楊讓賢　顏伯鈞　解大佑　付現(xiàn)春　楊　陽　周　青

云南中醫(yī)學(xué)院(昆明650500)

?

仙苓寧嗽湯對咳嗽的作用機(jī)理*

楊讓賢顏伯鈞解大佑付現(xiàn)春楊陽周青△

云南中醫(yī)學(xué)院(昆明650500)

目的：通過動物實(shí)驗(yàn)觀察仙苓寧嗽湯的安全性、鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎癥作用，以及加減仙鶴草對臨床咳嗽治療的影響。方法：分別采用急性毒性實(shí)驗(yàn)，以小鼠存活狀況作為評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。小鼠濃氨水引咳法，以咳嗽潛伏期(從給氨水后至發(fā)生咳嗽的時(shí)間)、2min內(nèi)咳嗽次數(shù)作為評價(jià)指標(biāo)；小鼠耳廓腫脹法，用二甲苯制作抗炎模型，以耳廓腫脹程度作為評價(jià)指標(biāo)；小鼠酚紅祛痰實(shí)驗(yàn)，以小鼠氣管分泌物吸光值作為觀測標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：仙苓寧嗽湯浸膏對小鼠的急性毒性較低，仙苓寧嗽湯高、低劑量能延長小鼠咳嗽潛伏期，減少2min內(nèi)咳嗽次數(shù)；仙苓寧嗽湯去仙鶴草高、低劑量及高劑量仙鶴草能延長小鼠咳嗽潛伏期，減少2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。結(jié)論：仙苓寧嗽湯高、低劑量及仙鶴草高劑量具有止咳作用，可能不具抗炎作用。

主題詞咳嗽實(shí)驗(yàn)，動物@仙苓寧嗽湯

仙苓寧嗽湯是云南省內(nèi)科病專家周青教授經(jīng)過多年的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出來的經(jīng)驗(yàn)方，由《醫(yī)宗金鑒》所載之溫膽湯化裁而成，功效為清熱化痰，下氣止咳[1-2]。全方由柴胡、黃芩、法夏、陳皮、枳實(shí)、茯苓、蟬蛻、仙鶴草、僵蠶、生姜、川貝、甘草等中藥組成。經(jīng)過教授門診廣泛運(yùn)用和初步臨床觀察，本方具有較為顯著的療效。臨床中又發(fā)現(xiàn)該方的仙鶴草具有一定止咳效果。為進(jìn)一步客觀評價(jià)臨床療效和使用安全性，進(jìn)行此次探索研究,為仙苓寧嗽湯及仙鶴草單方下一步的開發(fā)利用，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料1.1動物健康昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半。昆明醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供[合格證號：SCXK(川)2008-24，生產(chǎn)批號：Dossy-2014-08]。

1.2藥品及試劑仙苓寧嗽湯(柴胡、黃芩、法半夏、陳皮、枳實(shí)、茯苓、蟬蛻、仙鶴草、僵蠶、生姜、川貝、甘草組成)，由云南省中醫(yī)醫(yī)院配制而成。碳酸氫鈉(批號：100424)；酚紅(批號：100228)；氨水(批號：050109)；二甲苯(批號：2009-2-3)；磷酸可待因片(國藥準(zhǔn)字H1120673)。

1.3儀器AB204-S電子分析天平；YLS-8A多功能誘咳引喘儀；LG10-2.4A高速離心機(jī)；M200PRO酶標(biāo)儀。

2結(jié)果 2.1急性毒性試驗(yàn)小鼠40只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12h，以0.4ml/10g給藥，給藥后給予食物及水，并觀察小鼠狀況。給藥組耐受量為251.2g生藥/kg ，存活動物一般狀況良好，飲食正常，外觀、皮毛、行為、呼吸均正常，鼻、眼、口腔無異常分泌，未見明顯異常反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠解剖，肉眼觀察，主要臟器未見異常。可以推論仙苓寧嗽湯浸膏對小鼠的急性毒性較低,結(jié)果見表1。

表1　仙苓寧嗽湯浸膏急性毒性試驗(yàn)動物死亡情況 (n=10)

