閆釗

摘要：主要以甘肅徽縣地區(qū)引進的良種“保加利亞”玫瑰作為研究對象進行試驗，結(jié)果表明，3月中下旬、6月10～25日這兩段時間最適宜采摘玫瑰外植體；枝條中部、上部這兩個部位最適合建立無菌體系；最佳的外植體擴繁培養(yǎng)基是交互使用0.1mg/LI-BA+MS+1.0mg/L BA.0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA+MS、0.2mg/L NAA+1.0mg/L BA+MS這三種培養(yǎng)基，而1/2M5+0.8～1.0mg/LIBA培養(yǎng)基是最適合生根的。只要通過科學(xué)煉苗，玫瑰花的移栽成活率可以超過90%。

關(guān)鍵詞：玫瑰花：組織培養(yǎng)：研究分析

玫瑰也被稱為刺玫瑰，是一種薔薇科薔薇屬植物，大概高2m左右的直立灌木，葉片像羽狀，玫瑰枝干比較粗壯，大概有5～9枚小葉，整個形狀為橢圓狀倒卵形或者橢圓形。玫瑰中含有很多天然礦物質(zhì)（108種），而且富含很多種天然維生素以及清毒養(yǎng)顏成分，還具有人體必需的18種氨基酸，另外玫瑰的藥用價值也很高。因此玫瑰產(chǎn)業(yè)具有很好的發(fā)展前景，非常有必要探索玫瑰快速繁育技術(shù)，提高玫瑰組織培養(yǎng)效益的途徑。

1 材料以及方法

1.1 研究試驗材料

本次研究試驗材料選自甘肅徽縣地區(qū)從外引進的優(yōu)良玫瑰苗，已經(jīng)栽培了2年多。

1.2 試驗方法

每個試驗處理都采用單因子試驗方法，各試驗處理接種數(shù)量為10瓶，需要試驗2次。具體的試驗方法如下：①獲得外植體。隨機選取一些沒有病蟲害、健壯的玫瑰苗作為本次研究標(biāo)的物，采用合理的殺菌脫毒處理培養(yǎng)措施后當(dāng)作培養(yǎng)母株。外植體選擇2015年抽生的腋芽飽滿枝條或者3月中旬一直到7月下旬沒有萌發(fā)的1年生枝條。②建立無菌體系。及時把采摘的外植體材料送回實驗室，一定要將水分流失減少到最低限度，使材料保鮮，在流水狀態(tài)下沖洗9～10min，將水分濾干之后再把多余的枝葉等去除，然后剪成一段長1～1.5cm，并且上面有1～2個芽的莖段或者莖尖，一定要注意下切口應(yīng)該斜剪，上切口平剪，將其放置于無菌瓶中，然后放在無菌臺上。進行接種前應(yīng)該采用0.1%～0.2%HgCl₂溶液來浸泡材料，注意浸泡的時候千萬不能隨意晃動裝有外植體的無菌瓶，從而確保能夠完全消毒。消毒之后應(yīng)該采用無菌水仔細(xì)沖洗7～8次，將材料表面上殘留的HgCl₂溶液徹底消除，把水分濾干之后放在培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)。③培養(yǎng)條件。選擇在徽縣苗木組培中心進行試驗，調(diào)節(jié)光照強度為2000Lx，光照時間連續(xù)10～12h，培養(yǎng)室溫度保持在21±2℃。選擇的培養(yǎng)基應(yīng)該添加葡萄糖20kg/L，瓊脂5.5kg/L，培養(yǎng)基的pH值為5.9。

2 試驗結(jié)果以及分析

2.1 外植體外部因素對于初代培養(yǎng)的主要影響

在3月5日～7月5日這段時間內(nèi)，每隔5d在選定的玫瑰植株上采摘1次外植體，然后分別根據(jù)枝條上部、中部、下部進行相應(yīng)的處理，放置在20kg/L葡萄糖+1.0mg/L BA+MS+瓊脂5.5kg/L的培養(yǎng)基中接種進行初代培養(yǎng)，連續(xù)觀察25d，并且詳細(xì)記錄。結(jié)果表明，3月中下旬、6月10日至25日這兩段時間最適宜采摘玫瑰外植體，把這段時間采摘的外植體帶回實驗室后通過相應(yīng)的殺菌處理進行初代培養(yǎng)之后，具有很高的新芽抽生率，而且建立無菌體系的難度相對比較小，其中枝條中部、上部最適合建立無菌體系，通常情況下枝條下部的芽抽生速度相對比較慢，同時也出現(xiàn)嚴(yán)重的污染。

