調(diào)胃承氣湯中大黃酒洗前后的藥效對比研究

崔園園， 張 美， 陳志敏， 李文兵， 胡昌江*， 陳海媚（.成都中醫(yī)藥大學，四川成都637；.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川成都6008）

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調(diào)胃承氣湯中大黃酒洗前后的藥效對比研究

崔園園1， 張 美1， 陳志敏1， 李文兵2， 胡昌江1*， 陳海媚1
（1.成都中醫(yī)藥大學，四川成都611137；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川成都610081）

目的 探討生大黃、酒洗大黃及其分別納入調(diào)胃承氣湯時對小鼠瀉下作用及 “寒下”傷胃氣不良反應的差異，以闡明調(diào)胃承氣湯中大黃酒洗的意義。方法 將生大黃、酒洗大黃分別納入調(diào)胃承氣湯中，并進行瀉下、胃排空、小腸推進實驗及對小鼠基礎代謝和胃組織功能影響的比較研究。結(jié)果 各給藥組均有一定的瀉下、胃腸刺激作用，單味大黃經(jīng)酒洗后，對正常和里實證小鼠的瀉下、胃腸運動基本無影響，但對基礎代謝、胃組織功能有一定的不良反應。胃組織中SOD水平降低、MDA水平升高，差異也均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01，P＜0.05）。結(jié)論 調(diào)胃承氣湯中采用酒洗大黃有一定的實際意義和科學性，既保證了瀉下的目的，又緩解了不良反應。

生大黃；酒洗大黃；調(diào)胃承氣湯；瀉下作用；胃組織

調(diào)胃承氣湯來源于張仲景的 《傷寒論》，由大黃、芒硝和甘草組成，為苦寒攻下之劑，瀉下作用緩和，多用于熱邪偏甚之證，經(jīng)通便的手段達到瀉熱的目的。該處方中藥物的炮制方法被仲景視為不可分割的組成部分，是臨床療效的重要影響因素。其中，大黃用酒洗以緩和生品苦寒、峻烈之性；芒硝咸寒降泄、潤燥軟堅；蜜炙甘草護理脾胃、緩和硝黃峻猛之性，達到調(diào)和諸藥的目的。但因酒洗大黃這一炮制品種現(xiàn)已少見，多用大黃生品代替，忽略了仲景炮制入藥的意義，雖有文獻 ［1-3］報道大黃用酒洗的目的，但均缺乏藥效試驗依據(jù)。為此，本實驗將大黃酒洗前后分別納入調(diào)胃承氣湯中，采用瀉下、胃排空、小腸推進及胃腸激素代謝實驗，探討酒洗大黃的藥效及調(diào)胃承氣湯中大黃酒洗的實際意義，為該處方中用酒洗大黃提供一定的科學依據(jù)。

1　實驗材料

1.1藥物與試劑 大黃、芒硝、甘草購自四川省成都市荷花池藥材市場，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學盧先明教授鑒定，大黃為蓼科植物藥用大黃Rheum offcihale Bai11.的干燥根和根莖；芒硝為硫酸鹽類礦物芒硝族芒硝，經(jīng)加工精制而成的結(jié)晶體；甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖。均按 《上海市中藥飲片炮制規(guī)范》［4］和《中國藥典》［1］中的方法進行炮制。

調(diào)胃承氣湯Ⅰ配方為大黃生品+芒硝+炙甘草（12∶12∶6）；調(diào)胃承氣湯Ⅱ配方為大黃酒洗品+芒硝+炙甘草 （12∶12∶6）。取這兩種 “調(diào)胃承湯”，加8倍量水溫浸2次，每次60 min，合并藥液 （芒硝后下），減壓濃縮，制成1 g/mL生藥液備用。生大黃、酒洗大黃單煎液制備方法上，制成0.6 g/mL生藥液備用。

考馬斯亮藍、丙二醛 （MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒均購自南京建成生物技術研究所，批號分別為201411120、20141124、20141126。

1.2儀器 小鼠灌胃器、2 mL無菌注射器、計時手表、BP-61電子天平、BSA224s分析天平（德國Sartorius公司）；自制小鼠代謝籠 （實用新型專利，專利號CN201146735）。

1.3 動物 昆明種健康小鼠 （普通級），體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，成都達碩生物科技有限公司提供，合格證號SCXK（川）0015107。

