基于巨噬細胞模型的竹蓀多糖的免疫功能

尚京迎， 付海田， 鄧 超， 張斯秀， 陳敬華*

（1.江南大學 藥學院，江蘇 無錫214122；2.江南大學 無錫醫(yī)學院，江蘇 無錫214122）

基于巨噬細胞模型的竹蓀多糖的免疫功能

尚京迎1， 付海田1， 鄧 超2， 張斯秀2， 陳敬華1*

（1.江南大學 藥學院，江蘇 無錫214122；2.江南大學 無錫醫(yī)學院，江蘇 無錫214122）

為探索竹蓀多糖（DI）對巨噬細胞RAW264.7免疫功能的影響，分別采用四唑氮藍（MTT）法、中性紅法、Griess法、ELISA法，檢測DI對巨噬細胞增殖、吞噬活性、一氧化氮（NO）和白細胞介素1（IL-1）、白細胞介素6（IL-6）、α腫瘤壞死因子（TNF-α）分泌量的影響；運用反轉錄PCR （RT-PCR）檢測iNOS和IL-1、IL-6、TNF-α的mRNA表達量的變化。結果表明，在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，DI能夠明顯促進巨噬細胞增殖，增強其吞噬活性。同時，DI能夠增強巨噬細胞分泌NO、IL-1、IL-6、TNF-α的能力，且明顯提高iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達水平。因此，竹蓀多糖對巨噬細胞RAW264.7具有免疫刺激作用。

多糖；竹蓀；巨噬細胞；免疫功能

竹蓀（Dictyophora indusiata）是一類大型真菌，屬 于 真 菌 門 （Eumycota）、 擔 子 菌 亞 門（Basidiomycotina）、腹菌綱（Gasteromycetes）、鬼筆目（Phallales）、 鬼 筆 科 （Phallacefte）、 竹 蓀 屬（Dictyophora），其香味濃郁，滋味鮮美，營養(yǎng)豐富，是當今世界上名貴的食用菌之一，具有滋補強壯、寧神健體、益氣補腦、潤肺止咳、補氣養(yǎng)陰及清熱利濕等功效［1-2］。

竹蓀多糖是長裙竹蓀的主要活性物質。關于竹蓀多糖的研究，國內外主要集中在多糖的提取方法和結構解析上［3-6］，對竹蓀多糖的藥理研究較少。已有部分報道證明，竹蓀多糖具有抗腫瘤、抗氧化等作用［3，7-8］。本文中以小鼠巨噬細胞株RAW264.7細胞為模型，研討竹蓀多糖對RAW264.7細胞增殖、吞噬活性，以及 NO、IL-1、IL-6、TNF-α的分泌及iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達的影響，旨在探究竹蓀多糖的免疫調節(jié)功能，為充分開發(fā)應用竹蓀提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 細胞 小鼠巨噬細胞株RAW264.7，購自中國科學院上海細胞庫，培養(yǎng)于含體積分數(shù)10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中，置于37℃、體積分數(shù)5%CO2細胞培養(yǎng)箱中，每天換液，隔2 d傳代1次，細胞長至對數(shù)生長期時，按不同實驗目的處理。

1.1.2 試劑 DMEM高糖培養(yǎng)基，美國Gibco公司產(chǎn)品；胎牛血清，美國Hyclone公司產(chǎn)品；脂多糖（LPS）、MTT，美國Sigma公司產(chǎn)品；ELISA試劑盒，美國R&D公司產(chǎn)品；RNA提取及純化試劑盒，美國Invitrogen公司產(chǎn)品；cDNA逆轉錄試劑盒，美國Fermenta公司產(chǎn)品；PCR酶，寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 竹蓀多糖 竹蓀子實體購自四川省長寧縣，經(jīng)水提醇沉后得粗多糖，再以sevage法脫蛋白質，除雜后冷凍干燥得到實驗用的竹蓀多糖。經(jīng)苯酚硫酸法檢測其總糖質量分數(shù)為93.6%，考馬斯亮藍法測定蛋白質質量分數(shù)為5.73%。將10 mg竹蓀多糖溶于10 mL細胞培養(yǎng)液，過濾除菌，－20℃分裝保存。

