HPLC法同時(shí)測定檸檬果實(shí)中11種類黃酮含量

涂勛良，陽姝婷，吳忠旺，吳傳雪，張利，呂秀蘭*

?

HPLC法同時(shí)測定檸檬果實(shí)中11種類黃酮含量

涂勛良1，陽姝婷1，吳忠旺2，吳傳雪1，張利2，呂秀蘭1*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，四川成都611130；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，四川雅安625014)

以四川安岳、云南瑞麗、廣東河源的尤力克檸檬和重慶北碚的里斯本、北京檸檬、粗檸檬為材料，建立了HPLC法同時(shí)測定檸檬果實(shí)中11種類黃酮(橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、蕓香柚皮苷、圣草枸櫞苷、橙皮素、柚皮素、木犀草素、川陳皮素、圣草素、蘆丁)含量的方法。結(jié)果顯示：以乙腈–0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測波長287 nm，11種類黃酮在50 min 內(nèi)完全分離，線性范圍為0.010 0~100.000 0 μg/mL(R=0.999 9~ 1.000 0)，檢出限為0.020~0.079 μg/mL，定量限為0.065~0.263 μg/mL，加標(biāo)回收率為95.49%~103.10%，為0.81%~1.20%；6個(gè)供試材料果皮中的橙皮苷、圣草枸櫞苷和蕓香柚皮苷的含量分別在14.42~27.37、0.10~9.38、0.18~0.52 mg/g，以橙皮苷含量最高，其他8種成分的含量未超過0.50 mg/g或未檢出；果汁中的橙皮苷和蕓香柚皮苷的含量分別為6.64~7.42和0.03~0.15 mg/g，圣草枸櫞苷的含量為0.03~0.17 mg/g(里斯本和北京檸檬未檢出)，蘆丁的含量在0.08~0.13 mg/g(里斯本未檢出)，川陳皮素在四川安岳尤立克、里斯本和粗檸檬中的含量分別為0.05、0.06、0.06 mg/g，其他6種成分均未檢出。結(jié)果表明，不同品種檸檬果實(shí)中類黃酮含量存在差異，不同產(chǎn)地的尤立克品種間的類黃酮含量也存在差異。

檸檬；類黃酮；高效液相色譜；同時(shí)測定

柑橘類黃酮是由一系列黃酮類化合物組成的功能化合物[1]，廣泛存在于檸檬[2]、佛手[3]、柚類[4]、橙類[5]、寬皮柑橘[6]等各種柑橘的果實(shí)、花及葉中。類黃酮具有抗氧化[7]、抗炎[8]、抗癌[8]、抑菌[9]等多種生理活性，是植物化學(xué)研究的熱點(diǎn)成分之一。柑橘果實(shí)中橙皮苷、柚皮苷和多甲氧基黃酮現(xiàn)已有農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[10-11]。迄今為止從柑橘中鑒定出的類黃酮單體有60余種，主要包括黃烷酮類、黃酮醇類和黃酮類[12]。在檸檬果皮中主要含有橙皮苷、圣草枸櫞苷、蘆丁、楊梅黃酮以及少量的柚皮蕓香苷、柚皮苷、新橙皮苷，還有多甲氧基黃酮醇(如橙黃酮、川陳皮素、紅橘素)等20多種類黃酮，而果汁中所含類黃酮種類僅比果皮少1種[2]。