2.2鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)分別觀察仙苓寧嗽湯原方、仙苓寧嗽湯去仙鶴草、仙鶴草單味藥對小鼠氨水誘咳治療效果。取篩選過小鼠160只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12h，隨機(jī)分為仙苓寧嗽湯原方、仙苓寧嗽湯去仙鶴草、仙鶴草單味藥組、空白組、陽性對照藥組(可待因按0.2ml/10g灌胃給予0.3%)，每組20只。按劑量灌胃給藥，連續(xù)給藥3d，末次給藥后30min時(shí)將小鼠置于誘咳引喘儀內(nèi)，以小鼠腹部收縮，同時(shí)張大嘴呼吸或發(fā)出咳嗽聲為指標(biāo)。觀察并記錄各組小鼠引咳潛伏期(從給氨水后至發(fā)生咳嗽的時(shí)間)，以及小鼠2min內(nèi)咳嗽次數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。仙苓寧嗽湯高、低劑量組有顯著延長濃氨水引起的咳嗽潛伏期，降低2min內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)，與空白對照組比較有非常顯著差異(P<0.05)。仙苓寧嗽湯去仙鶴草高劑量組與仙鶴草高劑量組(生藥濃度與原方相同)有顯著延長濃氨水引起的咳嗽潛伏期，降低2min內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)，雖效果不如完整的仙苓寧嗽湯，但與空白對照組比較有非常顯著差異(P<0.05)。鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)提示仙苓寧嗽湯高、低劑量、仙苓寧嗽湯去仙鶴草高劑量、仙鶴草高、低劑量均有明顯止咳效果(P<0.01)。

2.3抗急性炎癥實(shí)驗(yàn)將小鼠隨機(jī)分為5組，分別為：模型組、陽性藥組(地塞米松10ml)、仙芩寧嗽湯高劑量組(5.715 g )、中劑量組(1.905 g )、低劑量組(0.635 g )，20只/組。除陽性藥腹腔注射給藥外，其余各組均灌胃給予對應(yīng)受試物，模型組給予等體積吐溫-80的蒸餾水，1次/d，連續(xù)5d。末次給藥30 min后，將二甲苯50μl用微量移液器均勻涂布在小鼠右耳內(nèi)外兩側(cè)，致炎30min后處死小鼠，沿耳廓基線剪掉小鼠雙耳，分別在雙耳的同一部位用直徑為9mm的耳腫打孔器打下圓片。計(jì)算左右耳片重量差值，計(jì)算腫脹度及腫脹抑制率。結(jié)果顯示：陽性藥組耳廓腫脹度13.50±7.4 mg，腫脹抑制率為18.18%，與空白組比較差異顯著(P<0.01)。

表2　仙苓寧嗽湯浸膏鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)情況 (n=20)

2.4祛痰實(shí)驗(yàn)小鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對照組(腹腔注射蒸餾水)；陽性對照組(腹腔注射鹽酸氨溴索)；仙苓寧嗽湯高劑量組(157g/kg)、仙苓寧嗽湯低劑量組(39.25g/kg)，各組動物每天給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥3d。末次給藥后30min, 各組小鼠腹腔注射7.05mmol/l酚紅溶液0.5ml，注射后30min脫頸椎處死，仰位固定于手術(shù)板上，剪開頸正中皮膚，于喉頭下將頭磨平的9號針頭插入氣管內(nèi)約0.3cm，用絲線結(jié)扎固定后用1ml注射器吸取5% NaHCO3溶液0.5ml，注入氣管灌洗后抽出，重復(fù)灌洗3次，合并灌洗液，作為待測樣品液。以沒有注射酚紅，但操作步驟同上的正常小鼠氣管用NaHCO3溶液灌洗液作空白管來測定各組小鼠氣管灌洗液吸光度[3-5]。僅陽性藥組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，仙苓寧嗽湯高劑量組在數(shù)據(jù)上有些微上升趨勢，但經(jīng)過統(tǒng)計(jì)，仙苓寧嗽湯高、劑量組未出現(xiàn)顯著的祛痰效果。

