劉凱麗， 段敏敏， 吳加倫*， 王德勤， 張慧曄， 徐友陽

(1.農(nóng)業(yè)部植物病原及昆蟲分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所，浙江杭州 310058;2.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東廣州 510000)

溪黃草為唇形科植物線紋香茶菜[Rabdosialophanthoides(Ham.exD.Don)Hara]的干燥全草[1]，別名山熊膽、風(fēng)血草等，它具有清熱利濕、退黃、涼血散瘀之功，用于濕熱黃疸、跌打瘀腫[2]，對肝癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞也有一定的抑制作用[3 - 5]。但溪黃草在種植過程中經(jīng)常受到雜草的危害，而除草劑的使用可以大大降低除草成本，且能有效提高產(chǎn)量，因此，農(nóng)藥殘留量的檢測對中草藥的安全生產(chǎn)十分重要。

二甲戊樂靈(Pendimethalin)具有毒性低，酸堿中穩(wěn)定，殺草譜廣的特點(diǎn)[6]，可有效防除田間多種雜草，尤其對禾本科雜草有較好的防除效果。其檢測方法有多種，如李永新等[7]用高效液相色譜(HPLC)測定水中的二甲戊樂靈；楊挺等[8]用氣相色譜-電子捕獲檢測法(GC-ECD)檢測豆類蔬菜中二甲戊樂靈的殘留；Esrtuk等[9]建立了測定生菜中二甲戊樂靈等多殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法。但尚未見二甲戊樂靈在溪黃草中的殘留分析方法的報(bào)道。本文建立了一種簡便、高效檢測溪黃草及土壤中二甲戊樂靈殘留的GC-ECD分析方法，該方法精確度和準(zhǔn)確度均符合殘留分析的要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

Agilent-7890A型氣相色譜儀(美國，Agilent公司)，帶63Ni-μECD檢測器；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；UITRA-TURRAX型勻漿機(jī)(德國，IKA公司)；DD01型中藥粉碎機(jī)(浙江溫嶺市大德中藥機(jī)械有限公司)；Heidolph Laborota 4010 digital旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國，Heidolph集團(tuán))。

二甲戊樂靈(Pendimethalin)標(biāo)準(zhǔn)品，純度為98.4%，購于迪馬科技有限公司。助濾劑Celite545(硅藻土載體)；活性炭(分析純，濃鹽酸中加熱煮沸1 h，用蒸餾水洗至中性，烘干后在600 ℃灼燒2 h)。中性氧化鋁(粒徑75～150 μm)，弗羅里硅土(粒徑150～250 μm)。中性氧化鋁、弗羅里硅土、無水Na2SO4需600 ℃灼燒4 h，用前130 ℃烘2 h。中性氧化鋁、弗羅里硅土用前加入3%的水脫活；正己烷(色譜純)，丙酮、正己烷、苯、乙腈均經(jīng)過全玻璃蒸餾裝置重蒸(分析純)。

溪黃草及土壤樣品采自廣東清遠(yuǎn)溪黃草GAP基地(未施用過二甲戊樂靈)，土壤用采樣器取試驗(yàn)基地0～10 cm的土層，磨碎過20目篩，備用。

1.2 樣品制備

1.2.1土壤樣品制備稱取過20目篩的土壤樣品20.0 g，置于250 mL的帶螺紋蓋樣品瓶中，準(zhǔn)確加入乙腈80 mL，旋緊螺紋蓋，超聲提取30 min，過濾，準(zhǔn)確量取濾液40 mL，經(jīng)無水Na2SO4脫水后，減壓濃縮近干，氮吹儀吹干，正己烷定容至4 mL,待測。

1.2.2溪黃草樣品制備稱取溪黃草鮮樣5.0 g(精確至0.01 g)，置于250 mL的帶螺紋蓋樣品瓶中，準(zhǔn)確加入60 mL丙酮∶正己烷=1∶1(V/V)，高速勻漿1 min，加入1 g助濾劑，超聲提取30 min，提取液經(jīng)布氏漏斗過濾，30 mL提取液洗滌殘?jiān)?，合并濾液，轉(zhuǎn)入250 mL平底燒瓶中，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，氮吹儀吹干，待凈化。

層析柱(從下至上依次為2 cm無水Na2SO4，0.15 g活性炭、5 g中性氧化鋁和2 g弗羅里硅土混合物，2 cm無水Na2SO4)均勻敲實(shí)，淋洗液為正己烷∶苯=4∶1(V/V)。先用30 mL正己烷預(yù)淋洗，棄去淋出液，將上述樣品轉(zhuǎn)入柱中，用80 mL淋洗液洗脫，收集洗脫液于250 mL平底燒瓶中，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮近干，氮吹儀吹干，正己烷定容至4 mL,待測。