高效液相色譜法（HPLC）是檢測類黃酮含量的主要方法，具有高效、高靈敏度、快速、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。張?jiān)返萚13]采用HPLC對溫州蜜柑、椪柑果皮和果肉中18種類黃酮進(jìn)行了同時(shí)測定，發(fā)現(xiàn)不同柑橘品種和不同部位的類黃酮種類和含量存在一定差異。方波等[4]采用超高效液相色譜（UPLC）對10種柚類和柚雜種果皮、果肉中11種類黃酮進(jìn)行了同時(shí)測定，發(fā)現(xiàn)不同柚品種、柚雜種果實(shí)類黃酮種類及含量差異顯著，其累積規(guī)律與品種有關(guān)，雜種后代果實(shí)的類黃酮受其親本影響。Caristi等[14]采用HPLC–DAD–MS–MS對意大利西西里島的3個(gè)檸檬栽培種果汁中的圣草枸櫞苷、橙皮苷和香葉木苷進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)3種檸檬果汁中的3種主要成分及其微量成分的含量存在差異。Peterson等[15–16]、Zhang等[17]發(fā)現(xiàn)酸橙以柚皮苷和新橙皮苷為主，甜橙和寬皮柑橘以橙皮苷和蕓香柚皮苷為主，檸檬以橙皮苷和圣草枸櫞苷為主，柚類則富含柚皮苷、蕓香柚皮苷。目前少有文獻(xiàn)比較不同檸檬品種中多種類黃酮含量.采用HPLC法對不同產(chǎn)地和不同品種檸檬果實(shí)中類黃酮物質(zhì)組分和含量進(jìn)行差異性比較分析，對完善和提高檸檬果實(shí)品質(zhì)評價(jià)具有重要意義。

為了提高檸檬副產(chǎn)物的利用價(jià)值和加快檸檬產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，本研究以6個(gè)來自不同產(chǎn)地和不同品種的檸檬為材料，選取11種類黃酮化合物(橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、蕓香柚皮苷、圣草枸櫞苷、橙皮素、柚皮素、木犀草素、川陳皮素、圣草素、蘆丁)作為目標(biāo)成分，建立了同時(shí)測定檸檬果品中11 種類黃酮化合物含量的HPLC法，研究不同檸檬果實(shí)中類黃酮種類及含量差異，旨在為檸檬類黃酮定量檢測提供參考，為檸檬資源綜合利用、資源評價(jià)及深度開發(fā)提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

以四川安岳尤力克檸檬、云南瑞麗尤力克檸檬、廣東河源尤力克檸檬和中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所國家柑桔種質(zhì)資源圃(重慶北碚)的里斯本、北京檸檬、粗檸檬為材料。

試劑：橙皮苷(純度98.23%)、新橙皮苷(純度99.35%)、柚皮苷(純度99.00%)、蕓香柚皮苷(純度99.35%)、圣草枸櫞苷(純度99.00%)、橙皮素(批號純度98.50%)、柚皮素(純度98.50%)、木犀草素(純度98.80%)、川陳皮素(純度98.50%)、圣草素(純度99.50%)、蘆丁(純度96.67%)標(biāo)準(zhǔn)品購自成都曼斯特生物科技有限公司，各標(biāo)準(zhǔn)品純度均滿足定量檢測需求；乙腈(色譜純)和甲醇(色譜純)購自美國Fisher公司；甲酸(分析純)購自成都科龍化工試劑廠；自制超純水。

儀器與設(shè)備：LC–20AB型HPLC儀(日本Shimadzu公司)；LGJ–12冷凍干燥機(jī)(北京松源華興科技發(fā)展有限公司)；FW–80高速萬能粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；SB–600DTD超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；UPH–Ⅱ–20T超純水機(jī)(四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司)；BT124S電子天平(德國Sartorius公司)。-

1.2方法

1.2.1樣品采集

試驗(yàn)于2015年進(jìn)行。根據(jù)當(dāng)?shù)貦幟使麑?shí)成熟狀況適時(shí)采收，其中，安岳尤力克于10月22日采收；瑞麗尤力克于8月31日采收；河源尤力克與9月18日采收；北培里斯本、北京檸檬和粗檸檬于10月30日采收。每個(gè)品種選取5株生長勢、樹形基本一致的成年結(jié)果樹，每株從樹冠東、南、西、北、中5個(gè)方向各采5個(gè)同一成熟度的成熟果實(shí)，按品種進(jìn)行混合，帶回實(shí)驗(yàn)室，于?20 ℃冷藏。

