噴射式電化學發(fā)光猝滅法快速測定萊克多巴胺

席 強， 宋麗杰， 劉仲明， 王 捷*

(1.廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院，廣東廣州 510010；2.華南理工大學生物科學與工程學院，廣東廣州 510006)

萊克多巴胺是繼克倫特羅之后的一類新型瘦肉精，屬于苯乙醇胺類衍生物，其結構類似于腎上腺素，具有營養(yǎng)再分配作用，可提高畜禽瘦肉率[1]。由于其價格遠低于克倫特羅，因而近年來在畜禽養(yǎng)殖中違法添加萊克多巴胺的現(xiàn)象屢禁不止。萊克多巴胺容易殘留在動物體內(nèi)，并通過食物鏈在人體中累積，繼而引起肌肉震顫、心律失常、惡心及眩暈等[2]。但萊克多巴胺的檢測標準和方法均比克倫特羅滯后，較難對其進行快速、有效地監(jiān)控。目前，用于萊克多巴胺檢測的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)[3]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[4]、液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)[5]、電化學法[6]、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[7,8]等。然而，這些方法大多需要昂貴的設備，并且檢測過程繁瑣費時，不適于大規(guī)模的快速篩選。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

ECL檢測在改進的噴射式電化學發(fā)光分析儀上進行，該檢測系統(tǒng)及其檢測池示意圖如圖1所示。樣品溶液通過進樣端口中的鋼針噴射到與其正對的鉑金圓盤工作電極表面，檢測池中多余的液體則從廢液端口流出，其中檢測池內(nèi)體積約為150 μL(圖1(B))。三電級系統(tǒng)包括：鉑金圓盤工作電極(Φ=2 mm)、鉑絲輔助電極(Pt)、Ag/AgCl參比電極均由西安瑞邁分析儀器有限責任公司提供。MSP1-C2工業(yè)注射泵(保定蘭格恒流泵有限公司)；KQ-100DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；VOTEX 漩渦振蕩器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；OAKTON PH 510 臺式套裝酸度計(美國，奧克公司)；艾科浦超純水機(美國，艾科浦國際有限公司)。

六水合三(2，2′-聯(lián)呲啶)氯化釕、N-丁基二乙醇胺、萊克多巴胺鹽酸鹽，均購于Sigma-Aldrich公司； Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、尿酸，均購于上海阿拉丁試劑有限公司；其它試劑均為分析純。所有試劑用純化水配制并稀釋到所需濃度后于4 ℃冰箱中保存。

1.2 實驗方法

實驗前，將工作電極依次在含1.0、0.3、0.05 μm Al2O3的麂皮上進行打磨直至呈鏡面，用純化水超聲清洗5 min。然后將清洗后的工作電極置于1 mol/L H2SO4中進行循環(huán)伏安(CV)掃描(-0.2～1.5 V)直至獲得穩(wěn)定的CV曲線。最后用純化水清洗，自然晾干后，按圖1(B)所示進行組裝。

由于進樣端口與樣品閥之間有約100 μL的體積，故舍棄首次檢測數(shù)據(jù)。ECL初始檢測參數(shù)設置：工作電極電位為1.35 V；PMT高壓為900 V，放大級數(shù)為3級。每次檢測前或更換樣品時，均需用0.1 mol/L相應pH的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)作為清洗液清洗檢測池，直至無發(fā)光信號。實驗中注射泵設置的參數(shù)見表1。

表1 注射泵參數(shù)設置

2 結果與討論

2.1 萊克多巴胺對丁基二乙醇胺體系發(fā)光的猝滅效應

2.2 檢測條件的優(yōu)化

工作電極電位和緩沖溶液pH對萊克多巴胺的猝滅效率(△I/I0×100%，式中△I=I0-It,I0與It分別為加入萊克多巴胺前后的發(fā)光強度)有一定的影響。當電極電位和緩沖液pH分別為1.35 V和8.5時，萊克多巴胺的猝滅效率達到最大值(圖3(A)、3(B))。當N-丁基二乙醇胺濃度較高時，萊克多巴胺的猝滅效率較低；隨著N-丁基二乙醇胺濃度的降低，萊克多巴胺對發(fā)光強度的湮滅能力就越強(圖3(C))。然而，過低濃度的N-丁基二乙醇胺也會造成體系ECL強度變?nèi)?。綜合考慮，選取1.0×10-8mol/L的N-丁基二乙醇胺進行后續(xù)實驗。此外，噴射速率對萊克多巴胺的猝滅效率的影響也非常明顯。樣品溶液噴射到工作電極表面的速率決定著電化學產(chǎn)物在工作電極表面更新速率的快慢，也在一定程度上影響著萊克多巴胺的猝滅效率。當樣品噴射速率為4 mL/min時，萊克多巴胺的猝滅效率達到最大(圖3(D))。

2.3 萊克多巴胺的檢測

2.4 萊克多巴胺檢測體系選擇性評估

2.5 實際樣品分析

分別用兩份經(jīng)高效液相色譜法確認不含有萊克多巴胺的豬尿樣品，將1 μg/mL的萊克多巴胺標準品溶液分別稀釋至5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL，由該方法測得萊克多巴胺的含量如表2所示，結果與實際添加的萊克多巴胺的量較為吻合，相對標準偏差(RSD)在0.84%～1.46%之間；所測得的回收率為93.60%～107.40%，表明該分析方法具有較好的準確度和精密度。

表2 加標回收率實驗(n=3)

3 結論