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      決明子破壁飲片對小腸推進及急性毒性的研究

      2016-09-12 11:33:06程翔燕楊澤銳鄧雯成金樂黃芝瑛廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源科學(xué)與工程研究中心嶺南中藥資源教育部重點實驗室廣州50006中山市中智藥業(yè)集團有限公司中山5847中山大學(xué)藥學(xué)院廣州50006
      關(guān)鍵詞:急性毒性決明子

      程翔燕楊澤銳鄧 雯成金樂*黃芝瑛( 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源科學(xué)與工程研究中心,嶺南中藥資源教育部重點實驗室,廣州 50006; 中山市中智藥業(yè)集團有限公司,中山 5847; 中山大學(xué)藥學(xué)院,廣州 50006)

      決明子破壁飲片對小腸推進及急性毒性的研究

      程翔燕1楊澤銳1鄧雯2成金樂2*黃芝瑛3
      (1廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源科學(xué)與工程研究中心,嶺南中藥資源教育部重點實驗室,廣州510006;2中山市中智藥業(yè)集團有限公司,中山528437;3中山大學(xué)藥學(xué)院,廣州510006)

      目的 研究決明子破壁飲片對小鼠小腸的推進作用和對小鼠的急性毒性作用。方法 通過考察碳末在小鼠小腸內(nèi)的推進率,評價決明子破壁飲片對小腸的推進作用;采用最大給藥量法評價決明子破壁飲片的毒性。結(jié)果 臨床等效劑量的決明子破壁飲片和常規(guī)飲片均可明顯促進小鼠小腸對碳粉的推進(P<0.05),常規(guī)飲片的臨床等效劑量約相當(dāng)于1/2破壁飲片劑量的效果;決明子破壁飲片對小鼠無明顯急性毒性反應(yīng)。結(jié)論 決明子破壁飲片具有促進小腸推進的作用且無急性毒性反應(yīng)。關(guān)鍵詞:決明子;破壁飲片;小腸推進作用;急性毒性;中藥藥理

      決明子為豆科一年生草本植物決明(Cassia obtusifolia)或小決明(Cassia tora)的干燥成熟種子。其功能主要為清肝,明目,通便,常用于頭痛眩暈,目赤昏花,大便秘結(jié)[1]。本實驗是通過小鼠小腸推進作用評價決明子破壁飲片和常規(guī)飲片對胃腸蠕動的影響,為決明子的合理開發(fā)應(yīng)用提供新的途徑和依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1動物 ①小腸推進作用實驗選用SPF級昆明種小鼠,體重18~22 g,無性別之分,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供,合格證號為:SCXK(粵)2008-0020。②急性毒性實驗選用SPF級昆明小鼠,雌雄各半。雌性:18.1~21.7 g;雄性,18.5~23.5 g,由中山大學(xué)實驗動物中心提供,實驗動物質(zhì)量監(jiān)測合格證號為:粵監(jiān)證字2008A020(廣東省實驗動物監(jiān)測所簽發(fā));實驗動物質(zhì)量合格證號:№0040568。

      1.2藥品與試劑 ①小腸推進作用實驗受試藥:決明子破壁飲片(制成1 g/ml濃縮液)、常規(guī)飲片(制成1 g/ml濃縮液)均由中山市中智藥業(yè)集團有限公司提供,生產(chǎn)批號分別為:090901-3和090901-4。阿拉伯膠 (廣州威佳科技有限公司);活性炭 (廣州威佳科技有限公司)。②急性毒性實驗受試藥:決明子破壁飲片(制成2.5 g/ml濃縮液)、常規(guī)飲片(制成2.5 g/ml濃縮液)均由中山市中智藥業(yè)集團有限公司提供,生產(chǎn)批號均為:20090901。

      1.3實驗器材 電子天平(PL202-S),made by mettlertoledo group;尺子等。

      1.4小鼠小腸推進試驗

      1.4.1劑量設(shè)置 通過體表面積折算法,對小腸推進作用實驗劑量設(shè)計如下:決明子常規(guī)飲片臨床等效劑量為:2.5 g/kg;決明子破壁飲片劑量分別為2.5 g/kg;1.25 g/kg;0.63 g/kg;0.31 g/kg。

