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      狐貍腦炎活疫苗CAV—2C株免疫效力試驗

      2016-10-20 01:46:27張淼程悅寧
      現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技 2016年5期
      關鍵詞:活疫苗

      張淼 程悅寧

      摘要 開展了狐貍腦炎活疫苗免疫效力試驗,確定最小免疫劑量為1.0 mL(103.5TCID50/mL),免疫劑量1.0 mL(104.5TCID50/mL),免疫后180 d用強毒攻擊均獲得了100%保護,-20 ℃保存期為180 d。

      關鍵詞 狐貍腦炎;活疫苗;免疫效力

      中圖分類號 S858.315.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739(2016)05-0288-01

      Abstract Test of protective efficacy of live vaccine of fox encephalitis was done in this study.The results showed that the minimum immune dose was 1.0 ml(103.5TCID50/mL),the immunizing dose was 1.0 mL(104.5TCID50/mL),and immunity period was up to 180 days.The live vaccine could induce completely protection in foxes against lethal challenge with virulent strain.The shelf life of vaccine was 180 days at -20 ℃.

      Key words fox encephalitis;live vaccine;protective efficacy

      我國狐貍飼養(yǎng)業(yè)發(fā)展迅速,目前全國養(yǎng)殖量約為1 500萬只,分布在北方12個省市。通過對分離鑒定的我國流行狐貍腺病毒毒株的馴化致弱,獲得了CAV-2C弱毒株,適合于中國狐貍腺病毒流行株特點的疫苗毒株,首次篩選和優(yōu)化出狐貍腦炎活疫苗制苗毒種。采用犬腎傳代細胞(MDCK)培養(yǎng)犬腺病毒Ⅱ型CAV-2C弱毒株,成功地研制出狐貍腦炎活疫苗。本項研究重點開展了狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量、免疫劑量和效力試驗、免疫期和保存期試驗,以及臨床應用試驗,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

      1 材料與方法

      1.1 狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量試驗

      應用不同稀釋度的狐貍腦炎活疫苗免疫斷乳21 d未接種任何疫苗的健康北極狐,同時設對照組5只。

      1.2 狐貍腦炎活疫苗免疫劑量和效力試驗

      取狐貍腦炎活疫苗批號為201401、201402、201403等3批,疫苗效價為104.5~5.0TCID50/mL,免疫斷乳21 d未接種任何疫苗的健康北極狐,每批疫苗免疫狐5只,每只1.0 mL,免疫后21 d用100個ID50 CAV-1株強毒攻擊,同時設對照組5只,觀察30 d[1-3]。

      1.3 狐貍腦炎活疫苗免疫期試驗

      選斷乳21 d未接種任何疫苗的健康北極狐50只,用批號為201401、201402、201403等3批狐貍腦炎活疫苗分別免疫10只,每只接種1.0 mL,分別在免疫后7、21、60、180 d采血分離血清,測定CAV抗體情況,CAV抗體測定采用中和試驗方法,免疫180 d后,進行攻毒試驗,隨機選取每批疫苗免疫狐5只,用100個ID50 CAV1株強毒攻擊,同時設對照組5只,觀察30 d[4-6]。

      1.4 狐貍腦炎活疫苗保存期試驗

      取批號為201401、201402、201403等3批狐貍腦炎活疫苗,對分別在室溫條件下保存1~5 d,在4 ℃條件下保存7~21 d,在-20 ℃條件下保存30~180 d,然后進行效價測定,確定疫苗保存期。每批疫苗應用MDCK細胞做狐貍腦炎活疫苗效價測定。

      1.5 狐貍腦炎活疫苗田間試驗

      對3批狐貍腦炎活疫苗免疫的養(yǎng)狐場,進行了安全性檢驗均合格,并分別在接種后3個月和6個月隨機選300只狐貍采血做抗體檢測。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量試驗