1.1.4 儀器與設備 Multiskan GO酶標儀、CO2細胞培養(yǎng)箱，美國Thermo公司制造；倒置熒光顯微鏡，德國Leica公司制造；凝膠成像系統(tǒng)、PCR儀，美國Bio-Rad公司制造；精密電子天平，美國Mettler Toledo公司制造；RE52-99旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠制造；紫外可見分光光度計，日本日立儀器有限公司制造；FreeZone2.5L冷凍干燥機，美國Labconco公司制造。

1.2 方法

1.2.1 MTT法檢測竹蓀多糖對RAW264.7細胞增殖的影響 取對數(shù)生長期的細胞以5×103/孔接種于96孔培養(yǎng)板，37℃、體積分數(shù)5%CO2培養(yǎng)箱孵育6 h。加入 200 μL不同質量濃度 （25、50、100、200 μg/ mL）的竹蓀多糖干預，同體積的1 μg/mL LPS為陽性對照組，同體積的完全培養(yǎng)液為空白對照組，設4個復孔，繼續(xù)孵育48 h，然后加入10 μL MTT（5 g/ L）再孵育4 h，離心5 min（3 000 r/min），棄上清液，每孔加100 μL DMSO，避光輕振10 min，酶標儀570 nm檢測OD值［9］。

1.2.2 中性紅法檢測竹蓀多糖對RAW264.7細胞吞噬活性的影響 取對數(shù)生長期細胞以3×104/孔接種于96孔培養(yǎng)板，37℃、體積分數(shù)5%CO2培養(yǎng)箱孵育24 h。實驗組、空白對照組、陽性對照組處理同1.2.1，48 h后棄上清液，每孔加入100 μL質量分數(shù)為0.072%的中性紅溶液，繼續(xù)孵育30 min，棄中性紅，用預溫的PBS緩沖液洗3遍，每次200 μL，甩干。然后加入冰醋酸-無水乙醇（體積比1∶1）細胞溶解液100 μL/孔，4℃放置2 h，酶標儀550 nm檢測OD值［10］。

1.2.3 Griess法檢測竹蓀多糖對RAW264.7分泌NO的影響 取對數(shù)生長期的RAW264.7細胞，以5×104/孔接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，37℃、體積分數(shù)5%CO2培養(yǎng)箱孵育6 h。實驗組、空白對照組、陽性對照組處理同 1.2.1，48 h后取上清液，按照Griess試劑盒說明書操作方法檢測NO的生成［10］。

1.2.4 ELISA法檢測竹蓀多糖對RAW264.7分泌細胞因子的影響 取對數(shù)生長期的RAW264.7細胞，以5×104/孔接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，37℃、體積分數(shù)5%CO2培養(yǎng)箱孵育6 h。實驗組、空白對照組、陽性對照組處理同 1.2.1，48 h后取上清液，用ELISA試劑盒測定IL-1、IL-6和TNF-α含量，具體操作方法參照試劑盒說明書，酶標儀450 nm檢測OD值［9］。

1.2.5 RT-PCR法檢測細胞因子mRNA的表達 取對數(shù)生長期RAW264.7細胞，以5×105/孔接種于6孔細胞培養(yǎng)板中，37℃、體積分數(shù)5%CO2培養(yǎng)箱孵育12 h。實驗組、空白對照組、陽性對照組處理同1.2.1，48 h后吸去上清液，用TRIzol收集細胞，按照試劑說明提取總RNA，用紫外分光光度計檢測RNA濃度和純度，然后總RNA逆轉錄合成cDNA，以cDNA為模板進行擴增?；蛞镄蛄幸姳?，35個循環(huán)擴增，得到的擴增產(chǎn)物進行1.5 g/dL的瓊脂糖凝膠電泳，Image Lab軟件分析［11］。

表1 基因引物序列Table1 List of primers used in polymerase chain reactions

1.2.6 統(tǒng)計學分析 統(tǒng)計學處理結果以平均數(shù)±標準誤差表示，采用SPSS 19.0軟件中的單因素方差分析進行顯著性檢驗，組間的兩兩比較采用LSD法。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 竹蓀多糖對RAW264.7增殖的影響

