王茂媛 羊青 王清隆 晏小霞 王建榮 王祝年

摘 要 采用索氏提取法和溶劑萃取法分別提取牛大力（Millettia speciosa Champ.）花苞、花朵和果莢的脂溶性成分，經GC-MS分析，從花苞脂溶性成分中鑒定出24個化合物，占總脂溶性成分的88.31%，主要為烷烴和烯烴類（52.00%）、醇類（17.46%）化合物；從花朵脂溶性成分中鑒定出29個化合物，占總脂溶性成分的91.38%，主要為烷烴和烯烴類（60.64%）、醇類（17.178%）化合物；從果莢脂溶性成分中鑒定出32個化合物，占總脂溶性成分的80.01%，主要為烷烴和烯烴類（32.56%）、苯基及其衍生物類（22.46%）、脂肪酸類（12.54%）化合物，其中6個化合物為共有成分。

關鍵詞 牛大力 ；花苞 ；花朵 ；果莢 ；GC-MS；脂溶性成分

中圖分類號 Q946 文獻標志碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.07.020

牛大力（Millettia speciosa Champ.）又名美麗崖豆藤，別名牛大力藤、大力牛、山蓮藕、坡蓮藕、地藕、血藤等[1]，為豆科（Leguminosae）崖豆藤屬（Millettia Wight et Arn.）植物，生于灌叢、疏林和曠野中，產于我國廣東、廣西、海南等地。始載于《生草藥性備要》[2]，稱大力牛，近代本草書籍中多有收載。其根入藥，具補虛潤肺、強筋活絡之功效，民間用于治療肺虛咳嗽、腎虛帶下、腰肌勞損、風濕麻痹、病后體虛等癥[3]。20世紀70年代開始作為壯腰健腎丸、強力健身膠囊、舒筋健腰丸等的原料用于中成藥生產，是中國南方地區(qū)民間廣泛采用的藥食兩用植物。研究表明，牛大力根及葉中含有齊墩果烷型三萜皂苷、異黃酮類、查爾酮類、多糖、香豆素、生物堿[4-7]等成分，具有較明顯的抗炎、免疫調節(jié)、抗氧化和清除自由基作用[7-10]。本研究課題組前期從牛大力莖中分離鑒定了異黃酮類、查爾酮類及甾體類成分，分析了牛大力葉的脂溶性成分[11]。牛大力是一味具有多種藥理作用和良好保健功效的中草藥，為進一步完善對牛大力植物化學成分的研究，課題組采用索氏提取法和溶劑萃取法提取牛大力花苞、花朵和果莢的脂溶性成分，采用氣相色譜質譜聯(lián)用（GC-MS）的方法對脂溶性成分進行鑒定、歸類和分析，并對牛大力花苞-花朵-嫩果莢共有的脂溶性成分變化規(guī)律進行初探，旨在為今后開展牛大力花、果等系列保健食品的研制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物樣品

供試植物材料（花苞、花朵、嫩果莢）于2015年9月采自海南省儋州市番加森林保護區(qū)，由中國熱帶農業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所王祝年研究員鑒定為豆科崖豆藤屬植物牛大力（Millettia speciosa Champ.），標本編號為As20150912，保存于中國熱帶農業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所。

1.1.2 儀器

HP6890/HP5973MSD GC-MS聯(lián)用儀（美國Hewlett-Packard 公司）；N-1001D-WA（D）旋轉蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會社）；SHZ-DIII循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；索氏提取器（杭州曠維實驗室設備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 脂溶性成分的提取

分別取適量干燥的牛大力花苞、花朵、嫩果莢粗粉，用濾紙筒裝好，置于索氏提取器中，加入適量甲醇回流提取，將提取液減壓回收甲醇至無甲醇味，得到粗提物；將粗提物分散于水中形成懸濁液，用石油醚萃取，經減壓濃縮得到脂溶性成分。

