黃志盛，陳業(yè)倩，劉敏健

1.廣州市番禺區(qū)沙灣人民醫(yī)院消化科，廣東廣州 511483；2.廣州市番禺區(qū)市橋醫(yī)院內科，廣東廣州 511400；3.廣州市番禺區(qū)何賢紀念醫(yī)院手術室，廣東廣州 511400

*論著*

胸腺素β4在結腸息肉和結腸癌中表達及其意義

黃志盛1，陳業(yè)倩2，劉敏健3

1.廣州市番禺區(qū)沙灣人民醫(yī)院消化科，廣東廣州 511483；2.廣州市番禺區(qū)市橋醫(yī)院內科，廣東廣州 511400；3.廣州市番禺區(qū)何賢紀念醫(yī)院手術室，廣東廣州 511400

目的 探討胸腺素β4在結腸息肉和結腸癌中表達及其意義。方法 選取2015年7月—2016年7月在該院治療的結腸息肉和結腸癌患者67例，根據患病類型分為結腸息肉組28例，結腸癌組28例，結腸息肉+結腸癌組11例。分別取標本（手術切除或息肉摘除）和距切除標本15 cm以上正常腸粘膜組織，提取其mRNA行RT-PCR，通過凝膠掃描儀進行各電泳條帶和光量子強度分析，測定各標本中胸腺素β4的相對含量；抽取患者血清，用胸腺素β4酶聯免疫吸附試劑盒檢測患者血清中胸腺素β4在息肉和腸癌切除術前、術后1月及術后 6個月的表達情況。 結果 胸腺素β4的mRNA表達 腸息肉、腸癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表達；且相對其正常腸組織中含量[結腸息肉組（0.41±0.17）、結腸癌組（0.50±0.14）]，其病理標本中mRNA均有高表達[結腸息肉組（0.59±0.22）、結腸癌組（0.75±0.23）]，P＜0.05，差異有統計學意義；結腸息肉組切除術前、術后1個月及術后6個月，胸腺素β4的表達，P＞0.05，差異無統計學意義；結腸癌組和結腸息肉+結腸癌組切除術前、術后1個月血清胸腺素β4的表達有顯著變化，P＜0.05，差異有統計學意義，而術前、術后6月則無顯著變化，P＞0.05，差異無統計學意義。 結論 胸腺素 β4在息肉及腸組織中均有高表達，可作為觀察腸癌療效的參考指標。

胸腺素β4；結腸息肉；結腸癌

胸腺素β4分子量約5KD，含有43個氨基酸，大部分沒有折疊結構，能與多種分子結合，因此，其功能具有多樣性[1]。國外學者Kaur等[2]研究發(fā)現，胸腺素β4與炎癥反應、創(chuàng)傷愈合、腫瘤轉移、血管再生、細胞調亡等密切相關; Sonia等學者[3]更證實胸腺素β4在結腸息肉和結腸癌中均有表達。目前國內對胸腺素β4在結腸息肉和結腸癌中表達的研究極少，該文選取2015年7月—2016年7月在該院治療的結腸息肉和結腸癌患者67例，用Trizol法，分別提取腸息肉、腸癌患者病變組織及距該組織15 cm以上正常腸組織，通過RT-PCR技術及分光光度計測定各標本的mRNA相對含量；采用胸腺素β4酶聯免疫吸附試劑盒（K9520,Immunodiagnostik AG，Bensheim，German)，檢測結腸息肉和結腸癌患者切除術前、術后1個月及術后6個月血清中的胸腺素β4的表達，探討其表達意義。

1 資料與方法

1.1 入選標準

選取2015年7月—2016年7月在該院治療的結腸息肉和結腸癌患者。年齡＞18歲，病理診斷為炎性息肉、增生性息肉、腺瘤及其伴輕、中度非典型增生歸為結腸息肉，病理診斷為腺癌、黏液癌、未分化癌和腺瘤伴重度非典型歸為結腸癌。

1.2 排除標準

①年齡＜18歲的患者；②除結腸息肉和結腸癌外，尚患有其它腫瘤、創(chuàng)傷、炎癥等疾病的患者；③隨訪失聯的患者。

1.3 分組

①結腸息肉組28例，其中男15例，女13例，年齡22～84歲；②結腸癌組28例，其中男17例，女11例，年齡42～74歲；③結腸息肉+結腸癌組11例，其中男6例，女5例，年齡41～82歲。3組患者一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.4 標本采集

