杜海燕，韓俊偉（.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

一例豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕1，韓俊偉2
（1.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）為主要病原引起仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥，以體質(zhì)下降、呼吸困難、腹瀉、消瘦等為主要特征，可導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重免疫抑制，從而繼發(fā)多種病原繼發(fā)感染，是當(dāng)前中國豬群感染最普遍的傳染病之一。對某養(yǎng)豬戶送檢仔豬進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，結(jié)合臨床癥狀確診為豬圓環(huán)病毒2型繼發(fā)大腸桿菌混合感染。

豬圓環(huán)病毒2型；大腸桿菌；混合感染

1　發(fā)病情況

該養(yǎng)殖戶共飼養(yǎng)生豬300余頭，品種為大約克，2016年1月份，豬群相繼發(fā)病，先后死亡60頭斷奶仔豬，死亡率達(dá)到20%（60/300）。目前仍有12頭豬在發(fā)病，病豬體溫升高到40.5～40.7 ℃，精神萎頓，眼瞼水腫，喜睡，耳部、胸腹部、臀部及四肢等均有暗紅色或紫紅色出血斑；咳嗽、打噴嚏；部分仔豬腹瀉，呼吸困難，后驅(qū)無力，瀕死前臥地不起，表現(xiàn)發(fā)抖等癥狀。豬群曾接種豬瘟和口蹄疫疫苗。

2　解剖病變

剖檢發(fā)現(xiàn)皮下有出血，全身淋巴結(jié)腫大，切面呈大理石樣病變；腸系膜出血，胃腸脹氣；肝臟腫大質(zhì)脆；脾臟有少量出血點(diǎn)，邊緣呈齒狀丘疹；腎臟腫大有針尖樣出血點(diǎn)。肺有出血點(diǎn)且局部肉變；心臟內(nèi)膜少許出血。

3　實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1細(xì)菌學(xué)診斷

3.1.1細(xì)菌分離培養(yǎng)

剖檢時(shí)分別用接種環(huán)無菌條件下取兩頭死亡豬的肝、脾、腎及淋巴結(jié)接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基，置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察在血液瓊脂培養(yǎng)基上長出乳白色、圓形、邊緣整齊、凸起、半透明、β溶血菌落，經(jīng)染色鏡檢為革蘭氏陰性桿菌；后接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察在麥康凱培養(yǎng)基上長出粉紅色菌落，經(jīng)生化試驗(yàn)初步鑒定為大腸桿菌。

3.1.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

取上述血液瓊脂培養(yǎng)基上所長細(xì)菌的純培養(yǎng)物，選擇常用的抗菌素進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，結(jié)果見表1：

藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由藥敏試驗(yàn)結(jié)果可知，在與其他幾種抗菌藥物比較后，發(fā)現(xiàn)分離出的大腸桿菌對大多數(shù)藥物有耐藥性，頭孢噻呋鈉對該致病菌抑制效果較為敏感，舒坦西林和重瀉一針靈等藥物相對也敏感，可以選擇頭孢噻呋鈉、舒坦西林和重瀉一針進(jìn)行相應(yīng)治療。

3.2PCV2病原核酸檢測

3.2.1DNA提取 分別取病豬的淋巴結(jié)、脾臟組織研磨，反復(fù)凍融3次，8 000 rpm離心10 min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.2.2PCR擴(kuò)增 針對PCV2的特異性基因，合成一對引物：P1：AAGGGCTGGGTTATG GTATG/P2：CGCTGGAGAAGGAAAAATGG，預(yù)期擴(kuò)增特異性核苷酸片段大小為353 bp，PCR反應(yīng)體系：DNA模板5 μg，PCR Buffer 5 μl，MgCl23 μl，Taq酶1 μl，上下游引物各1 μl；PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃ 30 s，58 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)后，72 ℃延伸7 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果見圖1。

圖1　DL2000分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；-：陰性對照；

由圖1可知，從送檢樣本的淋巴結(jié)和脾臟提取DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，檢出豬圓環(huán)病毒2型病毒352 bp特異性核酸片段，說明送檢豬感染豬圓環(huán)病毒2型，并且推斷豬群存在豬圓環(huán)病毒2型的感染。

4　防治建議

根據(jù)該養(yǎng)殖場豬群發(fā)病情況、剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)及分子生物學(xué)診斷可以確定該豬場發(fā)病主要是由豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌病混合感染。豬圓環(huán)病毒2型在豬群中普遍存在，因侵害免疫系統(tǒng)使機(jī)體的免疫抑制，進(jìn)而導(dǎo)致其他病原的繼發(fā)感染，促使死亡率升高。為防止病情進(jìn)一步蔓延，應(yīng)隔離病豬，將病死豬深埋無害化處理。豬群發(fā)病常常是由多種病原共同作用造成發(fā)病率和死亡率升高，本次發(fā)病為豬圓環(huán)病毒感染使機(jī)體抵抗力下降，另外加上冬季寒潮不斷侵襲，保暖措施不當(dāng)造成仔豬應(yīng)激反應(yīng)，大腸桿菌趁機(jī)侵入機(jī)體，使病情更為嚴(yán)重。

建議對豬群進(jìn)行緊急免疫接種，定期進(jìn)行免疫效果監(jiān)測，確保免疫效果。對于豬群出現(xiàn)圓環(huán)病毒2型感染目前沒有治療效果確切的藥物，可行的方法是服用抗生素減少細(xì)菌繼發(fā)感染，藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對大多數(shù)藥物的耐藥性較強(qiáng)，僅對重瀉一針靈、頭孢噻呋鈉和舒坦西林中度敏感，可以聯(lián)合或輪換選用敏感性藥物進(jìn)行治療，防止濫用藥造成耐藥菌株的產(chǎn)生。加強(qiáng)仔豬的飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生，強(qiáng)化預(yù)防消毒，定期對免疫抗體監(jiān)測，改善豬舍飼養(yǎng)條件，減少豬群應(yīng)激，采用全進(jìn)全出飼養(yǎng)制度，引進(jìn)豬只后做好隔離觀察，對養(yǎng)殖場顯得尤為重要。

（編輯：晏兵兵）

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1006-799X（2016）12-0042-02

杜海燕（1983-），女，河南獲嘉人，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病診斷與防治工作。