1.2.2液相色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB–C18(250 mm× 4.6 mm, 5 μm)；柱溫30 ℃；進(jìn)樣體積10 μL；流速1.0 mL/min。檢測波長為287 nm。以乙腈–0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫程序見表1。

表1　流動(dòng)相梯度洗脫程序

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

精確稱取橙皮苷5.00 mg、新橙皮苷5.02 mg、柚皮苷5.10 mg、蕓香柚皮苷5.05 mg、圣草枸櫞苷5.05 mg、橙皮素5.06 mg、柚皮素5.20 mg、木犀草素5.04 mg、川陳皮素5.03 mg、圣草素5.15 mg、蘆丁5.07 mg于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇(色譜純)溶解并定容至10 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。采用梯度稀釋法用甲醇(色譜純)將各標(biāo)準(zhǔn)品儲備液配制成一系列質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，?20 ℃保存，備用。

1.2.4供試樣品溶液制備

參照Caristi等[14]的方法稍作改進(jìn)。

檸檬果皮樣品制備：分別隨機(jī)選取各試樣果實(shí)5個(gè)，剝離果皮和果肉，將果皮冷凍干燥至含水量小于5%，經(jīng)FW–80高速萬能粉碎機(jī)粉碎后，?20 ℃保存，備用。準(zhǔn)確稱取已制備好的果皮樣品0.5 g置于50 mL帶塞三角瓶中，加80%甲醇20 mL，超聲提取2次，每次50 ℃、300 W、30 min。過濾，合并提取液，定容至50 mL，?20 ℃保存，備用。

檸檬果汁樣品制備：將剝離后的檸檬果肉采用壓榨法制取果汁，用雙層紗布過濾后，?20 ℃保存，備用。準(zhǔn)確吸取已制備好的果汁樣品2.00 mL置于50 mL帶塞三角瓶中，加入80%甲醇20 mL，超聲提取2次，每次50 ℃、300 W、30 min。合并提取液，并定容至50 mL，?20 ℃保存，備用。

1.2.5方法學(xué)考察

1) 精密度試驗(yàn)。精確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算11種類黃酮的。

2) 穩(wěn)定性試驗(yàn)。精確吸取安岳尤力克果皮供試品溶液，取10 μL分別于0、2、4、6、8、12和24 h后進(jìn)樣測定，以峰面積計(jì)算11種類黃酮的。

3) 重現(xiàn)性試驗(yàn)。精確吸取安岳尤力克果皮供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算11種類黃酮的。

4) 加標(biāo)回收率試驗(yàn)。精確吸取已知11種類黃酮含量的安岳尤力克果皮供試品溶液，加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算11種類黃酮的加標(biāo)回收率。

1.2.6供試樣品的測定

檸檬果皮和果汁樣品溶液測定前分別經(jīng)0.22 μm微孔有機(jī)濾膜過濾，取10 μL按1.2.2的色譜條件進(jìn)行分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計(jì)算果皮和果汁樣品中11種類黃酮的含量。

2　結(jié)果與分析

2.1HPLC分析結(jié)果

11種類黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC 色譜圖見圖1。在優(yōu)化好的色譜條件下，混合標(biāo)準(zhǔn)品中各類黃酮成分分離度均大于1.8，分離效果極佳，且目標(biāo)峰形尖銳，對稱性好，因此本方法適合檸檬類黃酮化合物的測定。

1 圣草枸櫞苷；2蘆丁；3 蕓香柚皮苷；4柚皮苷；5 橙皮苷；6 新橙皮苷；7 圣草素；8 木犀草素；9 柚皮素；10 橙皮素；11 川陳皮素。

以峰面積為縱坐標(biāo)()，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)()，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由表2可見，圣草枸櫞苷、橙皮苷等11種類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度和相應(yīng)峰面積呈良好的線性關(guān)系，11種類黃酮的檢出限為0.020~0.079 μg/mL，定量限為0.065~0.263 μg/mL。

