較強(qiáng)的中和能力,對(duì)少部分如頭孢曲松等有中和作用,但需要的酶量較大;對(duì)碳青霉烯類(培南類)作用很弱.

      頭孢菌素類抗生素;頭孢菌素酶;衛(wèi)生學(xué)檢查;抑菌圈

      頭孢菌素類抗生素屬β-內(nèi)酰胺類抗生素,具有廣譜的抗菌性,殺菌力強(qiáng),對(duì)于敏感菌所致的急性扁桃體炎、急性咽炎、中耳炎、肺部感染、尿路感染、皮膚軟組織感染等疾病療效顯著.中國(guó)藥典(2010年版)二部附錄ⅪH “無菌檢查法”和ⅪJ“微生物限度檢查法”中規(guī)定了β-內(nèi)酰胺類抗生素供試品處理方法,要求用β-內(nèi)酰胺酶來處理供試品,以便消除β-內(nèi)酰胺類抗生素的抑菌性,排除其對(duì)衛(wèi)生學(xué)檢查結(jié)果的影響,避免造成假陽(yáng)性的判斷[1-2].雖然各生產(chǎn)廠家對(duì)使用β-內(nèi)酰胺酶作為β-內(nèi)酰胺類抗生素的中和劑已成為共識(shí),但目前大多廠家用戶對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的適用范圍尚不清楚,存在混淆使用的現(xiàn)象[3].本實(shí)驗(yàn)選用β-內(nèi)酰酶中的頭孢菌素酶,對(duì)市售常見的20種頭孢菌素類和3種碳青霉烯類(培南類)產(chǎn)品進(jìn)行滅活試驗(yàn),為各生產(chǎn)廠家提供參考依據(jù)[4-6].

      1 儀器與試藥

      SW-CJ-1FD單人單面凈化工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司),DRP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司).

      抗生素藥敏試紙片如表1(購(gòu)自上海易佰聚貿(mào)易有限公司);頭孢菌素酶(批號(hào):20130723,杭州北望生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),活性>200萬(wàn)單位);營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿培養(yǎng)基(自制);供試菌大腸埃希菌(編號(hào)BL21,購(gòu)自浙江省微生物所).

      表1 市售常見頭孢類抗生素藥敏紙片及其含量

      2 方法與結(jié)果

      2.1供試品配制

      取一支頭孢菌素酶(>200萬(wàn)單位),用無菌水溶解并稀釋至1×105單位∕mL,無菌過濾后在2~8 ℃條件下貯存?zhèn)溆?

      2.2培養(yǎng)基制備

      照中國(guó)藥典2010年版附錄ⅪH無菌檢查法項(xiàng)下培養(yǎng)基制備6營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制備方法制備.

      2.3衛(wèi)生學(xué)檢查

      試驗(yàn)組:營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基滅菌后,冷卻至55~60 ℃.添加頭孢菌素酶至瓊脂培養(yǎng)基中,每皿添加活性均為105單位.平板上涂布50 μL大腸埃希菌懸液;將藥敏紙片貼至平板上,并做好標(biāo)記.

      空白對(duì)照組:方法同試驗(yàn)組,但培養(yǎng)基中不加入頭孢菌素酶,空白組各藥敏紙片均應(yīng)有抑菌圈.

      將上述試驗(yàn)組和空白對(duì)照組置培養(yǎng)箱中,(37 ± 1) ℃培養(yǎng)18~24 h后觀察結(jié)果,以抑菌圈的大小判定供試品是否具有中和抗生素活性的能力.見表2.

      表2 105單位/皿酶量對(duì)定量藥敏紙片中抗生素的分解效果

      -:無分解作用;+:較弱分解作用;++:中等分解作用;+++:較強(qiáng)分解作用;

      選出上述2.3試驗(yàn)中有抑菌圈的抗生素,加大平皿中的加酶量,方法同上,觀察結(jié)果,以抑菌圈的大小判定供試品是否具有中和抗生素活性的能力.見表3.

      結(jié)果表明:頭孢菌素酶對(duì)大多數(shù)頭孢菌素類抗生素均有較強(qiáng)的中和能力,少部分如頭孢曲松、頭孢呋辛等有中和能力但需要的酶量較大.頭孢菌素酶對(duì)碳青霉烯類(培南類)中和作用很弱.

      表3 抑菌圈測(cè)量

      -:無分解作用;+:較弱分解作用;++:中等分解作用;+++:較強(qiáng)分解作用;

      3 結(jié) 語(yǔ)

      原料藥和制劑的衛(wèi)生學(xué)檢查(無菌檢查和微生物限度檢查), 是評(píng)價(jià)藥品生產(chǎn)過程中是否受到嚴(yán)重衛(wèi)生污染的重要依據(jù).但在實(shí)際檢測(cè)工作中, 由于抗生素藥品本身的抑菌性,對(duì)檢查結(jié)果的判斷產(chǎn)生影響,而選擇哪種中和劑需要在檢查過程中進(jìn)行大量的方法學(xué)驗(yàn)證,給檢驗(yàn)工作帶來一定的難度.通過以上研究,可以清楚的了解頭孢菌素酶對(duì)哪些頭孢類抗生素有較好的中和作用,為各頭孢菌素類抗生素生產(chǎn)廠家提供了參考依據(jù).

      [1]中華人民共和國(guó)藥典編委會(huì). 中國(guó)藥典二部(附錄)[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010. 103-107.

      [2]中華人民共和國(guó)藥典編委會(huì). 中國(guó)藥典二部(附錄)[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010. 107-116.

      [3]張峰, 袁菊萍. 不同廠家頭孢他啶體外抑菌作用及藥物費(fèi)用分析[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2008, 27(4): 478-479.

      [4]李夏林, 覃曉. 注射用頭孢呋辛鈉無菌檢查的方法學(xué)驗(yàn)證[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué), 2012, 11(2): 112-113.

      [5]佘月坤, 田勇. 頭孢菌素類抗生素膠囊劑控制菌檢查方法的探討[J]. 藥物分析雜志, 2009, 29(6): 1049-1050.

      [6]孫春艷, 張春瑛, 沈佳特, 等. 注射用頭孢菌素?zé)o菌檢查的方法學(xué)驗(yàn)證[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2007, 26(9): 1089-1091.

      Probe into hygiene inspection neutralizer scope of cephalosporins

      WU Yang, YU Hui, SHEN Zhu-fei, WANG Dan-dan

      (Hangzhou Lion Biotechnology Co., Ltd, Hangzhou 310011, China)

      To provide the manufactures reference for choosing cephalosporinase as a neutralizing agent of cephalosporins’ hygiene inspection, the ability of cephalosporinase removing commercial common cephalosporins’ antibacterial abilitiy was investigated. Using cephalosporinase as a neutralizer, the size of inhibiting zone of all kinds of cephalosporin sensitive test paper was observed after neutralization, which can judge the strength of hydrolysis cephalosporins’ beta lactam amide linkage leading to the reduce of antibacterial ability of cephalosporins. Results indicated that cephalosporinase has great effect of neutralization on most kinds of cephalosporin. It also has effect on ceftriaxone, but need more amount of cephalosporinase. The neutralization effect of cephalosporinase on carbapenems(imipenem) is very weak.

      cephalosporins; cephalosporinase; hygienic inspection; inhibiting zone

      2015-11-10.

      吳揚(yáng)(1976-),男,工程師,研究方向:中藥制藥.

      R927

      A

      1672-0946(2016)04-0433-02

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