手術切除或息肉摘除標本和正常腸組織標本置于-80℃冰箱保存。

1.5 血樣采集

入選患者均于清晨采取空腹靜脈血3 mL，于2 h內以3 000 r/mim離心15 min，分離血清，置于-80℃冰箱保存待測。

1.6 檢測方法

1.6.1 mRNA的提取 切除或摘除的各標本放入研缽研磨，按照Trizol試劑盒的方法，取標本加入1 mL的Trizol，室溫下孵育5 min以使細胞蛋白充分裂解，后將裂解液移至1.5 mL EP管中；再每個EP管中加入0.2 mL氯仿，蓋緊管蓋，用力振蕩10～15 s，使氯仿與Trizol充分融合，再在室溫下反應5 min，隨后以12 000 g速度下離心15 min，將上層水相移入新的EP管中，加入0.5 mL的異丙醇，在充分振蕩后室溫下孵育10 min，再次在4℃環(huán)境下以12 000 g速度離心15 min，取出EP管，棄去上清，留下管的白色沉淀，再加入75%乙醇至EP管中，每管加量700 l，用移液器小心將沉淀吹起，而后在4℃環(huán)境下以7 500 g速度離心5 min，離心后棄去上清，將EP管放置在室溫下干燥約15 min，最后加入適量的DEPC水[4-5]。

1.6.2 引物 胸腺素 β4：5’-ACAAACCCGATATGGCTGAG-3’；內對照GAPDH：5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’[6]。

1.6.3 逆轉錄合成cDNA、PCR擴增及相對定量分析 提取總RNA后，經凝膠電泳鑒定其質量，分光光度計測定RNA含量；用TAKAPa RT逆轉錄試劑盒將RNA逆轉錄成cDNA，用7 500 Fast PCR儀進行擴增反應，取PCR產物在普通瓊脂糖凝膠電泳后，溴化乙啶染色，通過凝膠掃描儀進行DNA電泳條帶和光量子強度分析，將胸腺素β4與GAPDH比值作為胸腺素β4表達水平的參數，對胸腺素β4的PCR產物進行相對定量。

1.6.4 血清中胸腺素β4濃度測定 采用胸腺素β4酶聯免疫吸附試劑盒（K9520,Immunodiagnostik AG，Bensheim，German)進行檢測。

1.7 統計方法

用SPSS 17.0統計學軟件進行處理，胸腺素β4相對表達量用（±s）表示，兩組之間的差異采用t檢驗，計量資料以中位數和四分位數間距表示，組內資料比較用Wilcoxon檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

腸息肉、腸癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表達；且相對其正常腸組織中含量[腸息肉組（0.41±0.17）、腸癌組（0.50±0.14），其病理標本中mRNA均有高表達[腸息肉組（0.59±0.22）]、腸癌組（0.75±0.23）]，P＜0.05，差異有統計學意義，如表1。

表1 腸息肉組及腸癌組中患者胸腺素β4的mRNA含量比較（±s）

表1 腸息肉組及腸癌組中患者胸腺素β4的mRNA含量比較（±s）

組別 病理標本 距病理標本15 cm以上正常腸組織 t P腸息肉組腸癌組0.59±0.22 0.75±0.23 0.41±0.17 0.50±0.14 4.38 6.79＜0.05＜0.05

息肉組切除術前、術后1個月及術后6個月，胸腺素β4的表達無顯著變化，差異無統計學意義（P＞0.05）；腸癌和息肉腸癌組切除術前、術后1個月胸腺素β4的表達有顯著變化（P＜0.05），而術前、術后6個月則無顯著變化，差異無統計學意義（P＞0.05），如表2。

表2 息肉組、腸癌組和息肉腸癌組切除術前、術后1個月及術后6個月患者血清胸腺素β4的比較

3 討論

隨著人們生活習慣的改變，腸癌的發(fā)生率及死亡率每年呈現遞增的趨勢，據估計，2014年美國預計將新增136830例，因腸癌死亡50370例，位居惡性腫瘤死亡人數的第3位，成為第3大最常見的惡性腫瘤[6]，因此預防腸癌的發(fā)生、發(fā)展刻不容緩。大腸癌的病因尚未完全清楚，一般認為，大部分的大腸癌起源于腸息肉和腺瘤[7-8],因此預防大腸癌的發(fā)生發(fā)展，應從腸息肉和腺瘤開始。

在該實驗中，胸腺素β4的mRNA表達 腸息肉、腸癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表達；且相對其正常腸組織中含量，其病理標本中mRNA均有高表達，差異有統計學意義，P＜0.05，提示胸腺素β4的mRNA高表達與腸息肉和腸癌的發(fā)作相關；結腸息肉組切除術前、術后1個月及術后6個月，胸腺素β4的表達無顯著變化，P＞0.05差異無統計學意義，考慮息肉較小，其切除對胸腺素β4的表達未發(fā)作顯著變化；結腸癌組和結腸息肉+結腸癌組切除術前、術后1個月血清胸腺素β4的表達有顯著變化，P＜0.05，差異有統計學意義，而術前、術后6個月則差異無統計學意義（P＞0.05），考慮腸癌病灶切除1個月后，其胸腺素β4的mRNA表達減少，以致血清中胸腺素β4的表達也相應減少，切除6個月后，部分患者癌癥復發(fā)，以致其血清中胸腺素β4的表達也相應增大，由于病例較少，展望以后通過更多病例說明這一點。周瑞等[9]、馮君蘭等[10]研究為該研究提供了理論依據。

綜上所述，胸腺素β4在息肉及腸組織中均有高表達，可作為觀察腸癌療效的參考指標。

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[1]胡晨姣.胸腺素β4對重癥胰腺炎大鼠急性肝臟損傷的保護作用[J].現代實用醫(yī)學，2015，27（5）：585-586.