表2　11種類黃酮的線性關(guān)系、檢出限和定量限

2.2方法學(xué)考察結(jié)果

精密度試驗(yàn)結(jié)果顯示11種類黃酮的峰面積為0.26%~0.51%，表明該方法精密度良好；24 h內(nèi)測得11種類黃酮的峰面積均小于3.0%，表明該方法穩(wěn)定性好。重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果顯示11種類黃酮的峰面積均小于2.0%，表明該方法重現(xiàn)性好。由表3可見，11種類黃酮的加標(biāo)回收率為95.49%~103.10%，為0.81%~1.20%，表明該方法具有較高的準(zhǔn)確度。

表3　11種類黃酮回收試驗(yàn)結(jié)果

2.3供試樣品類黃酮含量的測定結(jié)果

由表4可見，不同品種檸檬果實(shí)中類黃酮種類和含量差異明顯。在6個(gè)檸檬品種中，橙皮苷含量最多，果皮含量為14.42~27.37 mg/g，明顯高于果汁(6.64~7.42 mg/g)。果皮中橙皮苷含量由大到小依次為：瑞麗尤力克、北培里斯本、粗檸檬、河源尤力克、北京檸檬、安岳尤力克；果汁中橙皮苷含量遠(yuǎn)高于其他10種成分，橙皮苷含量由大到小依次為：瑞麗尤力克、河源尤力克、安岳尤力克、北培里斯本、粗檸檬、北京檸檬。圣草枸櫞苷含量(果皮0.10~9.38 mg/g)次之，果皮中圣草枸櫞苷含量由大到小依次為：瑞麗尤力克、河源尤力克、北京檸檬、安岳尤力克、粗檸檬、北培里斯本。蕓香柚皮苷含量(果皮中為0.18~0.52 mg/g，果汁為0.03~0.15 mg/g)較少。其他9種類黃酮的含量均未超過0.50 mg/g，柚皮苷、新橙皮苷、圣草素、木犀草素、柚皮素、橙皮素在6個(gè)果汁樣品中均未檢出。

3　結(jié)論與討論

Sun等[18]采用HPLC–PAD在波長280 nm下同時(shí)檢測柑橘果實(shí)不同部分中的5種類黃酮，在35 min內(nèi)完全分離；張?jiān)返萚13]采用HPLC法同時(shí)檢測柑橘果實(shí)中18種類黃酮，在42 min內(nèi)完全分離。Goulas等[19]采用HPLC–DAD法同時(shí)檢測柑橘果實(shí)中16種類黃酮，70 min內(nèi)完全分離；Nogata等[20]采用HPLC–UV 法在波長285 nm下同時(shí)檢測柑橘果實(shí)中17種類黃酮，在100 min內(nèi)完全分離。本試驗(yàn)采用HPLC–UV 法，以乙腈–0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，在波長287 nm下同時(shí)檢測不同品種檸檬果實(shí)中11種類黃酮，能在50 min內(nèi)完全分離。該方法具有良好的精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及高回收率等特點(diǎn)，可作為檸檬樣品中多種類黃酮含量測定的分析方法。

柑橘類黃酮研究已有大量報(bào)道，主要集中在橙類[15]、柚類[16–17]、寬皮柑橘[6，21]3大類，枸櫞類(包括檸檬)研究相對偏少，尤其是不同品種間的比較。本試驗(yàn)對供試材料類黃酮的檢測結(jié)果表明6個(gè)供試材料果實(shí)主要以橙皮苷、圣草枸櫞苷為主，與Peterson等[16]和Wang等[22–23]所測結(jié)果一致。不同品種檸檬果實(shí)中類黃酮含量存在差異，可作為品種識別的重要依據(jù)。尤立克是目前國內(nèi)的主要栽培品種，果實(shí)中的類黃酮含量高于里斯本、北京檸檬和粗檸檬3個(gè)品種，且3個(gè)產(chǎn)地的尤立克品種間也存在差異，這可能與生態(tài)環(huán)境、成熟度、采收期及采后儲運(yùn)等有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] Bhagwat S，Haytowitz D B，Holden J M．USDA database for the flavonoid content of selected foods[EB/OL] (2014–05)[2016–06–16]http://www.Ars.usda.gov/SP2UserFiles/Place/80400525/Data/Flav/Flav_R03–1.pdf．

