丁利忠孫麗平*王延博孫瑩瑩陳　思

（1　長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒科，長(zhǎng)春　130021；2　長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代教育中心，長(zhǎng)春　130117；3　長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院，長(zhǎng)春　130117）

實(shí)驗(yàn)研究

益氣固本膠囊對(duì)肺氣虛小鼠血清IL-4、INF-γ水平的影響※

丁利忠1孫麗平1*王延博2孫瑩瑩1陳思3

（1長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒科，長(zhǎng)春130021；2長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代教育中心，長(zhǎng)春130117；3長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院，長(zhǎng)春130117）

目的觀察益氣固本膠囊對(duì)肺氣虛小鼠血清中IL-4、IN F-γ水平的調(diào)節(jié)作用，探討益氣固本膠囊的作用機(jī)理。方法將96只小鼠（雌雄各半）隨機(jī)分為正常組、模型組、益氣固本膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組、玉屏風(fēng)散顆粒組6組。除正常組外，其余各組小鼠均采用改良煙熏法復(fù)制肺氣虛證小鼠模型，分別摘眼球取血，采用E S IL A法檢測(cè)各組小鼠血清中IL-4、IN F-γ的含量水平。結(jié)果益氣固本膠囊高劑量、中劑量和玉屏風(fēng)顆粒組小鼠血清IN F-γ含量明顯高于模型組（P＜0.0 1，P＜0.0 5），IL-4含量明顯低于模型組（P＜0.0 5）。結(jié)論益氣固本膠囊可調(diào)節(jié)肺氣虛小鼠血清中IL-4、IN F-γ含量。

益氣固本膠囊；肺氣虛；IL-4；IN F-γ；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

肺氣虛證是肺系病的常見(jiàn)病理癥候［1］，是中醫(yī)肺系證候研究的主要基礎(chǔ)證型。小兒哮喘是臨床常見(jiàn)的反復(fù)發(fā)作性肺系疾病，伏痰是哮喘反復(fù)發(fā)作的夙根，而痰的產(chǎn)生在內(nèi)責(zé)之于臟腑功能失調(diào)。肺主氣，司呼吸，主宣發(fā)肅降、通調(diào)水道，小兒肺臟嬌嫩，若肺氣虛，失于宣肅，外邪引動(dòng)伏痰，痰氣交阻，相互搏結(jié)，氣機(jī)升降不利，以致呼吸困難，氣息喘促，喉間痰鳴，引發(fā)哮喘。支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展與Th1/Th2失衡有關(guān)［2］。本研究通過(guò)建立肺氣虛小鼠動(dòng)物模型，觀察益氣固本膠囊對(duì)肺氣虛小鼠血清中白細(xì)胞介素4（IL-4）、干擾素-γ（INF-γ）水平的影響，探討細(xì)胞因子Th1/Th2失衡與肺氣虛型哮喘之間的關(guān)系，旨在闡釋益氣固本膠囊作用機(jī)理。

1　資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實(shí)驗(yàn)藥物益氣固本膠囊由黃芪、玉竹、五味子、牡蠣、補(bǔ)骨脂、女貞子、太子參等組成，用時(shí)配成0.55 g/kg、1.1 g/kg、2.2 g/kg的水溶液。玉屏風(fēng)散顆粒，用時(shí)配成5.8 g/kg的水溶液。

1.1.2動(dòng)物及造模昆明種小鼠96只，雌雄各半，體重20～22 g，隨機(jī)分為6組。正常（對(duì)照）組、肺氣虛模型組、益氣固本膠囊低劑量組、中劑量組、高劑量組(簡(jiǎn)稱YQGBD、YQGBZ、YQGBG）、玉屏風(fēng)散顆粒組(簡(jiǎn)稱YPFKL)，每組16只。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，除正常組，其余5組，采用改良煙熏法復(fù)制肺氣虛證小鼠模型，造模方法參照前期實(shí)驗(yàn)［3］。從第8天開(kāi)始，正常組、模型組給予蒸餾水20 m1/kg，日1次灌胃；益氣固本膠囊低劑量組、中劑量組、高劑量組分別給予益氣固本膠囊0.55 g/kg、1.1 g/kg、2.2 g/kg，玉屏風(fēng)散顆粒組給予玉屏風(fēng)顆粒5.8 g/kg，20 m1/kg日1次灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)共6周。

1.2取樣方法末次給藥結(jié)束后，分別摘眼球取血，采用ESILA法檢測(cè)各組小鼠血清中IL-4、INF-γ的含量水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間數(shù)據(jù)比較采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS（17.0），進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1小鼠血清IL-4的變化末次給藥結(jié)束后，肺氣虛模型組小鼠血清IL-4含量和正常組比較顯著升高（P＜0.01）；益氣固本膠囊高、中劑量組、玉屏風(fēng)顆粒組和模型組比較血清IL-4含量明顯下降（P＜0.05）；益氣固本膠囊低劑量組小鼠血清IL-4含量和模型組比較無(wú)差異，但有下降的趨勢(shì)。見(jiàn)表1。

2.2小鼠血清IN F-γ的變化實(shí)驗(yàn)第6周末，肺氣虛模型組小鼠血清γ-INF含量明顯降低（P＜0.001）；益氣固本膠囊高劑量組和模型組比較血清γ-INF含量顯著升高（P＜0.01）；益氣固本膠囊中劑量組、玉屏風(fēng)顆粒組和模型組比較血清γ-INF含量明顯升高（P＜0.05）；益氣固本膠囊低劑量組小鼠血清INF-γ含量和模型組比較無(wú)差異，但有升高的趨勢(shì)。見(jiàn)表1。

