李輝，張明文，岳先領(lǐng)， 黃國三，張委員

（黑龍江煙草工業(yè)有限責(zé)任公司 技術(shù)研發(fā)中心，黑龍江 哈爾濱，150001）

不同烘焙條件對白肋煙氨基酸含量影響

李輝，張明文，岳先領(lǐng)， 黃國三，張委員

（黑龍江煙草工業(yè)有限責(zé)任公司 技術(shù)研發(fā)中心，黑龍江 哈爾濱，150001）

應(yīng)用 HPLC考察了不同烘焙條件下對白肋煙中氨基酸含量的變化，得到了其變化規(guī)律，為提高混合型卷煙產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量提供了依據(jù)。研究結(jié)果表明：隨著加工強(qiáng)度的增加，白肋煙中脯氨酸含量呈下降趨勢； 隨著烘焙溫度的升高，脯氨酸的含量下降趨勢越明顯； 隨著終端水分的下降，烘烤時間的增長，脯氨酸含量也逐漸下降，空氣含濕量對脯氨酸的影響與終端水分相同； 隨著烘焙溫度的增加，由于氨基酸參與合成amadori化合物，導(dǎo)致游離氨基酸總量逐漸下降。

烘焙條件； 白肋煙； 氨基酸

白肋煙處理工藝是決定混合型卷煙品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一。未經(jīng)處理的白肋煙含糖量低，總氮和煙堿含量較高［1-7］，吸味品質(zhì)表現(xiàn)為香氣濃郁、吃味強(qiáng)度大、辛辣不醇和、雜氣較重、刺激性和勁頭較大，而且通常有較強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)臭和氨臭［8-10］。白肋煙中游離氨基酸的變化對于研究煙葉中香氣物質(zhì)的形成與變化有著重要意義，以前關(guān)于煙葉中游離氨基酸的研究大多集中在烤煙品種上，對于白肋煙的研究則較少。由于加料物質(zhì)和工藝參數(shù)確定的主要依據(jù)是處理后白肋煙的評吸結(jié)果，一般都未將處理工藝與處理過程中白肋煙的香氣成分及其它化學(xué)成分的變化聯(lián)系起來［2，11］，因此，有必要對白肋煙的處理工藝與相應(yīng)的化學(xué)成分變化進(jìn)行研究，以提高混合型卷煙產(chǎn)品質(zhì)量。

1　材料與儀器

材料：恩施白肋煙C2F（2010年）； 鹽酸（分析純AR），宿州化學(xué)試劑有限公司； ACCQ Tag化學(xué)試劑包（色譜純），Waters Corporation，USA； 乙腈（色譜純），賽默飛世爾科技（中國）有限公司； 甲醇（色譜純），賽默飛世爾科技（中國）有限公司； 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品（88122），Waters Corporation，USA。

儀器：高效液相色譜儀（Agilent1200），安捷倫科技（中國）有限公司； 超聲波清洗儀（KQ-300DE），昆山市超聲儀器有限公司； 連續(xù)流動分析儀（AA3），德國BRAN-LUEBBE公司； 分析天平（ME204E/02），梅特勤-托利多儀器（上海）有限公司。

2　方法

2.1白肋煙的處理

對白肋煙C2F進(jìn)行加料處理，使其水分達(dá)到36%左右。對處理后樣品進(jìn)行烘焙實(shí)驗(yàn)，研究烘焙溫度、空氣含濕量、烘焙終端對白肋煙水分的影響［3］。

2.2氨基酸的測定

2.2.1氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

取10、20、40、60、80 μL氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品到離心管，加入990、980、960、940、920 μL超純水，震蕩15 s，配置成25、50、100、150、200 pmol/μL標(biāo)準(zhǔn)溶液，封口，室溫保存［3-4］。

2.2.2原料的預(yù)處理

將不同烘焙條件處理后的白肋煙樣品分別存于40 ℃干燥箱內(nèi)干燥3 h，然后粉碎過40目篩，將過篩后的煙葉1.000 0 g移于150 mL磨口三角瓶中。移取50 mL配置好的0.1 M的鹽酸溶液，加入三角瓶中。在40 ℃時，先超聲30 min后搖勻，再繼續(xù)超聲15 min。然后，用真空泵真空抽濾（用2層濾紙），濾液移至50 mL容量瓶中用0.1 M的鹽酸溶液定容，搖勻，取10 mL于離心管中。使用一次性無菌注射器取少量萃取液，溶液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，存于2 mL離心管中密封冷藏［5，7］。

2.2.3HPLC分析條件

AccQ·Tag專用色譜柱。3.9 mm × 150 mm不銹鋼柱，硅膠基質(zhì)（NovaPakTM），鍵合相為C18，顆粒度 4 μm，端基封口，孔徑為6 nm。