巨噬細胞發(fā)揮免疫功能的基礎是細胞的存活，存活的狀態(tài)直接影響其功能的發(fā)揮及應答的強弱［12］?；罴毎€粒體中的琥珀酸脫氫酶可以將外源性MTT還原為水不溶性藍紫色結晶甲臜，而死細胞卻無此功能。在一定細胞數(shù)量范圍內，甲臜結晶形成的量與活細胞數(shù)量成正比，因此，通過測定反應后的吸光度可以判斷活細胞的數(shù)量，也能在一定程度上反映細胞的活性能力。由圖1可知，在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，竹蓀多糖實驗組吸光度與空白對照組相比較均有顯著性差異 （P＜0.01），與陽性對照組相比較均無顯著性差異 （P＞0.05），說明竹蓀多糖在25～200 μg/mL質量濃度范圍內具有促進巨噬細胞增殖的活性，無細胞毒性。

2.2 竹蓀多糖對RAW264.7吞噬活性的影響

吞噬是巨噬細胞發(fā)揮其免疫作用的重要方式之一，巨噬細胞通過吞噬侵入的病原體和體內衰老、畸變的細胞而提高機體的抗感染能力［12］。中性紅吞噬實驗結果見圖2。

圖1 竹蓀多糖對RAW264.7增殖的影響Fig.1 DI induced proliferation of RAW264.7 cells

圖2 竹蓀多糖對RAW264.7吞噬活性的影響Fig.2 Effects of DI on phagocytosis of RAW264.7 cells

在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，竹蓀多糖實驗組對RAW264.7細胞吞噬活性的影響明顯高于空白對照組（P＜0.01），且吞噬活性隨干預濃度的增加而增強；竹蓀多糖質量濃度為200 μg/mL時，其對RAW264.7吞噬功能的促進作用與陽性對照組相比較無顯著性差異 （P＞0.05）。表明在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，竹蓀多糖對RAW264.7細胞吞噬活性具有增強作用，且具有濃度依賴性。提示竹蓀多糖對巨噬細胞的吞噬能力有上調作用，增強了巨噬細胞吞噬病原微生物的非特異性免疫反應能力。

2.3 竹蓀多糖對NO分泌量的影響

NO是激活的巨噬細胞殺滅病原微生物及腫瘤細胞的主要效應分子，廣泛參與機體多種生理及病理過程，其可通過作為信使分子以及發(fā)揮自身的細胞毒性效應這兩方面的作用來實現(xiàn)巨噬細胞免疫功能的增強［13］。根據(jù)Griess法，得到OD540（y）與NO2-濃度（x）的標準方程為

測定樣品的OD540值，通過標準方程計算NO2-的濃度。圖3結果顯示：當竹蓀多糖質量濃度為25～200 μg/mL時，與空白對照組相比，實驗組均能夠極顯著地增強巨噬細胞分泌NO的能力（P＜0.001）；當竹蓀多糖質量濃度為200 μg/mL時，巨噬細胞分泌NO量最高，接近于陽性對照組（P＞0.05）。表明在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，竹蓀多糖能激活巨噬細胞，提高其分泌NO的能力。適量NO的分泌是炎癥反應初期機體對抗炎癥的積極表現(xiàn)，從而實現(xiàn)機體免疫力的提高。

圖3 竹蓀多糖對NO分泌量的影響Fig.3 Effects of DI on NO production in RAW264.7 cells

2.4 竹蓀多糖對細胞因子分泌量的影響

當機體受外界因素刺激后，活化的巨噬細胞作為主要的非特異性免疫效應細胞，能夠產(chǎn)生多種細胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α等）參與免疫系統(tǒng)的調節(jié)，進一步啟動特異性免疫反應，促進T、B淋巴細胞的增殖分化，增強NK細胞的殺傷功能，刺激免疫調節(jié)介質和炎癥介質的表達［14］。因此，通過考察多糖干預后巨噬細胞相關細胞因子的分泌情況，可以了解巨噬細胞的活化程度。

由圖4可知，當質量濃度為25～200 μg/mL時，竹蓀多糖顯著性促進巨噬細胞分泌IL-1（P＜0.001）；當質量濃度為200 μg/mL時，竹蓀多糖刺激巨噬細胞分泌 IL-1的量達到99.07 ng/L，與陽性對照組（98.05 ng/L）相比無顯著性差異（P＞0.05）。說明在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，竹蓀多糖能激活巨噬細胞，提高其分泌細胞因子IL-1的能力。