表1　小鼠血清中IL-4、IN F-γ含量的變化　（±s，n=1 6）

表1　小鼠血清中IL-4、IN F-γ含量的變化?。ā纒，n=1 6）

注：與正常組比較△P<0.0 5，△△P<0.0 1，△△△P<0.0 0 1；與模型組比較：▲P<0.0 5，▲▲P<0.0 1，▲▲▲P<0.0 0 1

3　討論

支氣管哮喘是由多種細(xì)胞如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾患［4］。Th1/Th2失衡是哮喘發(fā)病的重要機(jī)制［2］。Th細(xì)胞可分為Th1和Th2兩個(gè)亞群。Th1和Th2之間具有相互調(diào)節(jié)，相互制約的作用，是維持機(jī)體正常的細(xì)胞免疫和體液免疫的基礎(chǔ)。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ等，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、 IL-5等細(xì)胞因子。IL-4是Th2細(xì)胞產(chǎn)生的特征性細(xì)胞因子之一，能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖、活化和抗體類別轉(zhuǎn)換，同時(shí)可抑制Th1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，更為重要的是IL-4是使CD4細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)門h2細(xì)胞最重要的細(xì)胞因子，Th2細(xì)胞的形成反過(guò)來(lái)又分泌出更多的IL-4，因此IL-4是變態(tài)反應(yīng)性疾病發(fā)病中的關(guān)鍵性細(xì)胞因子［5］。IFN-γ主要是參與免疫調(diào)節(jié)，是促進(jìn)CD4+細(xì)胞轉(zhuǎn)變成Th1細(xì)胞的主要細(xì)胞因子。IL-4、IFN-γ在Th1、Th2細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中起重要作用。國(guó)內(nèi)已有文獻(xiàn)報(bào)道哮喘患者存在Th1和Th2細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)紊亂，在哮喘發(fā)作期患者血清IL-4增高，IFN-γ降低［6］。因此，提高對(duì)細(xì)胞因子的免疫調(diào)節(jié)療法的認(rèn)識(shí)，有效地調(diào)節(jié)IL-4/IFN-γ平衡，使Th細(xì)胞分化朝著更有利于機(jī)體狀況的方向發(fā)展，可緩解哮喘癥狀，并為臨床治療及發(fā)揮預(yù)防作用提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)［7］。

益氣固本膠囊是根據(jù)國(guó)家名醫(yī)王烈教授驗(yàn)方研發(fā)的長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑，用于哮喘病緩解期的治療，具有滋陰補(bǔ)氣，益脾肺腎之功。經(jīng)過(guò)多年臨床實(shí)踐證明，對(duì)減少小兒哮喘疾病復(fù)發(fā)有一定的療效［8-9］。本研究結(jié)果提示，益氣固本膠囊可提高肺氣虛哮喘小鼠血清中INF-γ水平，降低血清IL-4水平，有效改善哮喘機(jī)體的免疫抑制狀態(tài)，修復(fù)Th1/Th2細(xì)胞失衡，促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化，抑制Th2細(xì)胞的分化，以達(dá)到控制氣道炎癥的效果。本研究還發(fā)現(xiàn)，益氣固本膠囊高劑量組較益氣固本膠囊低劑量、中劑量及玉屏風(fēng)顆粒組血清中INF-γ水平增高顯著，各組之間有差異，提示劑量與療效具有相關(guān)性。

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Effect of Yiqi Guben Capsule on Level of lL-4 and INF-Levels in Serum of Mice with Lung Qi Deficiency

DING Lizhong1， SUN Liping1*， WANG Yanbo2， SUN Yingying1， CHEN Si3
(1. Department of Pediatrics， The Affi1iated Hospita1 of Changchun University of Chinese Medicine， Changchun 130021， China；
2. Modern Education Center， Changchun University of Chinese Medicine， Changchun 130117， China；
3. Graduate Schoo1， Changchun University of Chinese Medicine， Changchun 130117， China)

Objective To discuss the Yiqi Guben caPsu1e in regu1ating the 1eve1 of IL-4、INF-γ in serum of mice with 1ung-qi deficiency mice，and to exP1ore its mechanism.Methods 96 mice(ma1e and fema1e)were random1y divided into norma1 grouP，mode1 grouP，Yiqi Guben caPsu1e high dose grouP，midd1e dose grouP and 1ow dose grouP，YuPingfeng Powder grouPs.APart from the norma1 grouP，the mice in the rest of each grouP were made into 1ung-qi deficiency syndrome mode1s by adoPting imProved smoked method，remova1ed the eyeba11 for take b1ood，ESILA method was taken to assay the 1eve1s of IL-4 and INF-γ in serum of mice in each grouP.Results The 1eve1 of INF-γ in Yiqi Guben caPsu1e high-dose grouP，midd1e dose-grouP and YuPingfeng Powder grouP were significant1y higher than that of the mode1 grouP(P＜0.01，P＜0.05)，the 1eve1 of IL-4 were significant1y 1ower than that of the mode1 grouP(P＜0.05).Conclusion Yiqi Guben caPsu1e can adjust the 1eve1 of IL-4 and INF-γ in serum of mice with 1ung-qi deficiency.

Yiqi Guben caPsu1e；1ung-qi deficiency；IL-4；INF-γ；anima1 exPeriment

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.03.063

1672-2779（2016）-03-0134-02

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（No：81473729，30973773）；吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No：200905125）

slpwzt7063@163.com

（本文編輯：李海燕本文校對(duì)：李春娟2015-11-16）