      1.4.2方法 取體重18~22 g的SPF級昆明小鼠60只,雌雄各半,隨機分為6組,分別為:正常對照組(給予生理鹽水),常規(guī)飲片臨床等效劑量組,破壁飲片臨床等效劑量組、破壁飲片1/2臨床等效劑量組、破壁飲片1/4臨床等效劑量組、破壁飲片1/8臨床等效劑量組。各組按0.2 ml/10 g的體積灌胃給藥,每天1次,連續(xù)3天,末次給藥前12 h禁食,末次給藥后30 min,各自均灌碳末混懸液(阿拉伯膠10%、活性炭5%)0.2 ml/只,20 min后脫頸椎處死,剖開腹腔并快速取出整個胃腸道于干凈玻璃板上,小心剝離,鋪直后測量幽門至碳末前沿的距離及幽門至回盲部全長,以幽門至碳末前沿的距離占幽門至回盲部全長的百分率為碳末推進的百分率[2-6]。

      1.5急性毒性試驗 取小鼠30只,雌雄各半,均分為3組:空白對照組、決明子常規(guī)飲片組 (生藥量100 g/ kg)、決明子破壁飲片組 (生藥量100 g/kg)。給藥前禁食14~16 h,給藥后禁食4 h,不禁水。實驗時單次經(jīng)口給藥,給藥容積為40 ml/kg,其中空白對照組給予等容量的蒸餾水。給藥后立即觀察動物的反應(yīng)情況,并持續(xù)觀察4小時,以后每天觀察1次,連續(xù)觀察7天。觀察內(nèi)容包括動物體重、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等變化,中毒癥狀觀察內(nèi)容參照《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》中附錄Ⅱ。記錄動物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時間、嚴重程度、持續(xù)時間等。分別在給藥前(D0)、給藥后第3天(D3)、給藥后第5天(D5)稱量動物體重[7-9]。

      1.6統(tǒng)計學(xué)處理 所有實驗數(shù)據(jù)均以表示。計量數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計分析軟件進行方差分析和組間檢驗(T-test)。

      2 結(jié)果

      2.1決明子破壁飲片對小鼠小腸的推進作用與正常對照組比較,破壁飲片臨床等效劑量組可明顯促進小鼠小腸碳粉推進(P<0.05)。破壁飲片1/2臨床等效劑量組和常規(guī)飲片臨床等效劑量組均有一定促進小鼠小腸碳末推進的作用,但與對照組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,其效果相接近。見表1。

      表1 對正常小鼠小腸推進的影響(第一批結(jié)果)(±s,n=10)

      表1 對正常小鼠小腸推進的影響(第一批結(jié)果)(±s,n=10)

      注:與對照組比較:*P<0.05**P<0.01

      組別 劑量(g/kg) 小腸長度(cm) 炭黑長度(cm)正常對照組常規(guī)飲片組破壁等效劑量破壁1/2劑量破壁1/4劑量破壁1/8劑量-2.5 2.5 1.25 0.62 0.31 44.04±4.63 48.38±2.33 47.73±3.62 49.71±2.80**45.47±5.98 48.20±4.86 25.07±2.62 30.36±5.96*32.02±3.53**30.64±5.50**27.93±4.81 28.54±5.62炭末推進率(%)57.39±7.56 62.56±10.59 67.36±8.43*61.76±11.47 61.43±6.25 59.92±14.06

      與正常對照組比較,常規(guī)飲片臨床等效劑量組以及破壁臨床等效劑量均能明顯促進小鼠小腸碳粉推進(P<0.05)。破壁飲片1/2臨床等效劑量組的效果接近于常規(guī)飲片臨床劑量組的效果。見表2。

      表2 對正常小鼠小腸推進的影響(第二批結(jié)果) (±s,n=8)

      表2 對正常小鼠小腸推進的影響(第二批結(jié)果)?。ā纒,n=8)