圖4 竹蓀多糖對IL-1分泌量的影響Fig.4 Effects of DI on IL-1 production in RAW264.7 cells

由圖5可知，當質量濃度為25～200 μg/mL時，竹蓀多糖顯著促進巨噬細胞分泌IL-6（P＜0.001），并且隨干預濃度的增加，IL-6分泌量增多 （P＜0.05）；當質量濃度為100 μg/mL時，竹蓀多糖刺激巨噬細胞分泌IL-6的量達到102.11 pg/mL，與陽性對照組（104.79 pg/mL）相比無明顯差異（P＞0.05）。說明在25～200 μg/mL質量濃度范圍內，竹蓀多糖能激活巨噬細胞，提高其分泌細胞因子IL-6的能力，且呈濃度依賴性。

圖5 竹蓀多糖對IL-6分泌量的影響Fig.5 Effects of DI on IL-6 production in RAW264.7 cells

由圖6可知，當質量濃度為25～200 μg/mL時，竹蓀多糖顯著促進巨噬細胞分泌TNF-α（P＜0.001）；當質量濃度為100 μg/mL時，竹蓀多糖刺激巨噬細胞分泌TNF-α的量達到758.03 ng/L，與陽性對照組的786.17 ng/L比較無明顯差異（P>0.05）。說明竹蓀多糖可激活巨噬細胞，刺激TNF-α的分泌。

2.5 細胞因子mRNA的表達

mRNA是基因與表達產(chǎn)物間的橋梁，大部分蛋白質表達水平和mRNA轉錄水平具有相關性。在多糖的干預下，巨噬細胞相關細胞因子mRNA表達的增強是提高其細胞因子分泌量的原因之一［15］。βactin是管家型基因，在所有組織中的表達相對持續(xù)穩(wěn)定。本實驗以β-actin作為內參，運用RT-PCR技術考察了巨噬細胞相關細胞因子mRNA的表達情況。結果如圖7所示。

圖6 竹蓀多糖對TNF-α分泌量的影響Fig.6 Effects of DI on TNF-α production in RAW264.7 cells

圖7 細胞因子mRNA的表達Fig.7 Effects of DI on cytokine gene expression by RAW264.7 cells

β-actin各組間條帶亮度相似，說明提取的總RNA量無顯著性差異；與空白對照組比較，不同質量濃度的竹蓀多糖干預巨噬細胞后iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達量都有不同程度的升高；當竹蓀多糖質量濃度為25 μg/mL時，IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達量均較低；當竹蓀多糖質量濃度為200 μg/mL時，iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α的條帶亮度均與陽性對照組相似；巨噬細胞iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達量變化趨勢與其分泌NO、IL-1、IL-6、TNF-α的量相關，推測竹蓀多糖可能通過在轉錄水平上調節(jié)iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達，從而實現(xiàn)巨噬細胞NO、IL-1、IL-6、TNF-α分泌的增加。

3 討論

巨噬細胞是具有多種功能的免疫效應細胞，能夠分泌促炎癥細胞因子如IL-1、IL-6、TNF-α等，并且對病原微生物及癌細胞表現(xiàn)出較高的吞噬能力，在機體先天性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。TNF-α是由多種活化的免疫和非免疫細胞產(chǎn)生的促炎癥細胞因子，是特異性免疫應答和炎癥反應之間的重要連接紐帶，在宿主防御機制中發(fā)揮重要的作用，可以直接殺傷腫瘤細胞，并且能夠刺激一系列免疫調節(jié)介質和炎癥介質的表達［14］。IL-6是一種多功能細胞因子，可以促進T、B細胞的增殖分化，促進B細胞的終末分化及分泌抗體［16］。巨噬細胞受刺激活化時，釋放的大量NO具有細胞毒作用，可殺傷腫瘤細胞，也可以誘發(fā)炎癥反應保護機體抵御外界不利因素的侵害［17］。IL-1是活化巨噬細胞分泌的重要細胞因子，不僅能夠促進B淋巴細胞分泌IL-12，而且能夠增強NK細胞的殺傷功能［18］。