流動相。本實(shí)驗(yàn)采取梯度淋洗。流動相A為10%硼酸緩沖溶液，流動相B為60%乙腈-水，洗柱頭為10%甲醇-水，流動相使用前經(jīng)真空泵脫氣。洗脫條件見表1。

色譜條件。分析柱溫度為37 ℃，反應(yīng)管溫度為130 ℃，進(jìn)樣量為20 μL，熒光檢測器λex在250～570 nm之間，流速為1.0 mL/min。

2.2.4氨基酸定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)各種氨基酸的保留時間及對應(yīng)的峰面積得到各種氨基酸的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)（表 2）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品圖譜（圖1）中17個氨基酸峰的保留時間定性。

表1　梯度洗脫條件

表2　各種氨基酸的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

圖1　50 pmol/μL的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

（續(xù)表2）

2.2.5煙葉中氨基酸的定量分析

根據(jù)各樣品中各氨基酸的峰面積，代入各種氨基酸的線性回歸方程，得出衍生樣品的各種氨基酸濃度X，再根據(jù)各種氨基酸的相對分子質(zhì)量和樣品質(zhì)量，可得出樣品中氨基酸含量［3-4］Z = 0.5XM/m，式中M為各種氨基酸的相對分子質(zhì)量，m為樣品質(zhì)量。

3　結(jié)果與分析

表3為白肋煙氨基酸測定結(jié)果。氨基酸總量包括天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等的總量，其中脯氨酸及氨基酸總量是本項(xiàng)目分析重點(diǎn)。從分析結(jié)果來看，脯氨酸及總氨基酸量隨著烘焙溫度的提高，脯氨酸及氨基酸總量逐步降低，其原因與氨基酸參與了非酶棕色化反應(yīng)有關(guān)。

表3　白肋煙氨基酸測定結(jié)果

表4　不同溫度下白肋煙氨基酸總量的變化

為考察不同烘焙條件對白肋煙脯氨酸的影響，對白肋煙脯氨酸進(jìn)行了進(jìn)一步分析，結(jié)果見表3和表4。由表3和表4可知，隨著烘焙溫度的升高，白肋煙中脯氨酸含量逐漸降低； 在烘焙溫度相同時，隨著空氣含濕量的增加及終端水分的降低，脯氨酸的含量呈現(xiàn)出下降趨勢，其原因是因?yàn)殡S著加工強(qiáng)度的提高，大部分脯氨酸參與美拉德反應(yīng)生成脯氨酸 Amadori化合物而導(dǎo)致其含量下降。

由表4可知，白肋煙處理過程中，隨著溫度的升高，氨基酸總量逐步降低，這種降低與氨基酸參與了非酶棕色化反應(yīng)有關(guān)。但總體而言，即使在140 ℃處理?xiàng)l件下，仍然有一大部分的氨基酸保留，沒有參與反應(yīng)。

4　結(jié)論

白肋煙游離氨基酸中脯氨酸隨著加工強(qiáng)度的增加含量呈下降趨勢，烘焙溫度越高，脯氨酸的含量下強(qiáng)趨勢越明顯； 隨著終端水分的下降，烘烤時間的增長，脯氨酸含量也逐漸下降，空氣含濕量對脯氨酸的影響與終端水分相同。隨著烘焙溫度的增加，游離氨基酸總量逐漸下降。其原因是氨基酸參與合成amadori化合物。

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（責(zé)任編校：劉剛毅）

Effect of different baking conditions on the amino acids of white rib tobacco

Li Hui，Zhang Mingwen，Yue Xianling，Huang Guosan，Zhang Weiyuan
（Technology Development Center ，Heilongjiang Tobacco Industrial Co Ltd，Harbin 150001，China）

The effects of amino acids on the white rib tobacco were studied under different baking conditions，and the change rules were obtained，which provided the basis for improving the intrinsic quality of the mixed type cigarette. The results of the study show that：With increasing of the processing intensity，proline content in burley tobacco showed a downward trend. With elevated torrefaction temperature，the content of proline downward trend is obvious. With decline of the terminal water，baking time of growth，proline content by decrease gradually，and air humidity effect is the same on the amount of proline and terminal moisture； With increasing the baking temperature and the total content of free amino acid decreased gradually，the reason is amino acid involved in the synthesis of the Amadori compounds.

baking conditions； burley tobacco； amino acid

TS 44

1672-6146（2016）02-0083-04

10.3969/j.issn.1672-6146.2016.02.019

李輝，429027103@qq.com； 岳先領(lǐng)，78649504@qq.com。

2016-03-03