祁山藥醇提物提取工藝研究

侯志飛　張靜

【摘 要】目的：確定祁山藥醇提物的提取工藝。方法：采用正交法設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以皂苷提取率為指標(biāo)，分別考察乙醇濃度、料液比、回流時(shí)間和回流次數(shù)四個(gè)因素的影響，對(duì)祁山藥醇提物的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果：最佳提取工藝為乙醇濃度80%、加醇量7倍、回流時(shí)間1.5h、回流2次。結(jié)論：對(duì)提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證，工藝穩(wěn)定可行。該工藝條件提取率高且穩(wěn)定，為優(yōu)化祁山藥醇提取工藝提供了科學(xué)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】祁山藥；醇提物；提取工藝；正交試驗(yàn)

山藥原植物為薯蕷科植物薯蕷（Dioscorea opposita Thunb.），系多年生纏繞草質(zhì)藤本，藥用其根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。性味甘、平，歸脾、肺、腎經(jīng)[1]，生用以補(bǔ)腎益精，益脾肺陰為主，補(bǔ)陰之力較強(qiáng)，多用于腎虛遺精、尿頻、肺虛喘咳、陰虛消渴等[2]。山藥在我國分布較為廣泛，根據(jù)產(chǎn)地不同，有懷山藥、淮山藥、祁山藥等。祁山藥是藥都安國“八大祁藥”之一，由于采用了頸尖采集、組培脫毒、品種選育、雜交育種和良種引進(jìn)等生物技術(shù)，有效提高了中藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)，達(dá)到了中藥材有機(jī)產(chǎn)品認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，藥性強(qiáng)、口感好，在中藥材市場上有較強(qiáng)的競爭力。研究祁山藥的提取工藝對(duì)其產(chǎn)業(yè)開發(fā)和擴(kuò)大藥源具有十分重要的意義，有助于提高中藥材的附加值。我國提取山藥的方法主要有微波輔助法、超聲輔助提取法等[3]。本研究從產(chǎn)業(yè)化考慮，以皂苷提取率為指標(biāo)，采用回流提取法，用正交試驗(yàn)優(yōu)選祁山藥醇提物的提取工藝。

1 試藥和儀器

甲醇、乙醇（分析純，天津市康科德科技有限公司），香草醛、冰醋酸、高氯酸（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。祁山藥（購自河北省安國市藥材交易大廳，經(jīng)鑒定為薯蕷科植物薯蕷Dioscorea opposita Thunb.的干燥根莖）；薯蕷皂苷元對(duì)照品（11539-200001，中國藥品生物制品檢定所）；SP-752型紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；JD110-4型電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）；高速粉碎機(jī)。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 制備對(duì)照品溶液

精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品7.5mg，加甲醇定容至25mL得300μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別移取薯蕷皂甙對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、3、4、5、6mL至10mL容量瓶中，加甲醇稀釋得濃度分別為30、60、90、120、150和180μg/mL的系列對(duì)照品溶液。

2.1.2 制備5%香草醛冰醋酸溶液

稱取1.0g香草醛，加20mL冰醋酸溶解。

2.2 薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

分別精密量取系列薯蕷皂甙對(duì)照液各1.0mL， 置于具塞試管內(nèi)，使用氮吹儀揮干溶劑。然后向各試管中分別加5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，混勻后加蓋密塞，在60℃恒溫水浴中反應(yīng)15min，取出后立即以冰水冷卻。冷卻后，分別加入冰醋酸5.0mL，搖勻，靜置10min，用紫外可見分光光度計(jì)測定吸光度，測定波長為544nm。以吸光度A為縱坐標(biāo)，薯蕷皂甙濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：A=0.0025C+0.0244，r=0.9921，在30-180μg/mL呈良好線性。

2.3 醇提工藝研究

2.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中分別以40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、75%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇等為提取溶劑進(jìn)行提取。根據(jù)結(jié)果，以乙醇濃度（A）（70%、80%、95%）、料液比（B）（1：5，1：7，1：9）、回流時(shí)間（C）（0.5，1.0，1.5h）和回流次數(shù)（D）（1，2，3次）為考察因素，按L9（34）正交表設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)安排見表1。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

取干燥的祁山藥粉碎，過篩備用。分別取祁山藥藥材10g，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行回流提取，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收溶劑得皂苷粗品。取皂苷粗品用甲醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取1 mL，置于具塞試管內(nèi)，同2.2項(xiàng)下“使用氮吹儀…測定波長為544nm”操作步驟，測定后記錄吸光度值。通過回歸方程可計(jì)算得出樣品液的質(zhì)量濃度C（μg/mL），根據(jù)藥材取樣量M（g），計(jì)算提取率。以提取率為指標(biāo)，結(jié)果見表1。

表1 提取工藝L9（34）正交實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表

F0.05（2，2）=19.00，F(xiàn)0.01（2，2）=99.00.

2.3.3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

直觀分析及方差分析結(jié)果分別見表1。以提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，可見各因素對(duì)提取工藝影響為：乙醇濃度（A）>回流時(shí)間（C）>料液比（B）>回流次數(shù)（D），且A因素有顯著影響，最佳提取工藝為乙醇濃度為80%，加7倍醇，回流1.5h，回流3次。由于回流2次與回流3次差異不到，考慮到節(jié)約能源和時(shí)間、提高提取效率等方面，確定最佳提取工藝乙醇濃度為80%、加7倍醇、回流1.5h、回流2次。

2.3.4 工藝驗(yàn)證

采用上述提取工藝，制備樣品液，進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)，得到山藥皂苷平均提取率為0.1906%，表明提取率比較穩(wěn)定，說明確定的最佳工藝是合理的。

3 小結(jié)和討論

3.1 對(duì)祁山藥水提物我們另做了工藝考察。本研究考察的是醇提工藝，若選用低濃度乙醇一些親水性物質(zhì)會(huì)影響皂苷提取率，為提高醇溶成分的提取率，因此正交試驗(yàn)中選擇70%、80%、95%的乙醇進(jìn)行考察。

3.2 本研究所建立的以80%乙醇為溶劑的醇提法可較好地提取藥材的有效成分，更有助于藥效的充分發(fā)揮。

3.3 在實(shí)際生產(chǎn)中，可綜合考慮節(jié)約能源、時(shí)間等因素，來確定回流時(shí)間和次數(shù)。

3.4 本研究所建立的提取方法操作簡便，成本較低，易于生產(chǎn)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].一部，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：28.

[2]中藥名稱與應(yīng)用手冊(cè)[M].河北省食品藥品監(jiān)督管理局教育培訓(xùn)中心，2014.

[3]李敏.山藥活性成分提取技術(shù)及藥理功能的研究進(jìn)展[J].2013，44（7）：1184-1189.