1.4試驗場所 成都中醫(yī)藥大學中藥炮制實驗室 （國家中醫(yī)藥管理局三級實驗室）；成都中醫(yī)藥大學藥學院中藥藥理實驗動物觀察室，許可證號川實動管使第15號。

2　實驗方法及結(jié)果

2.1對小鼠基礎代謝及胃組織功能的影響 大黃水煎液灌胃小鼠以形成脾胃虛寒證［5-6］，而調(diào)胃承氣湯的 “寒下”藥效能減弱大鼠的多方面機制，并有一定的性別差異。體質(zhì)量、飲食量、飲水量是胃病模型的重要體征監(jiān)測指標，而SOD、MDA是重要的功能檢測指標［7-9］。研究證明，SOD水平降低是判斷胃腸道病變的重要原因，而MDA水平升高是造成胃粘膜損傷的重要因子，兩者可同時反映機體在病理狀態(tài)下的變化情況。

取體質(zhì)量18～22 g的小鼠80只，雌雄各半，隨機分成5組，分別為空白組、生大黃組、酒洗大黃組、調(diào)胃承氣湯Ⅰ組及調(diào)胃承氣湯Ⅱ組每組16只，雌雄各半。適應性飼養(yǎng)3 d后，無異常表現(xiàn)者納入實驗，用苦味酸標記，稱定體質(zhì)量，參照文獻 ［9-10］，按等效劑量法計算出按生理鹽水組、生大黃組 （12 g/kg）、酒洗大黃組 （12 g/kg）、調(diào)胃承氣湯Ⅰ組 （20 g/kg）、調(diào)胃承氣湯Ⅱ組 （20 g/kg）0.2 mL/10的劑量灌胃給藥，連續(xù)15 d。觀察記錄小鼠從給藥開始第1天到第15天的體質(zhì)量、飲食量、飲水量的變化，以及灌胃15 d后胃組織中SOD、MDA水平的變化。

2.1.1體質(zhì)量、飲食量和飲水量的變化狀況 觀察第1～15天各組小鼠的平均體質(zhì)量、飲食飲水量的變化情況，給藥后每3 d測量一次，結(jié)果見圖1、表1。

由圖可知，從灌胃開始，空白組及各實驗組小鼠的體質(zhì)量呈增長趨勢，其中空白組增長幅度最明顯；調(diào)胃承氣湯Ⅰ組、Ⅱ組增長緩慢，其中調(diào)胃承氣湯Ⅱ組稍高于Ⅰ組；生大黃組、酒洗大黃組增長最緩慢。

由表可知，灌胃前3 d空白組及各實驗組小鼠飲食量、飲水量均出現(xiàn)明顯增高的現(xiàn)象，但從第3天開始呈下降趨勢。與空白組比較，各實驗組小鼠飲食量均降低，程度依次為酒洗大黃組＞生大黃組＞調(diào)胃承氣湯Ⅰ組＞調(diào)胃承氣湯Ⅱ組；與空白組比較，生大黃組、酒洗大黃組小鼠飲水量明顯降低，而調(diào)胃承氣湯Ⅰ組、Ⅱ組明顯增加。

圖1　給藥后各組小鼠體質(zhì)量變化曲線

表1　飲食量、飲水量的變化情況比較 （g/g體質(zhì)量，n=16）

2.1.2胃組織中超氧化物歧化酶 （SOD）、丙二醛（MDA）水平的變化 給藥第15天，各組小鼠禁食不禁水12 h后處死，取胃竇部組織，用勻漿器制備成10%勻漿。按試劑盒說明操作，測定SOD、MDA水平，結(jié)果見表2。

由表2可知，與空白組比較，酒洗大黃組小鼠胃組織中SOD水平降低、MDA水平升高，兩者均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；與酒洗大黃組比較，調(diào)胃承氣湯Ⅱ組小鼠胃組織中SOD水平升高，MDA水平下降，也均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）。因此，酒洗大黃組和調(diào)胃承氣湯Ⅰ組治藥對小鼠胃功能均有明顯影響。

表2　各組給藥后小鼠胃組織中SOD、MDA的變化情況比較（±s，n=16）

表2　各組給藥后小鼠胃組織中SOD、MDA的變化情況比較（±s，n=16）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與酒洗大黃組比較，#P＜0.05

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2.2對小鼠胃排空及腸推進的影響 取體質(zhì)量18～22 g的小鼠80只，雌雄各半，隨機分成5組，分別為空白組、生大黃組、酒洗大黃組、調(diào)胃承氣湯Ⅰ組及調(diào)胃承氣湯Ⅱ組。每組16只，雌雄各半。