1.2.2 GC-MS分析條件

（1）氣相色譜條件。色譜柱為HP-5MS 5% Phenyl Methyl Siloxane（30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細管柱，柱溫45℃（保留2 min），以5℃/min升溫至320℃，保持2 min；汽化室溫度250℃；載氣為高純度He（99.999%）；柱前壓7.62 psi，載氣流量1.0 mL/min；進樣量1 μL；分流比40∶1，溶劑延遲時間4 min。

（2）質譜條件。離子源為EI源；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；電子能量70 eV；發(fā)射電流34.6 μA；倍增器電壓1 108 V；接口溫度280℃；質量范圍20～450 amu。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理及質譜檢索

通過HPMSD化學工作站，結合NIST2005標準質譜圖庫和WILEY275質譜圖庫進行鑒定，采用色譜峰面積歸一化法計算相對含量。

2 結果與分析

2.1 牛大力花苞、花朵和果莢脂溶性成分GC-MS總離子流色譜

在本實驗條件下，牛大力花苞、花朵和果莢脂溶性成分GC-MS總離子流色譜圖如圖1～3，分析結果見表1。

2.2 牛大力花苞、花朵和果莢脂溶性成分分析

從牛大力的花苞脂溶性成分中鑒定出24個化合物，占總脂溶性成分的88.31%。主要化學成分種類為：烷烴和烯烴類10個（52.00%）、醇類3個（17.46%）、苯基及其衍生物類1個（3.16%）、脂肪酸類4個（3.39%）、其他類6個（9.04%）。含量在2%以上的成分有環(huán)二十四烷（27.35%）、β-香樹脂醇（10.66%）、三十一烷（10.34%）、環(huán)二十八烷（8.18%）、2-十八烷氧基-乙醇（3.88%）、1-三十烷醇（3.58%）、1-二十六醛（3.53%）、γ-谷甾醇（3.22%）、2，4-二叔丁基苯酚（3.16%）、油酸胺（2.99%）、辛酞酯（2.08%）、β-香樹脂醇乙酸酯（2.03%）。

從牛大力的花朵脂溶性成分中鑒定出29個化合物，占總脂溶性成分的91.38%。主要化學成分種類為：烷烴和烯烴類13個（60.64%）、醇類4個（17.18%）、脂肪酸類3個（3.92%）、苯基及其衍生物類1個（3.68%）、其他類8個（6.14%）。含量在2%以上的成分有：三十一烷（18.58%）、二十七烷（9.59%）、三十三烷（8.69%）、環(huán)二十四烷（7.51%）、二十九烷（7.44%）、α-香樹脂醇（6.49%）、環(huán)阿廷醇（4.82%）、環(huán)鴉片甾烯醇（4.21%）、2，4-二叔丁基苯酚（3.68%）、環(huán)二十八烷（3.53%）、辛酞酯（2.25%）、油酸胺（2.09%）。

從牛大力的果莢脂溶性成分中鑒定出32個化合物，占總脂溶性成分的80.01%。主要化學成分種類為：烷烴和烯烴類18個（32.56%）、苯基及其衍生物類4個（22.46%）、脂肪酸類4個（12.54%）、醇類2個（4.17%）、其他類4個（9.28%）。含量在2%以上的成分有2，4-二叔丁基苯酚（19.28%）、棕櫚酸（9.39%）、二十九烷（5.49%）、長葉烯（4.20%）、環(huán)二十八烷（2.86%）、橄欖酸酰胺（2.81%）、1-二十六醛（2.80%）、辛酞酯（2.73%）、7，9-二叔丁基-1-氧雜螺（4，5）癸-6，9-二烯-2，8-二酮（2.72%）、1，30-三十烷二醇（2.62%）、二十一烷（2.23%）。