      注:與對照組比較:*P<0.05**P<0.01

      組別 劑量(g/kg) 小腸長度(cm) 炭黑長度(cm)正常對照組常規(guī)飲片組破壁等效劑量破壁1/2等效劑量-2.5 1.25 0.63 22.55±1.97 25.76±4.70 25.89±3.81*22.99±4.63 48.6±3.07 46.19±3.97 45.30±3.99 44.18±4.66*炭末推進率(%)46.54±4.85 55.81±9.54*57.53±4.01*52.33±11.11

      與正常對照組比較,破壁臨床等效劑量組、破壁飲片1/2臨床等效劑量組和常規(guī)飲片臨床等效劑量組均有一定促進小鼠小腸碳粉推進的作用,但與對照組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。破壁飲片1/2臨床等效劑量組效果接近于常規(guī)飲片臨床等效劑量組的效果。見表3。

      表3 對正常小鼠小腸推進的影響(第三批結(jié)果)?。ā纒,n=8)

      表3 對正常小鼠小腸推進的影響(第三批結(jié)果) (±s,n=8)

      注:與對照組比較:*P<0.05**P<0.01

      組別 劑量(g/kg) 小腸長度(cm) 炭黑長度(cm)正常對照組常規(guī)飲片組破壁等效劑量破壁1/2等效劑量-2.5 1.25 0.63 25.30±1.98 29.38±4.68 31.27±5.71*29.94±5.53 45.18±4.22 47.00±3.76 46.79±1.41 49.38±4.25炭末推進率(%)55.79±8.38 62.25±6.56 66.76±11.40 60.50±9.35

      2.2急性毒性實驗 ①給藥后4 h內(nèi)動物反應(yīng)情況及給藥后一周一般狀況觀察結(jié)果:空白對照組動物給予蒸餾水后4 h內(nèi)及一周內(nèi)未見明顯異常反應(yīng)。決明子常規(guī)飲片組給藥后,動物均出現(xiàn)活動減少、呼吸加深和腹部收縮明顯的現(xiàn)象,其中4例(4/10)動物還出現(xiàn)行動遲緩,隨后1例(♀4)動物還出現(xiàn)自主活動增多的現(xiàn)象,40 min內(nèi)動物恢復(fù)正常。其后一周內(nèi)未見明顯異常反應(yīng)、所有動物未出現(xiàn)死亡狀況。決明子破壁飲片組給藥后,動物均出現(xiàn)呼吸加深、腹部收縮明顯的現(xiàn)象,其中7例(7/ 10)動物出現(xiàn)活動減少,6例(6/10)動物出現(xiàn)行動遲緩的現(xiàn)象。30分鐘內(nèi)恢復(fù)正常。其后一周內(nèi)動物未見明顯異?,F(xiàn)象、所有動物未出現(xiàn)死亡狀況。

      ②動物體重情況:決明子常規(guī)飲片組雌性動物給藥后第3天體重和第3天、第5天體重增重與空白對照組比較,差異有顯著性意義;與決明子破壁飲片組比較,差異無顯著性意義。其余各組動物體重呈正常增長現(xiàn)象,詳見表4。

      表4 小鼠體重增長情況?。╣,±sD,n=10)

      表4 小鼠體重增長情況 (g,±sD,n=10)

      注:1、*P<0.05,與空白對照組比較,差異有顯著性意義。2、破壁飲片組與常規(guī)飲片組比較,差異無顯著性意義

      組別 D0 D3  △(D3-D0)D5♀♂空白對照決明子常規(guī)飲片決明子破壁飲片空白對照決明子常規(guī)飲片決明子破壁飲片19.86±1.28 19.90±1.05 19.77±1.15 20.06±1.38 20.53±2.04 20.22±1.63 23.33±0.89 21.88±0.85*22.20±1.56 21.64±2.61 23.11±2.67 21.81±1.69 3.47±0.91 1.98±0.80*2.43±1.00 1.59±1.70 2.58±1.02 1.59±1.51 23.96±1.08 22.54±1.28 23.39±1.37 22.16±3.22 24.47±2.63 23.15±1.81△(D5-D0)4.10±1.01 2.65±0.93*3.63±0.33 2.10±2.72 3.94±0.79 2.94±1.72