2.2.1胃排空的測定 實驗前小鼠禁食不禁水12 h，各組按給定劑量灌胃給藥30m in后，再灌胃營養(yǎng)性半固體糊［11］0.8 mL，25 min后頸椎脫臼處死，剖腹取全部胃腸，拭干稱定質(zhì)量，沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，再稱定質(zhì)量，計算胃內(nèi)容物殘留率。公式為胃內(nèi)容物殘留率（%）=［（胃全重-胃凈重）/半固體糊重］×100%。

2.2.2腸推進的測定 自小鼠盲腸處取腸，不加牽引平鋪于白紙上，分別量取自幽門括約肌至炭糊最前端及盲腸的距離，計算炭末推進率。公式為炭末推進率 （%）=炭末在腸內(nèi)推進距離 （cm）/小腸全長 （cm）×100%，結(jié)果見表3。由表可知，與空白組比較，調(diào)胃承氣湯Ⅰ組小鼠胃內(nèi)殘留率降低、小腸推進比升高，均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而且酒洗大黃與生大黃較小鼠胃腸運動功能無明顯變化。

表3　各組給藥后小鼠胃腸運動功能的變化情況比較 （± s，n=16）

表3　各組給藥后小鼠胃腸運動功能的變化情況比較 （± s，n=16）

注：與空白組比較，*P＜0.05

組別　　胃內(nèi)殘留率/%　　小腸推進比/% 78.61±5.62　56.79±6.90生大黃組　76.98±8.92　58.31±5.66酒洗大黃組　76.40±7.57　58.92±6.85調(diào)胃承氣湯Ⅰ組　71.02±4.44*　65.81±10.15*調(diào)胃承氣湯Ⅱ組　72.48±6.33　63.66±8.99空白組*

2.3對小鼠瀉下的影響 取體質(zhì)量18～22 g的小鼠80只，雌雄各半，隨機分成5組，分別為空白組、調(diào)胃承氣湯Ⅰ組及調(diào)胃承氣湯Ⅱ組。每組16只，雌雄各半。

2.3.1對正常小鼠瀉下的影響 實驗前禁食不禁水12 h，置于鋪有白紙的鼠盒中，各組按給定劑量灌胃給藥，每只小鼠置于鋪有濾紙的小鼠代謝籠內(nèi)進行觀察，記錄排便時間、數(shù)目和糞便干重等。為避免糞跡重疊不清，每隔1h更換濾紙1次，連續(xù)觀察4 h（出現(xiàn)不成形稀便者為瀉下），結(jié)果見表4。

表4　正常小鼠各組給藥后瀉下情況的比較 （±s，n=16）

表4　正常小鼠各組給藥后瀉下情況的比較 （±s，n=16）

注：與生大黃組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與酒洗大黃組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

/g空白組　0　　—組別　　瀉下數(shù)/只　　首次瀉下時間/min　4 h內(nèi)瀉下數(shù)/次　　總糞便干重0.73±0.38生大黃組　14　172.3±42.3　2.17±1.34　0.72±0.33酒洗大黃組　13　172.9±29.7　2.38±1.33　0.73±0.44調(diào)胃承氣湯Ⅰ組　12　102.1±36.8**##　4.18±2.19**##　0.76±0.55*#調(diào)胃承氣湯Ⅱ組　13　122.7±51.9**##　4.23±1.48**##　0.76±0.47*#-

由表可知，各組給藥后小鼠均出現(xiàn)明顯的瀉下現(xiàn)象。與空白組、生大黃組、酒洗大黃組比較，調(diào)胃承氣湯Ⅰ組、Ⅱ組小鼠首次瀉下時間4 h內(nèi)瀉下數(shù)、總糞便干重均有明顯差異 （P＜0.01，P＜0.05），而且酒洗大黃較生大黃入藥的調(diào)胃承氣湯對正常小鼠瀉下作用無明顯變化。

2.3.2對里實證小鼠瀉下的影響 參照文獻 ［12-13］的方法，進行里實證造模，用各組小鼠自身糞便制成10%混懸液，取濾液 ［1mL/（d·只）-1］。灌胃小鼠2 d后，禁食不禁水12 h，每只小鼠給濾液0.5 mL，方法同 “2.3.1”項。30 min后按劑量灌胃給藥，每只小鼠置于鋪有濾紙的小鼠籠內(nèi)進行觀察，記錄排便時間、給藥后4 h內(nèi)排便數(shù)目及干燥糞便重量，結(jié)果見表5。