[2] 于玉涵，焦必寧．檸檬中類黃酮的含量分析和檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J]．食品工業(yè)科技，2011，32(12)：518–523．

[3] 姜艷艷，張樂，劉娟，等．香櫞、佛手中黃酮類成分含量測定及HPLC特征圖譜研究[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(20)：103–107．

[4] 方波，趙其陽，席萬鵬，等．十種柚類及柚雜種果實(shí)中類黃酮含量的超高效液相色譜分析[J]．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46(9)：1892–1902．

[5] 李利改，席萬鵬，張?jiān)罚龋袊赜懈涕賹僦参锘绢愋筒煌M織類黃酮含量分析[J]．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46(22)：4753–4762．

[6] 張菊華，李志堅(jiān)，單楊，等．柑桔鮮果皮中類黃酮含量比較與分析[J]．中國食品學(xué)報(bào)，2015，15(5)：233–240．

[7] Ghasemi K，Ghasemi Y，Ebrahimzadeh M A，et al. Antioxidant activity，phenol and flavonoid contents of 13 citrus species peels and tissues[J]．Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences，2009，22(3)：277–281．

[8] Benavente-Garcia O，Castillo J．Update on uses and properties of citrus flavonoids：new findings in anticancer，cardiovascular，and anti-inflammatory activity [J]．Journal of Agricultural and Food Chemistry，2008，56(15)：6185–6205．

[9] Yi Z B，Yu Y，Liang Y Z，et al．Inantioxidant and antimicrobial activities of the extract ofof a new citrus cultivar and its main flavonoids[J]．LWT-Food Science and Technology，2008，41(4)：597–603．

[10] NY/T 2014—2011柑桔類水果及制品中橙皮苷、柚皮苷含量的測定[S]．

[11] NY/T 2336—2013柑橘及制品中多甲氧基黃酮含量的測定(高效液相色譜法)[S]．

[12] Tripoli E，La Guardia M，Giammanco S，et al．Citrus flavonoids：molecular structure，biological activity and nutritional properties：a review[J]．Food Chemistry，2007，104(2)：466–479．

[13] 張?jiān)罚苤練J，孫玉敬，等．高效液相色譜法同時(shí)測定柑橘果實(shí)中18 種類黃酮的含量[J]．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45(17)：3558–3565．

[14] Caristi C，Bellocco E，Panzera V，et al．Flavonoids detection by HPLC–DAD–MS–MS in lemon juices from Sicilian varieties[J]．Journal of Agricultural and Food Chemistry，2003，51(12)：3528–3534．

[15] Peterson J J，Dwyer J T，Beecher G R，et al．Flavanones in oranges，tangerines (mandarins)，tangors and tangelos：a compilation and review of the data from the analytical literature[J]．Journal of Food Composition and Analysis，2006，19(5)：66–73．

[16] Petersona J J，Beecherb G R，Bhagwatc S A，et al. Flavanones in grapefruit，lemons，and limes：A compilation and review of the data from the analytical literature[J]．Journal of Food Composition and Analysis，2006，19(5)：74–80．

[17] Zhang M X，Duan C Q，Zang Y Y，et al．The flavonoid composition of flavedo and juice from the pummelo cultivar ((L.) Osbeck) and the grapefruit cultivar() from China[J]．Food Chemistry，2011，129(4)：1530–1536．

[18] Sun Y，Wang J，Gu S，et al．Simultaneous determination of flavonoids in different parts of citrus reticulata ‘Chachi’ fruit by high performance liquid chromatography- photodiode array detection[J]．Molecules，2010，15(8)：5378–5388．

[19] Goulas V，Manganaris G A．Exploring the phytochemical content and the antioxidant potential of citrus fruits grown in Cyprus [J]．Food Chemistry，2012，131(1)：39–47．

