不同PCR方法對(duì)豬偽狂犬病原檢出率的比較

陳光麗　河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心　453003

不同PCR方法對(duì)豬偽狂犬病原檢出率的比較

陳光麗河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心453003

豬偽狂犬病是影響豬群健康的重要疾病，在豬群中的發(fā)病率很高。該病可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎和公豬的繁殖障礙，仔豬神經(jīng)癥狀及高死亡率。偽狂犬病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷有普通PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR及ELISA等。本文就普通PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR在偽狂犬病原檢測(cè)中的檢出率做一比較論述。

1　材料與方法

（1）偽狂犬疑似病料。豫北某豬場(chǎng)11月初產(chǎn)房的多群2～3日齡仔豬出現(xiàn)腹瀉癥狀，病仔豬皮膚發(fā)紅，體溫升高，精神不振，嘔吐，逐漸消瘦，部分病豬有神經(jīng)癥狀，出現(xiàn)發(fā)抖，后肢走路不穩(wěn)，共濟(jì)失調(diào)。使用抗生素治療無效，病死率高達(dá)100％。采集病豬不同臟器、腦組織和腸內(nèi)容物等，共10頭份進(jìn)行檢測(cè)。

（2）主要試劑。偽狂犬病毒PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；偽狂犬病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自廣州維伯鑫生物科技有限公司。

（3）方法。對(duì)病料的處理以及PCR擴(kuò)增，參照試劑盒說明書進(jìn)行。

2　結(jié)果

應(yīng)用北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司偽狂犬病毒PCR檢測(cè)試劑盒，對(duì)采集的病料進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果見圖1。

應(yīng)用廣州維伯鑫生物科技有限公司偽狂犬病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒，對(duì)采集病料進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果見圖2。

3　結(jié)論

同批樣品采用普通PCR檢測(cè)偽狂犬病毒，10份樣品中有3份陽(yáng)性，陽(yáng)性率為30％；采用熒光PCR檢測(cè)，10份樣品全為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為100％。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，熒光PCR方法較普通PCR有更高的靈敏性和準(zhǔn)確性，而且操作更為簡(jiǎn)單快速，但是對(duì)實(shí)驗(yàn)要求也較高，容易污染，造成假陽(yáng)性的發(fā)生，價(jià)格也較為昂貴。普通PCR則更為準(zhǔn)確，而且PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可進(jìn)行回收用于下一步研究分析。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，在獸醫(yī)臨床中應(yīng)配合使用，相得益彰。

圖1　樣品偽狂犬PCR電泳結(jié)果

圖2　樣品偽狂犬熒光PCR擴(kuò)增曲線