2.3 牛大力花苞、花朵和果莢脂溶性成分中的共有化學成分及其含量變化

牛大力花苞、花朵和果莢的脂溶性成分均含有較多的烷烴和烯烴類成分，6個化合物為共有成分，其中的4個化合物[2，4-二叔丁基苯酚、7，9-二叔丁基-1-氧雜螺（4，5）癸-6，9-二烯-2，8-二酮、棕櫚酸、辛酞酯]含量從花苞-花朵-果莢呈現(xiàn)逐漸上升的過程，尤其以2，4-二叔丁基苯酚（3.16%～3.68%～19.28%）、棕櫚酸（1.79%～1.72%～9.39%）上升較為明顯，說明在牛大力從花苞-花朵-果莢的發(fā)育過程中，這4個化合物是逐漸積累的，為發(fā)育過程中次生代謝產物逐漸積累的表現(xiàn)，直至發(fā)育成果莢時含量達到最高峰，成為果莢的主要成分；而另外2個化合物的含量從花苞-花朵-果莢呈現(xiàn)逐漸下降的過程，分別為1-二十六醛（3.53%～0.39%～2.80%）和環(huán)二十八烷（8.18%～3.53%～2.86%），說明在牛大力從花苞-花朵-果莢的發(fā)育過程中，這2個化合物是逐漸消減的，為發(fā)育過程中次生代謝產物消減轉化或分解的表現(xiàn)。

除以上三者均有的6個化合物外，牛大力花苞和花朵的脂溶性成分還有9個化合物為共有成分，分別為棕櫚酸酰胺、油酸胺、硬脂酰胺、棕櫚酸二甘酯、環(huán)二十四烷、三十烷、三十一烷、三十二烷、和γ-谷甾醇，其中環(huán)二十四烷從花苞-花朵呈現(xiàn)下降過程，直至果莢時已完全消失，含量變化為：27.35%～7.51%～0%，同樣，γ-谷甾醇從花苞-花朵也呈現(xiàn)下降過程，直至果莢時已完全消失，含量變化為：3.22%～1.66%～0%；說明牛大力花苞-花朵-果莢的發(fā)育過程中，這幾個化合物含量是逐漸消減的，為發(fā)育過程中次生代謝產物消減分解或轉化的表現(xiàn)，直至發(fā)育成果莢時完全消失，因此，在果莢時期并未發(fā)現(xiàn)該化合物；而三十一烷從花苞-花朵呈現(xiàn)積累過程，含量變化為：10.34%～18.58%，而在果莢中并未發(fā)現(xiàn)該化合物，說明該化合物為花苞和花朵的共有化合物，該化合物隨著花苞的發(fā)育逐漸積累，直至花朵達到最高峰?；ǘ渥曰ㄊ诜酆?，在發(fā)育成果莢時，該化合物已經轉化或分解，因此，在果莢時期并未發(fā)現(xiàn)該化合物。

結合表1可以看出，花苞和花朵的脂溶性成分較為相似，均含有較多的烷烴、烯烴和醇類成分。這也說明了同為花期，牛大力花苞和花朵的成分相似，但隨著逐漸發(fā)育，相同的成分含量會有所變化，有利于進一步發(fā)育成為果莢的成分含量會逐漸上升，直至果莢時期積累到最高峰；相反的則逐漸下降，直至消失。

3 討論與結論

本研究采用索氏提取法和溶劑萃取法分別提取牛大力花苞、花朵和果莢的脂溶性成分，經GC-MS分析，從花苞脂溶性成分中鑒定出24個化合物，占總脂溶性成分的88.31%，主要為烷烴和烯烴類（52.00%）、醇類（17.46%）化合物；從花朵脂溶性成分中鑒定出29個化合物，占總脂溶性成分的91.38%，主要為烷烴和烯烴類（60.64%）、醇類（17.178%）化合物；從果莢脂溶性成分中鑒定出32個化合物，占總脂溶性成分的80.01%，主要為烷烴和烯烴類（32.56%）、苯基及其衍生物類（22.46%）、脂肪酸類（12.54%）化合物，其中6個化合物為三者共有成分，而花苞和花朵的共有成分為15個。

根據(jù)GC-MS分析結果可知，牛大力花苞、花朵和果莢的脂溶性成分均含有較多的烷烴和烯烴類成分，而花苞和花朵的脂溶性成分較為相似，均含有較多的烷烴和烯烴類成分和醇類成分。