      免疫狐貍分別在第7天開始產(chǎn)生抗體,14 d與21 d抗體效價基本相同,不同稀釋度疫苗產(chǎn)生的抗體效價不同,結(jié)果見表1。

      試驗結(jié)果表明,10-1倍稀釋1.0 mL劑量在7 d產(chǎn)生抗體,14 d效價達到1∶16以上,而10-3倍稀釋1.0 mL劑量僅為1∶8。免疫21 d后用100個ID50犬腺病毒CAV1株強毒攻擊,10-1倍稀釋1.0 mL劑量獲得100%保護,而10-2倍稀釋1.0 mL劑量未獲得全部保護,對照組全部發(fā)病,出現(xiàn)典型的腦炎癥狀,根據(jù)試驗結(jié)果,確定狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量為10-1倍稀釋1.0 mL,即103.5TCID50/mL。

      2.2 狐貍腦炎活疫苗免疫劑量和效力試驗

      疫苗效價為104.5~5.0TCID50/mL,接種劑量為1.0 mL,免疫后21 d經(jīng)強毒攻擊可獲得100%保護,結(jié)果表明,狐貍腦炎活疫苗免疫劑量為1.0 mL,免疫動物產(chǎn)生了很好的免疫力,證明該疫苗的免疫原性好,安全可靠,免疫效果好(表2)。

      2.3 狐貍腦炎活疫苗免疫期試驗

      狐貍腦炎活疫苗免疫180 d攻毒試驗結(jié)果見表3??梢钥闯?,3批狐貍腦炎活疫苗免疫180 d后,用強毒攻擊均獲得了100%保護,結(jié)果表明狐貍腦炎活疫苗免疫期180 d。

      2.4 狐貍腦炎活疫苗保存期試驗

      室溫15~20 ℃條件下保存3 d,效價保持不變,5 d效價下降101.0 個滴度。4 ℃冰箱條件下保存14 d,效價保持不變,保存21 d,每批狐貍腦炎活疫苗效價都有所下降,效價下降最多為101.0個滴度。-20 ℃條件下保存,120 d時測定狐貍腦炎活疫苗效價均未發(fā)生變化。180 d時測定狐貍腦炎活疫苗效價也未發(fā)生變化。根據(jù)試驗結(jié)果,確定狐貍腦炎活疫苗-20 ℃的保存期為180 d(表4)。

      2.5 狐貍腦炎活疫苗田間試驗

      結(jié)果表明,在3個月CAV抗體陽轉(zhuǎn)率為100%。6個月CAV抗體陽轉(zhuǎn)率為98%,抗體效價在1∶64以上達98%,以上結(jié)果表明,該狐貍腦炎活疫苗免疫后6個月臨床保護率為98%。

      3 結(jié)論與討論

      狐貍腦炎活疫苗(CAV-2C株)免疫效力試驗結(jié)果表明,最小免疫劑量為1.0 mL(103.5TCID50/mL),免疫劑量1.0 mL(104.5TCID50/mL),免疫后180 d用強毒攻擊均獲得了100%保護,-20 ℃保存期為180 d。

      狐貍腦炎活疫苗應用于吉林、遼寧等地養(yǎng)狐場,用于預防免疫接種,未發(fā)生狐貍腦炎,免疫效果良好,安全可靠,具有廣闊的應用前景。

      4 參考文獻

      [1] 俞永新.流行性乙型腦炎減毒活疫苗的發(fā)展和應用[J].上海預防醫(yī)學雜志,2006(3):110-112.

      [2] 許樹林,洪運太,李雁冰,等.狐貍腦炎病毒細胞培養(yǎng)滅活疫苗的研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),1994(9):10-12.

      [3] 柴秀麗,閆喜軍,姜莉莉,等.狐貍傳染性腦炎中和試驗監(jiān)測方法的建立和應用[J].特產(chǎn)研究,2006(4):8-10.

      [4]閆喜軍,姜莉莉,柴秀麗,等.狐傳染性腦炎活疫苗抗體消長規(guī)律的研究[J].經(jīng)濟動物學報,2006(2):70-72.

      [5] 程世鵬,楊漢春,吳威,等.狐犬瘟熱、細小病毒性腸炎和腦炎三聯(lián)活疫苗免疫效力試驗[J].中國獸醫(yī)雜志,2008,43(8):28-29.

      [6] 張艷英,王曉珊,吳楠,等.狐貍腦炎活疫苗的免疫效果監(jiān)測[C]//青島:中國毛皮動物科學研究進展:2014年全國毛皮動物專業(yè)學術研討會.中國毛皮動物科學研究進展:2014年全國毛皮動物專業(yè)學術研討會論文集,2014:81-86.

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