作者所在實驗室前期采用熱水浸提獲得的竹蓀子實體多糖為三螺旋構象β-（1→3）-D-葡聚糖，體外無抗腫瘤細胞活性，而動物實驗顯示具有抑制腫瘤生長的效果［8］。由此推測竹蓀多糖是否是通過免疫增強效應實現(xiàn)其體內抗腫瘤活性。因此，本實驗以巨噬細胞為模型，研究竹蓀多糖的免疫活性，結果表明：在一定質量濃度范圍內，竹蓀多糖能夠促進巨噬細胞增殖，增強其吞噬活性，促進其分泌NO、IL-1、IL-6、TNF-α；與此同時，竹蓀多糖還能增加巨噬細胞iNOS、IL-1、IL-6和TNF-α mRNA的表達。據(jù)此推測，竹蓀多糖是通過在轉錄水平上調節(jié)iNOS、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA的表達，從而實現(xiàn)巨噬細胞NO、IL-1、IL-6、TNF-α分泌的增加。

4 結語

作者所在實驗室初步證明了竹蓀多糖對巨噬細胞具有免疫調節(jié)作用，可以作為免疫調節(jié)劑應用于保健食品領域。然而，竹蓀多糖激活巨噬細胞的機制仍不明了，如其與巨噬細胞表面何種受體結合，以及后續(xù)啟動的信號通路有哪些等問題，需要作進一步深入研究。

［1］鄭楊，鄒青青，張岱，等.竹蓀的化學成分及生理活性研究進展［J］.食品科學與技術學報，2013，31（3）：39-45. ZHENG Yang，ZHOU Qingqing，ZHANG Dai，et al.Research progress on chemical composition and biological activities of Dictyophora indusiata［J］.Journal of Food Science and Technology，2013，31（3）：39-45.（in Chinese）

［2］吳定濤，巨瑤君，陸靜峰，等.糖譜法比較不同產(chǎn)地竹蓀多糖結構特征［J］.食品科學，2014，35（13）：98-102. WU Dingtao，JU Yaojun，LU Jingfeng，et al.Characterization and comparison of polysaccharides from Dictyophora indusiata using saccharide mapping［J］.Food Science，2014，35（13）：98-102.（in Chinese）

［3］DENG C，HU Z，F(xiàn)U H T，et al.Chemical analysis and antioxidant activity in vitro of a β-D-glucan isolated from Dictyophora indusiata［J］.International Journal of Biological Macromolecules，2012，51（1-2）：70-75.

［4］WU S H，GONG G L，WANG Y Y，et al.Response surface optimization of enzyme-assisted extraction polysaccharides from Dictyophora indusiata［J］.International Journal of Biological Macromolecules，2013，61：63-68.

［5］丁瑞瑞，令狐婭，郭春連，等.竹蓀多糖提取工藝及其對腫瘤抑制作用的研究［J］.廣州化工，2014，42（15）：61-63. DING Ruirui，LINGHU Ya，GUO Chunlian，et al.Optimization of extraction technique of Bamboo Fungus polysaccharide and its inhibition in tumor cells［J］.Guangzhou Chemical Industry，2014，42（15）：61-63.（in Chinese）

［6］HUA Y L，YANG B，TANG J，et al.Structural analysis of water-soluble polysaccharides in the fruiting body of Dictyophora indusiata and their in vivo antioxidant activities［J］.Carbohydrate Polymers，2012，87（1）：343-347.

［7］HUA Y L，GAO Q，WEN L R，et al.Structural characterisation of acid and alkali-soluble polysaccharides in the fruiting body of Dictyophora indusiata and their immunomodulatory activities［J］.Food Chemistry，2012，132（2）：729-743.

［8］DENG C，F(xiàn)U H T，TENG L P，et al.Anti-tumor activity of the regenerated triple-helical polysaccharide from Dictyophora indusiata［J］.International Journal of Biological Macromolecules，2013，61：453-458.

［9］蔡海蘭，黃曉君，聶少平，等.鐵皮石斛多糖對RAW264.7細胞分泌TNF-α的影響 ［J］.中國藥理學通報，2012，28（11）：1553-1556. CAI Hailan，HUANG Xiaojun，NIE Shaoping，et al.Effects of polysaccharides from Dendrobium Officinale on the production of TNF-α by RAW264.7 cells［J］.Chinese Pharmacological Bulletin，2012，28（11）：1553-1556.（in Chinese）

［10］張麗霞，張雅君，張麗萍.靈芝多糖的提取純化及其免疫活性 ［J］.西北農(nóng)林科技大學學報 （自然科學版），2014，42（6）：168-172. ZHANG Lixia，ZHANG Yajun，ZHANG Liping.Extraction and purification of polysaccharide from Ganoderma lucidum and its immunological activities［J］.Journal of Northwest A and F University（Nat Sci Ed），2014，42（6）：168-172.（in Chinese）

［11］ZANG C X，DAI Z R.Immunomodulatory activities on macrophage of a polysaccharide from Sipunculus nudus L［J］.Food and Chemical Toxicology，2011，49（11）：2961-2967.