表5　里實證小鼠各組給藥后瀉下情況的比較 （±s，n=16）

表5　里實證小鼠各組給藥后瀉下情況的比較 （±s，n=16）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與生大黃組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與酒洗大黃組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

/g空白組　0　　—組別　　瀉下數(shù)/只　　首次瀉下時間/min　4 h內(nèi)瀉下數(shù)/次　　總糞便干重0.97±0.35生大黃組　15　125.6±29.4　3.56±1.24　0.97±0.50酒洗大黃組　13　127.0±31.9　3.01±1.07　1.01±0.62調(diào)胃承氣湯Ⅰ組　12　101.4±29.8#Δ　5.78±1.48##ΔΔ　1.11±0.88**##ΔΔ調(diào)胃承氣湯Ⅱ組　13　94.9±28.7#Δ　4.27±1.79　1.14±0.85**##ΔΔ-

由表可知，各組給藥后里實證小鼠均出現(xiàn)明顯的瀉下現(xiàn)象。與空白組、生大黃組、酒洗大黃組比較，調(diào)胃承氣湯Ⅰ組的首次瀉下時間、4 h內(nèi)瀉下數(shù)、總糞便干重均有顯著性差異 （P＜0.01，P＜0.05），而且酒洗大黃較生大黃入藥的調(diào)胃承氣湯可減弱對里實證小鼠的瀉下作用。

3　討論

調(diào)胃承氣湯作為張仲景瀉熱攻下的代表方，在加工炮制方面有獨到之處。仲景在用藥時最注重保護胃氣，用酒洗大黃是以酒之溫熱緩和大黃苦寒傷胃之弊，使其達到峻下而又不傷胃氣之目的，是謂攻邪而不傷正。從大黃現(xiàn)代炮制概況來看［14］，僅在 《上海市中藥飲片炮制規(guī)范》中有記載酒洗大黃的方法，而現(xiàn)有文獻資料鮮見對該炮制品的研究，其入復方的報道更少。本實驗將大黃酒洗炮制后，采用小鼠基礎代謝、胃活力、胃腸運動、瀉下作用等不同的藥理實驗及指標參數(shù)，對生大黃、酒洗大黃及分別組成的調(diào)胃承氣湯進行比較研究。

實驗發(fā)現(xiàn)，大黃復方入藥煎煮較大黃單煎對小鼠瀉下及胃腸運動作用明顯增強，可能是由于大黃致瀉、興奮胃腸的有效成分蒽醌類化合物經(jīng)長時間溫浸后，成分破壞或發(fā)生改變，使藥效降低，而復方配伍各藥間相須相使，可達到增效的目的。另外，還采用加8倍量的水溫浸2次，每次1 h，用于提取大黃生藥液，故在使用大黃單味藥時，應注意溫浸時間、次數(shù)對其藥效作用的影響。

結(jié)果表明，各藥對里實證小鼠均有明顯的通便瀉下作用。其中，酒洗大黃與生大黃比較，前者 “傷胃氣”作用較強，而在調(diào)胃承氣湯中其作用大為減弱。同時，在等劑量下小鼠糞便干重無明顯差異，表明復方中大黃酒洗既保證了排泄腸內(nèi)積滯、通便瀉熱的目的，又緩解了不良反應。由此可見，調(diào)胃承氣湯中大黃酒洗有其一定的實際意義，從而證明了張仲景在該處方中用酒洗大黃的科學性。另外，對單味藥大黃酒洗后 “傷胃氣”作用增強，而在復方中酒洗后作用減弱的機理有待作進一步研究。

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1001-1528（2016）06-1393-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.041

2015-04-27

“突破性川產(chǎn)道地藥材新品種選育”項目 （2011NZ0098-12-06）

崔園園 （1991—），女，碩士，從事中藥炮制與制劑研究。Te1：18380228308，E-mai1：1019194407@qq.com

胡昌江 （1952—），男，教授，博士生導師，從事中藥炮制學的教學和科研。Te1：13980980796，E-mai1：hhccjj@hotmai1.com

網(wǎng)絡出版日期：2015-09-01

網(wǎng)絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detai1/31.1368.R.20150901.1329.002.htm1