[20] Nogata Y，Sakamoto K，Shiratsuchi H，et al．Flavonoid composition of fruit tissues of citrus species[J]. Bioscience，Biotechnology and Biochemistry，2006，70(1)：178–192．

[21] Levaj B，Dragovi?-Uzelac V，Kova?evi? D B，et al. Determination of flavonoids in pulp and peel of mandarin fruits[J]．Agriculture Conspectus Scientificus，2009，74(3)：221–225．

[22] Wang Y C，Chuang Y C，Ku Y H．Quantitation of bioactive compounds in citrus fruits cultivated in Taiwan[J]．Food Chemistry，2007，102(4)：1163–1171．

[23] Wang Y C，Chuang Y C，Hsu H W．The flavonoid，carotenoid and pectin content in peels of citrus cultivated in Taiwan[J]．Food Chemistry，2008，106(1)：277–284．

Simultaneous determination of eleven flavonoids in different lemon () varieties by HPLC

Tu Xunliang1, Yang Shuting1, Wu Zhongwang2, Wu Chuanxue1, Zhang Li2, Lü Xiulan1*

(1.College of Horticulture, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China; 2.College of Sciences, Sichuan Agricultural University, Ya’an, Sichuan 625014, China)

Eureka lemon from 3 different areas: Anyue county at Sichuan province, Ruili county of Yunnan province, Heyuan city at Guangdong province and 3 different varieties: Lisben, Mayer lemon and Rough lemon from Beibei region at Chongqing city were used as material, to establish a high performance liquid chromatograph (HPLC) method for the determination of 11 flavonoids, namely, hesperidin, neohesperidin, naringin narirutin, eriocitrin, hesperitin, naringenin, luteolin, nobiletin, eriodictyol and rutin in lemon fruits simultaneously. The results showed that 11 flavonoids were thoroughly separated within 50 min under the condition of using acetonitrile–0.1% formic acid aqueous solution as mobile phase through gradient elution and the detection wavelength was 287 nm. This method exhibited a linear range from 0.010 0 to 100.000 0 μg/mL (the correlation coefficient was from 0.999 9 to 1.000 0). The limits of detection ranged from 0.020 to 0.079 μg/mL, and the limits of quantification ranged from 0.065 to 0.263 μg/mL. The recoveries ranged from 95.49% to 103.10% withbetween 0.81% and 1.20%. Hesperidin was the major flavonoid in six lemon varieties. Content of hesperidin, in six varieties peels was from 14.42 to 27.37 mg/g, eriocitrin was from 0.10 to 9.38 mg/g and narirutin was from 0.18 to 0.52 mg/g. Other 8 compounds in peels was less than 0.50 or not detected. Content of hesperidin in six varieties juice was from 6.64 to 7.42 mg/g, and Content of narirutin was from 0.03 to 0.15 mg/g, content of eriocitrin in juice was from 0.03 to 0.17 mg/g and not detected in Lisben and Mayer lemon, content of rutin in juice was from 0.08 to 0.13 mg/g and not detected in Lisbon from Beibei district at Chongqing, content of nobiletin was 0.05, 0.06 and 0.06 mg/g in juice of Eureka from Anyue county at Sichuan province, Lisben and Rough lemon from Beibei district at Chongqing, other 6 compounds were not detected. The results indicated that the content of flavonoids existed difference in different lemon varieties and Eureka lemon from different areas.

lemon; flavonoids; high performance liquid chromatography (HPLC); simultaneous determination

TS255.1；S666.5

A

1007-1032(2016)05-0543-06

2016–03–28

2016–07–25

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系四川創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)資金項(xiàng)目；四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013FZ0036)

涂勛良(1987—)，男，重慶綦江人，博士研究生，主要從事果樹栽培理論與技術(shù)研究, txl0103@163.com；*通信作者，呂秀蘭，教授，主要從事果樹學(xué)研究，xllvjj@163.com

投稿網(wǎng)址：http://xb.ijournal.cn

責(zé)任編輯：尹小紅

英文編輯：梁和