2.2 愈傷組織誘導(dǎo)受到不同激素的影響分析

根據(jù)不同的組織把在初代培養(yǎng)基上生長比較良好的無菌苗接種在添加幾種不同濃度激素的MS培養(yǎng)基中，連續(xù)觀察30d，詳細(xì)記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。具體見表1。

根據(jù)表1中的觀察結(jié)果分析，愈傷組織自身的形態(tài)、質(zhì)地對于器官發(fā)生部位及其能力具有決定性的作用，玫瑰莖尖組織、莖段組織在一定激素誘導(dǎo)下都可以生成愈傷組織，同時其周圍會冒出健康小芽，但是不管添加什么激素，玫瑰葉片都無法誘導(dǎo)出愈傷組織。其次，如果培養(yǎng)基中沒有添加激素，不管選用什么樣的玫瑰組織都無法誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。0.5mg/L NAA培養(yǎng)基、0.1mg/L2，4-D+1.0mg/L BA培養(yǎng)基誘導(dǎo)玫瑰愈傷組織的效果相對良好，假如用作芽子的大量擴繁，最好是采用0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA組合培養(yǎng)基。

2.3 芽分化以及增殖采用不同培養(yǎng)基的影響

在無菌條件下在培養(yǎng)皿中隨機切取1.5cm長的莖段（帶有葉芽）、生長健壯的無菌材料莖尖，將其放置在1.0mg/L BA+MS培養(yǎng)基中接種，連續(xù)觀察10d后會發(fā)現(xiàn)開始萌芽，而且抽生出了新芽，待新芽生長到2cm，將其切下分別放置于1.0mg/L BA+MS+0.1mg/L2，4-D培養(yǎng)基（①）、1.0mg/L BA+MS+0.2mg/L 2，4-D培養(yǎng)基（②）、1.5mg/L BA+MS+0.1mg/L IBA培養(yǎng)基（③）、1.5mg/L BA+MS+0.5mg/L IBA培養(yǎng)基（④）、1.0mg/LBA+MS+0.2mg/L NAA 培養(yǎng)基（⑤）等幾種培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，前提條件是其他條件相同，連續(xù)觀察30d，詳細(xì)記錄結(jié)果，具體見表2。

從表2中分析可知，同等條件下，在相同時間內(nèi)芽分化量較多，長勢良好的培養(yǎng)基為①、③、⑤，雖然②號培養(yǎng)基的芽分化較大，長勢也良好，但呈褐化；④號培養(yǎng)基芽分化量相對較少，而且芽長勢細(xì)弱。為此，玫瑰繼代增殖培養(yǎng)應(yīng)該選擇①號、③號、⑤號培養(yǎng)基，而且交互使用這3種培養(yǎng)基的話有助于壯苗。

2.4 試管苗煉苗移栽

把健壯芽苗隨機切成2cm左右莖段（帶腋葉）或者莖尖放置在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)，連續(xù)觀察35d后發(fā)現(xiàn)沒有激素的MS空白培養(yǎng)基無法誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)基中IBA濃度相對較低的話，玫瑰生根率也相對比較低，但是超過某濃度值，會對玫瑰生根產(chǎn)生抑制作用，最佳的IBA濃度在0.8～1.0mg/L之間。試管苗生長至2cm，苗高3cm多，根數(shù)有2條，而且長勢良好，葉片呈綠色的情況，在煉苗處理后就可以移栽。移栽的過程中一定要采用大量溫水將生根苗根系上的培養(yǎng)基徹底沖洗干凈，然后把玫瑰苗放在添加適量IBA溶液中可提高苗木移栽成活率。

3 結(jié)論

適當(dāng)采用組織培養(yǎng)技術(shù)有利于玫瑰的快速繁育，建立玫瑰無菌體系的過程中一定要注意選擇合適的初代培養(yǎng)時間以及最佳的外植體培養(yǎng)部位。試管苗移栽成活率主要和煉苗方法以及煉苗時間有關(guān)。玫瑰組織培養(yǎng)過程中很容易出現(xiàn)苗邊葉黃化，不利于玫瑰組織快速繁育。發(fā)生玻璃化現(xiàn)象可能是因為培養(yǎng)瓶的濕度較高或者激素濃度過高。

（收稿：2016-03-24）