［12］葉莎莎，曾耀英，尹樂樂.紅景天苷對小鼠腹腔巨噬細胞體外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO產(chǎn)生的影響［J］.細胞與分子免疫學雜志，2011，27（3）：237-241. YE Shasha，ZENG Yaoying，YIN Lele.Effects of salidroside on proliferation，apoptosis，phagocytosis，ROS and NO production of murine peritoneal macrophages in vitro［J］.Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology，2011，27（3）：237-241.（in Chinese）

［13］張曉紅，董莉，楊雅欣，等.紫金龍乙醇組分對脂多糖誘導的RAW 264.7細胞分泌炎癥因子的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2014，20（21）：149-152. ZHANG Xiaohong，DONG Li，YANG Yaxin，et a1.Effects of ethanol componentons from Aconitum vilmorinianum on inflammatory cytokines in LPS-stimulated RAW264.7 cell［J］.Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2014，20（21）：149-152.（in Chinese）

［14］陳榕芳，吳小南，陳潔.滸苔多糖粗提物調節(jié)巨噬細胞RAW264.7免疫功能研究［J］.海峽預防醫(yī)學雜志，2012，18（2）：4-7. CHEN Rongfang，WU Xiaonan，CHEN Jie.Study on regulation of immunity function of macrophage cell line RAW264.7 by crude polysaccharide extracted from enteromorpha［J］.Strait Journal of Preventive Medicine，2012，18（2）：4-7.（in Chinese）

［15］程安瑋.甘草多糖的提取及對小鼠腹腔巨噬細胞的免疫調節(jié)［D］.無錫：江南大學食品學院，2008.

［16］ISHIBASHI T，KIMURA H，SHIKAMA Y，et a1.Interleukin-6 is a potent thrombopoietic factor in vivo in mice［J］.Blood，1989，74（4）：1241-1244.

［17］KIM H S，KIM Y J，LEE H K，et al.Activation of macrophages by polysaccharide isolated from Paecilomyces cicadae through toll-like receptor 4［J］.Food and Chemical Toxicology，2012，50（9）：3190-3197.

［18］JANIK J E，MILLER L L，LONGO D L，et a1.Phase II trial of interleukin-1 alpha and indomethacin in treatment of metastatic melanoma［J］.Journal of the National Cancer Institute，1996，88（1）：44-49.

Immunomodulatory Effects of A Polysaccharide from Dictyophora indusiata on Macrophage

SHANG Jingying1， FU Haitian1， DENG Chao2， ZHANG Sixiu2， CHEN Jinghua1*
（1.School of Pharmaceutical Science，Jiangnan University，Wuxi214122，China；2.Wuxi Medical School，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

In order to investigate the immunomodulatory effects of a polysaccharide from Dictyophora indusiata （DI）on the immune function of RAW264.7 cells，the effects of DI on cell proliferation，phagocytosis of RAW264.7 cells，levels of NO，IL-1，IL-6 and TNF-α production were detected by MTT assay，neutral red test，Griess method，and ELISA，respectively.The mRNA expression level of iNOS，IL-1，IL-6 and TNF-α were also measured by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）.The results indicated that DI contributed significantly to the proliferation of the macrophages and the phagocytic activity was at 25～200 μg/mL.In addition，the production of NO，IL-1，IL-6 and TNF-α in macrophages were increased.Further，the expression of iNOS，IL-1，IL-6 and TNF-α mRNA were significantly up-regulated. The DI played immunomodulatory effects on macrophage cell line RAW264.7.

polysaccharide，Dictyophora indusiata，macrophage，immunomodulation

Q 539

A

1673—1689（2016）08—0849—06

2015-01-09

教育部博士點基金項目（20110093110008）。

陳敬華（1971—），男，湖北黃石人，理學博士，教授，主要從事生物大分子和生物功能材料的研究。E-mail:jhchenwhut@126.com