表3　仙苓寧嗽湯對小鼠酚紅排泌量的影響(n=20)

3討論急毒實(shí)驗(yàn)通過一次灌胃給予小鼠最大劑量、最大給藥體積，觀察仙苓寧嗽湯的急性毒性，記錄小鼠體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)(中毒反應(yīng)的癥狀、嚴(yán)重程度、起始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、是否可逆)。對瀕死及死亡動物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體的解剖，小鼠在觀察期結(jié)束后進(jìn)行大體解剖，肉眼觀察，各主要臟器未見異常。且在最大劑量、最大灌胃體積下小鼠的耐受量是成人的193倍，故而仙苓寧嗽湯在正常服用劑量下毒性較小，較為安全。

小鼠濃氨水引咳實(shí)驗(yàn)采用氨水誘咳，制造小鼠咳嗽模型；實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為陽性組、仙苓寧嗽湯組、仙苓寧嗽湯去仙鶴草組、仙鶴草單味藥組等八個(gè)組，陽性藥為磷酸可待因，屬于中樞性止咳藥，經(jīng)口給藥后，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示：除陽性藥(磷酸可待因)外，仙苓寧嗽湯組的鎮(zhèn)咳效果最好，止咳效果依次為：仙苓寧嗽湯高劑量組>仙苓寧嗽湯低劑量組>仙鶴草高劑量組>仙苓寧嗽湯去仙鶴草低劑量組>仙苓寧嗽湯去仙鶴草高劑量組>仙鶴草低劑量組。實(shí)驗(yàn)中，仙苓寧嗽湯高、低劑量組都能顯著延長咳嗽潛伏期，降低小鼠咳嗽次數(shù)，說明仙苓寧嗽湯具有較好的止咳作用，實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)一個(gè)有趣現(xiàn)象，給予仙苓寧嗽湯的小鼠都發(fā)現(xiàn)食欲增加，體重也明顯增加，是否因“脾為后天之本、主運(yùn)化”，“五臟六腑之咳，皆聚于胃，關(guān)于肺”，具體原因，還有待繼續(xù)發(fā)掘。仙鶴草在實(shí)驗(yàn)中的作用并沒有預(yù)期的突出和顯著，因此除仙鶴草外或許還有其他成分的協(xié)同作用，有待進(jìn)一步探索研究。仙苓寧嗽湯去仙鶴草高、低劑量組與仙鶴草高劑量組都能延長咳嗽潛伏期、降低小鼠咳嗽次數(shù)，但止咳效果不如完整的仙苓寧嗽湯。

通過兩種劑量顯示的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，高、低劑量的仙苓寧嗽湯都沒有發(fā)現(xiàn)明顯的抗炎和祛痰作用，僅小鼠排痰實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：仙苓寧嗽湯高劑量組有一些上升趨勢，說明祛痰作用并非完全無效?，F(xiàn)在有關(guān)仙苓寧嗽湯及仙鶴草的鎮(zhèn)咳作用機(jī)制尚不清楚，相關(guān)文獻(xiàn)也沒有類似記載，因此今后有待于更深入的探討和研究。

[1]梁雪，潘若凡，丁瑩，等.麻杏枇杷顆粒對咳喘模型小鼠的影響[J]中醫(yī)藥信息,2013：30(3)：38-40.

[2]李元靜，尹春暉，張?jiān)铝?，?清金止嗽化痰丸鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用研究[J]中藥藥理與臨床,2010：26(5)：64-66.

[3]楊利娟，王張，孟憲麗，等.基于濃氨水引咳法建立小鼠引咳敏感性剔除標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)研究[J]中藥藥理與臨床,2010：26(5)：64-66.

[4]趙麗蕓,單麗囡,何建茹.射干麻黃湯對哮喘祛痰作用的動物實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)急診，2011，20(8):1269；1298.

[5]張金艷，何萍，李貽奎.苦杏仁、桔梗及二者配伍止咳、祛痰作用的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜質(zhì)，2010，16(18)：173-175.

(收稿2015-11-28；修回2016-02-20)

*云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(201301YH00003)

R441.5

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.070