1.3 色譜條件

色譜柱：DB -5柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；檢測器溫度：300 ℃；程序升溫：起始溫度為100 ℃，以20 ℃/min升至220 ℃，保持10 min，以30 ℃/min升至280 ℃，保持5 min；不分流進(jìn)樣；柱流速：1 mL/min；尾吹：30.0 mL/min；進(jìn)樣體積：1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 二甲戊樂靈提取溶劑的選擇

土壤樣品用丙酮或乙腈提取，兩者回收率均能達(dá)到90%以上，但丙酮提取，進(jìn)樣后雜質(zhì)峰較多，而乙腈提取，雜質(zhì)峰較少，故土壤樣品采用乙腈提取。溪黃草鮮樣分別采用正己烷、丙酮、乙腈和體積比為1∶1的丙酮∶正己烷提取，正己烷回收率低，僅為15%左右；丙酮提取色素太重，層析柱凈化后雜質(zhì)仍很多；乙腈提取有干擾峰；而用丙酮∶正己烷=1∶1(V/V)提取，無干擾峰，且回收率可達(dá)85%以上。

2.2 溪黃草中二甲戊樂靈的凈化

李闖等[10]采用中性氧化鋁和活性炭凈化，研究了乙氧氟草醚、二甲戊樂靈和乙草胺在大蒜植株和土壤中的殘留分析方法。Engebretson等[11]采用固相萃取(SPE)凈化，建立了二甲戊樂靈在水果、蔬菜、堅(jiān)果和薄荷中的殘留分析方法。本實(shí)驗(yàn)對溪黃草的凈化手段和洗脫溶劑選取了幾種方法，并進(jìn)行了比較，結(jié)果如表1。

表1 4種凈化手段和2種洗脫液的凈化效果比較

最終選擇0.15 g活性炭、5 g中性氧化鋁、2 g弗羅里硅土層析柱凈化，正己烷∶苯(8∶2，V/V)80 mL洗脫的方法，其他凈化方法回收率雖然普遍高于本方法，但有些雜質(zhì)會(huì)對目標(biāo)峰產(chǎn)生干擾，同時(shí)濃縮定容后色素含量高，進(jìn)樣后會(huì)嚴(yán)重影響色譜柱柱效。

2.3 檢測器的選擇

目前，二甲戊樂靈的檢測方法有多種，普遍采用氣相色譜法或高效液相色譜法。氣相色譜法當(dāng)前廣泛采用電子捕獲檢測器(ECD)。林愛軍等[12]等采用氣相色譜-氫火焰離子化檢測器(FID)測定菘藍(lán)中二甲戊樂靈含量，但ECD檢測器靈敏度高，穩(wěn)定性好，故本方法采用氣相色譜法，ECD檢測器檢測。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取二甲戊樂靈標(biāo)準(zhǔn)品0.1016 g，用正己烷配制成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，進(jìn)而再稀釋成質(zhì)量濃度分別為2、1、0.5、0.2、0.05和0.02 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，由低濃度向高濃度進(jìn)行檢測，平行測定6次。以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度X(mg/L)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，建立線性回歸方程。線性回歸方程為：Y=36295X-425，相關(guān)系數(shù)R2為0.9998，二甲戊樂靈在質(zhì)量濃度為0.01～2 mg/L之間時(shí)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 方法的準(zhǔn)確度和精密度

選取適量土壤及溪黃草空白樣品，分別進(jìn)行二甲戊樂靈的添加回收率試驗(yàn)。分別稱取土壤樣品20.0 g和溪黃草樣品5.0 g，土壤樣品的添加水平分別為1.0、0.1、0.01 mg/kg，溪黃草樣品的添加水平分別為1.0、0.5、0.01 mg/kg。分別按1.2和1.3的方法進(jìn)行樣品處理和儀器分析，測定二甲戊樂靈的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，每個(gè)添加水平重復(fù)3次，結(jié)果見表2。

表2 二甲戊樂靈在土壤及溪黃草中添加回收率(n=3)

結(jié)果表明，土壤的回收率在89.92%～101.34%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.67%～4.80%；溪黃草的回收率在88.53%～90.45%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.33%～2.76%。分別以3倍和10倍信噪比(S/N)確定得二甲戊樂靈的最小檢出量(LOD)為0.1 ng， 土壤和溪黃草中最低檢測濃度(LOQ)均為0.01 mg/kg。

3 結(jié)論

中草藥的安全問題近年來備受重視，二甲戊樂靈作為世界上銷售額最大的選擇性除草劑，其殘留檢測的需求極為迫切。本文建立的溪黃草和土壤中二甲戊樂靈殘留的分析方法，操作簡單，分析速度快，定性定量準(zhǔn)確，靈敏度高，穩(wěn)定性好，同時(shí)可為制定二甲戊樂靈(二硝基苯胺類)在成分更加復(fù)雜的中草藥中的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)提供一定的參考。