牛大力花苞、花朵和果莢的脂溶性成分中有6個共有成分，其中以2，4-二叔丁基苯酚的積累變化最為明顯，呈現(xiàn)逐漸積累的過程，直至果莢時期含量最高，即花苞（3.16%）<花朵（3.68%）<果莢（19.28%），也是果莢含量最高的脂溶性成分。2，4-二叔丁基苯酚是重要的通用型酚類抗氧化劑，它可作為橡膠及塑料的防老劑、石油產品及食品的抗氧化劑等，用途十分廣泛[12]。這一結論揭示了牛大力果莢具有較好的開發(fā)價值，為以牛大力果莢為原料，開發(fā)植物抗氧化劑及抗氧化食品等提供了重要信息。此外，在牛大力果莢中還發(fā)現(xiàn)了含量較高的長葉烯（4.20%）。長葉烯[13]是從重級松節(jié)油提取出來的一種天然香料，具有特殊的化學活性，是合成樹脂、合成香料、浮選劑和有機合成的原料，利用長葉烯可生產制造異長葉烯，異長葉烯酮等產品，用于香精的調配可代替某些價格昂貴的香料。

陳德力[14]等報道了牛大力根脂溶性成分主要為苯基及其衍生物、不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸酯以及維生素E等。我們曾報道牛大力葉脂溶性成分存在高含量的維生素E、亞麻酸乙酯、γ-谷甾醇、棕櫚酸乙酯等。可見，牛大力花、果莢、葉及根脂溶性成分存在一定的差異，但也揭示了牛大力不同部位的開發(fā)價值。

研究表明，牛大力作為嶺南地區(qū)著名的藥食兩用植物，其藥效活性與其烯烴類、不飽和脂肪酸酯類、苯基及其衍生物類、以及維生素E等成分具有一定的相關性，本次研究闡明了牛大力花苞、花朵和果莢脂溶性成分的物質基礎，為拓展牛大力花、果等的開發(fā)提供參考依據(jù)。

參考文獻

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會. 中國植物志（第四十卷）[M]. 北京：科學出版社，1994：126.

[2] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳. 廣西中藥材標準（1990年版）[S]. 南寧：廣西科學技術出版社，1992：31-32.

[3] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草（第十一卷）[M]. 上海：上?？茖W科技出版社，1999：571-572.

[4] Uchiyama T， Furukawa M， Isobe S， et al. New oleanane-type triterpene saponins from Millettia speciosa [J]. Heterocycles， 2003， 60（3）： 655-661.

[5] 宗鑫凱，賴富麗，王祝年，等. 牛大力化學成分研究[J]. 中藥材，2009，32（4）：520-521.

[6] 王春華，王 英，王國才，等. 牛大力的化學成分研究[J]. 中草藥，2008，39（7）：972-975.

[7] 鄭元升. 牛大力多糖的提取及其藥理活性研究[D]. 廣州：暨南大學，2009.

[8] 韋翠萍，劉丹丹，唐立海，等. 牛大力對小鼠免疫功能的影響[J]. 廣州中醫(yī)藥大學學報，2009，26（6）：539-542.

[9] 石 焱，弓小雪，那 婕. 牛大力多糖對免疫抑制小鼠的免疫調節(jié)作用[J]. 臨床軍醫(yī)雜志，2008，36（4）：530-531.

[10] 劉丹丹，唐立海，王 艷，等. 牛大力祛痰、鎮(zhèn)咳和平喘作用的實驗研究[J]. 廣州中醫(yī)藥大學學報，2009，26（3）：266-269.

[11] 賴富麗，王祝年，王建榮，等. 牛大力藤葉脂溶性成分的GC-MS分析[J]. 熱帶作物學報，2009，30（5）：714-717.

[12] 吳松海，賈紹義. 2，4-二叔丁基苯酚連續(xù)精餾技術的開發(fā)[J]. 天津化工，2002，5：1-3.

[13] 劉 兵，彭 晗，徐 徐，等. 高純度長葉烯的合成[J]. 南京林業(yè)大學學報（自然科學版），2015，39（2）：116-120.

[14] 陳德力，弓 寶，劉洋洋，等. 牛大力根脂溶性成分的GC-MS分析[J]. 陜西中醫(yī)，2015，36（9）：1 248-1 250.