      3 討論

      臨床等效劑量的決明子破壁飲片或常規(guī)飲片均可明顯促進小鼠小腸對碳末的推進作用,等劑量相比,破壁飲片優(yōu)于常規(guī)飲片,常規(guī)飲片臨床等效劑量約相當(dāng)于破壁飲片1/2臨床等效劑量的效果。由此可見,破壁飲片具有一定的優(yōu)越性,可節(jié)約大量藥材。且決明子破壁飲片組和常規(guī)飲片組對昆明種小鼠并無發(fā)生急性毒性反應(yīng)。決明子破壁飲片是通過現(xiàn)代高速氣流粉碎技術(shù),將傳統(tǒng)中藥飲片加工成D90<45 μm的微粉,經(jīng)專利成型技術(shù),即不添加任何賦形劑,利用藥材自身的黏性制成30~100目的均勻干燥顆粒狀飲片,該項技術(shù)既保留了常規(guī)飲片的全成分屬性,且大大提高了有效成分的利用率。破壁飲片無需煎煮,由于其打破了植物細胞壁,有效成分在水中易崩解分散,提高了藥材的生物利用度。方邦江等[10]認為破壁飲片有幾個特點:利于保留生物活性成分,提高了藥材溶出率;減少了因人體吸收差異而形成的藥效差異;采用超細微粉技術(shù)得到的生藥制劑與用傳統(tǒng)粉碎工藝得到的生物制劑相比,可明顯提高藥效;節(jié)省了藥材資源,便于應(yīng)用。

      [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:135.

      [2]徐叔云.藥理實驗方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.

      [3]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社[M].1993:335、861.

      [4]馮所安.便秘通通便作用的藥效學(xué)研究[J].中草藥,1997,28(5):290.

      [5]黃世福.黃厚排氣顆粒對胃腸運動調(diào)節(jié)作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2005,12(6):347-349.

      [6]肖振球,何國交,鐘正賢.安腸膠囊的藥效學(xué)研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2005,11(2):63-66.

      [7]國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范(局令第2號)[S]. 2003年8月6日頒布.

      [8]《中藥、天然藥物急性毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005年3月.

      [9]袁伯俊,王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐[M].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社,1997:32.

      [10]方邦江,陳浩,郭全曹.中藥超微粉的優(yōu)勢及應(yīng)用前景[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育,2010,8(17):208-209.

      Study on the Effect of the Ultrafine Granular Powder of Semen Cassiae on the Intestinal Transit and Acute Toxicity Test

      CHENG Xiangyan1,YANG Zerui1,DENG Wen2,CHENG Jinle2,HUANG Zhiying3
      (1.Research Center of Chinese Medicinal Resource Science and Engineering,Guangzhou University of Chinese Medicine,Key Laboratory of Chinese Medicine Resources from Lingnan(Ministry of Education),Guangzhou,510006,China;2.ZEUS Medicine Group,Guangdong Province,Zhongshan 528437,China;3.School of Pharmaceutical Sciences,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510006,China)

      Objective To study the effect of the ultrafine granular powder of semen cassiae on the intestinal transit and acute toxicity test in mice.Methods The effect of the ultrafine granular powder of semen cassiae on the intestinal transit was evaluated by the small intestinal carbon transit rate,whose toxicity was detected by maximum dosage test.Results The clinical equivalent dose of the ultrafine granular powder of semen cassiae and its conventional decoction pieces showed a prominent promotion effect on intestinal transit(P<0.05).Half dose of the ultrafine granular powder worked equally to its conventional decoction pieces.And no acute toxicity in mice occurred.Conclusion The ultrafine granular powder of semen cassiae exhibits a beneficial effect on intestinal transit with no acute toxicity.

      semen cassiae;ultrafine granular powder;the effect on intestinal transit;acute toxicity;pharmacology of Chinese medicine

      科研進展 Scientific Research Progress

      10.3969/j.issn.1672-2779.2016.15.064

      1672-2779(2016)-15-0144-02

      gdcjl9@126.com

      (本文編輯:李海燕 本文校對:梁燕玲2016-04-26)

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