[2]Kaur H,Mutus B,Platelet function and thymosin beta4[J].Biol Chem，2012，393（7）:595-598.

[3]Sonia,Nemolato,Tiziana Cabras,Angelo Restivo,et al.Thymosin ss4 expression in colorectal polyps and adenomas. Clinics，2013，68(9):1220-1224.

[4]田媛，王玉冰，譚莉莉，等.Tβ4對非酒精性脂肪肝患者肝臟功能的評估價值[J].胃腸病學和肝病學雜志，2014，23（4）：432-434.

[5]Rebecca Siegel,Carol DeSantis.Ahmedin Jemal Colorectal Cancer Statistics[J].CA Caner J Clin，2014（64）:104-117.

[6]Nagengast FM.Carcinogenesis of colorectal cancer[J].Vet Q，1998，20(3):95-96.

[7]李鵬.長鏈非編碼RNA在人結腸癌中的異常表達[D].北京：中國人民解放軍總醫(yī)院，2015.

[8]陳瓊，劉志才，程蘭平，等．2003-2007年中國結直腸癌發(fā)病與死亡分析[J].中國腫瘤，2012，21(3):179-182.

[9]周瑞，袁宏銀，熊斌.大腸癌組織中胸腺素β4基因表達及其臨床意義[J].腫瘤防治研究，2005，32（9）:545-548.

[10]馮君蘭，汪昱.血液 miRNA檢測在結直腸癌診斷、預后及化療療效評估中的應用進展[J].山東醫(yī)藥，2015（11）: 98-100.

Expression and Significance of Thymosin β4 in Colon Polyps and Colon Cancer

HUANG Zhi-sheng1，CHEN Ye-qian2，LIU Min-jian3
1.Digestive Department of Guangzhou City，People's Hospital of Panyu District Bay，Guangzhou，Guangdong Province，511483 China；2.Department of Medicine，Guangzhou Panyu City Bridge Hospital，Guangzhou，Guangdong Province，511400 China；3.Operation Room,Panyu District Memorial Hospital,Guangzhou，Guangzhou，Guangdong Province,511400 China

Objective To investigate the expression and significance of thymosin β4 in colon polyps and colon cancer.Methods 67 cases of colon polyps and colon cancer patients treated in our hospital from July 2015 to July 2016 were selected.According to the type of disease,28 cases were divided into cases of colonic polyps,28 cases of colon cancer group,11 cases of colon polyps and colon cancer group.The specimens were (resection or polyp)and from resected specimens of 15 cm above the normal intestinal mucosa,extracted the mRNA useing RT-PCR analysis the electrophoretic bands and photon intensity through the gel scanner,the relative content of each sample in the determination of Serum thymosin β4.The expression of thymosin β4 in patients with polyps and colorectal cancer before、after 1 month and after 6 months of operation was detected by using the serum of patients with thymus peptide and 4 enzyme linked immunosorbent assay.Results mRNA expression of thymosin β4 of intestinal polyps,colorectal cancer patients,all have the expression of the mRNA of thymosin β4,The expression of mRNA in the pathological specimen was higher[colonic polyps（0.59±0.22）、colon cancer group（0.75±0.23)]than those of normal intestinal tissue content[(colonic polyps（0.41±0.17）、colon cancer group（0.50±0.14 ）],P＜0.05,the difference was statistically significant;the difference between the expression of thymosin β4 in before、after 1months and after 6 months in the colonic polyps was no statistically significant;the expression of thymosin β4 before the operation in the colon cancer group and colon polyps and colon cancer group was higher than those of after the operation 1 month,P＞0.05,the difference was statistically significant;difference between the expression of thymosin β4 before the operation and after the operation 6 months was no statistically significant,P＞0.05.Conclusion Thymosin β4 was highly expressed in the polyp and intestinal tissue,and serum thymic peptide 4 could be used as a reference index for the observation of the curative effect of colorectal cancer.

Thymosin β4;Colonic polyp;Colon cancer

R735.34

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.01

2016-10-15；

2016-11-12

廣州市番禺區(qū)科技工業(yè)商務和信息化局，2015年科技計劃醫(yī)藥衛(wèi)生預立項項目（2015-Z03-45）。

黃志盛（1979.10-），男，廣東番禺人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：胸腺素β4在腸息肉和腸癌的表達意義。