黃芩苷對STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠腎組織保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究

汪玉芳 黃遠(yuǎn)英

（湯臣倍健股份有限公司 廣東廣州 510663）

黃芩苷對STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠腎組織保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究

汪玉芳 黃遠(yuǎn)英

（湯臣倍健股份有限公司 廣東廣州 510663）

目的 探討黃芩苷對鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎組織的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。方法 將用STZ造模成功的糖尿病大鼠48只，隨機(jī)分為模型組、黃芩苷低、中、高劑量組，每組12只，另設(shè)空白組12只。持續(xù)給藥18周。給藥結(jié)束后測血糖、24小時尿蛋白總量、血漿及腎組織中血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）的含量、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）。結(jié)果 與模型組比較，黃芩苷中、高劑量組能明顯降低糖尿病大鼠血肌酐和24小時尿蛋白量，降低血漿中AngⅡ的含量，減少TGF-β1的表達(dá)。結(jié)論 黃芩苷對糖尿病大鼠腎組織具有較好的保護(hù)作用，其機(jī)制可能通過降低糖尿病大鼠血漿中AngⅡ含量，抑制TGF-β1過度表達(dá)，改善腎小球毛細(xì)血管和基底膜的通透性，對糖尿病大鼠腎臟起保護(hù)作用。

糖尿病 黃芩苷 AngⅡ TGF-β1

糖尿病腎病是糖尿病嚴(yán)重的并發(fā)癥之一,屬微血管病變,其發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜,與醛糖還原酶和蛋白激酶C激活、蛋白非酶糖化、反應(yīng)性氧化應(yīng)激及生長因子作用等多種因素有關(guān)［1］。研究表明,中草藥及其提取成分如黃芩苷等對糖尿病微血管病變具有一定的保護(hù)作用［2］。本實(shí)驗(yàn)通過研究黃芩苷對糖尿病大鼠的干預(yù)作用,探討其對糖尿病大鼠腎組織的保護(hù)作用,并分析其與AngⅡ、TGF-β1的關(guān)系,為中藥預(yù)防與治療糖尿病腎病探索新的防治途徑。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

SD大鼠70只,SPF級,雄性,8周齡,體重180-240克,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。黃芩苷：上海隆壘生物科技有限公司；鏈脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）；美國sigma公司；血糖試紙“安妥”牌：美國雅培公司；黃芩苷：上海隆壘生物科技有限公司；血糖試紙“安妥”牌：美國雅培公司；AngⅡ放免試劑盒：北京北方生物技術(shù)研究所；TGF-β1 （V） sc-146 兔多克隆抗體：南京建成生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1分組及糖尿病大鼠模型制備

全部動物適應(yīng)性飼養(yǎng)7天,造模前稱體重,測量空腹血糖。留取12只作為空白組,其他動物空腹腔注射STZ60mg/Kg體重（溶于新配制的0.lmol/LpH4.4檸檬酸鈉緩沖液中）,以誘發(fā)糖尿病,若空腹血糖16.5mmol/L以上,尿量及飲水明顯增多者列入糖尿病實(shí)驗(yàn)對象,篩選造模成功的糖尿病模型大鼠48只,隨機(jī)分為模型組12只,黃芩苷低、中、高劑量組各12只。

1.2.2各組給藥情況

各組在STZ注射后造模成功后開始進(jìn)行給藥。黃芩苷低、中、高劑量組給予黃芩苷75、150、300 mg/（kg·d）灌胃,空白組與模型組給予等量純水灌胃。

1.2.3檢測各組以下指標(biāo)：

給藥18周末測血糖,微量尿蛋白 （考馬斯亮藍(lán)法） 檢測24h尿蛋白總量；剪取腎組織勻漿,檢測血漿及腎組織中AngⅡ含量,腎組織TGF-β1含量。

表1 各組大鼠血糖值（mmol/L，±sn=12）

表1 各組大鼠血糖值（mmol/L，±sn=12）

注：與空白組比 *P＜0.05,**P＜0.01；與模型組比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01

組 別 　1周 　6周 　12周 　18周空白組 　5.43±0.22 　5.29±0.36 　5.51±0.28 　5.41±0.33模型組 　17.00±18.88±19.03±19.35± 3.39**2.71**2.17**2.28**黃芩苷低17.56±18.07±18.62±18.76±劑量組1.382.112.032.13黃芩苷中18.84±16.22±16.11±15.48±劑量組2.353.313.553.34黃芩苷高17.32±16.95±16.33±15.67 ±劑量組2.842.992.962.87

表2 各組大鼠血肌酐、24小時尿蛋白水平（±s）

表2 各組大鼠血肌酐、24小時尿蛋白水平（±s）

注：與空白組比 *P＜0.05,**P＜0.01；與模型組比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01

組 別 　　鼠數(shù)血肌酐（μmol/L） 　24小時尿蛋白總量（mg）空白組 　12 　76.32±16.27 　2.81±0.37模型組 　12 　36.91±29.64**　60.93±12.33**黃芩苷低劑量組 　12 　201.76±20.35 　44.32±20.87黃芩苷中劑量組 　12 　174.29±28.43ΔΔ　22.77±19.87ΔΔ黃芩苷高劑量組 　12 　156.78±28.43ΔΔ　23.32±23.56ΔΔ

表3 各組大鼠18周末血漿AngⅡ及腎組織AngⅡ含量比較（ˉx ±

表4 黃芩苷對各組大鼠腎組織TGF-β1表達(dá)水平的影響（±s）

表4 黃芩苷對各組大鼠腎組織TGF-β1表達(dá)水平的影響（±s）

注：與空白組比 *P＜0.05,**P＜0.01；與模型組比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01

組 別 　　鼠數(shù) 　　陽性面積率空白組 　12 　0.650±0.078模型組 　12 　2.153±1.219**黃芩苷低劑量組 　12 　1.998±1.324黃芩苷中劑量組黃芩苷高劑量組12 12 1.134±0.185Δ1.028±0.253Δ

1.2.4統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)均采用 SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)均經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn),符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用±s 表示,組間差異性顯著分析采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1一般情況觀察

與空白組相比,各模型組組大鼠出現(xiàn)懶動、毛色干枯、光澤較差、且進(jìn)攻性增強(qiáng)。

2.2 大鼠各期血糖值

如表1所示,黃芩苷低、中、高劑量組及模型組大鼠各期血糖值與空白組相比,具有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.01）；黃芩苷低、中、高劑量組大鼠血糖值與模型組相比,有降低的趨勢,但未觀察到有統(tǒng)計學(xué)差異。

2.3 各組大鼠血肌酐、24h尿蛋白總量比較

實(shí)驗(yàn)第18周末,如表2所示,與空白組相比,模型組大鼠血肌酐、24h尿蛋白含量明顯升高（P＜0.01）；與模型組相比,黃芩苷中、高劑量組大鼠血肌酐、24h尿蛋白含量顯著降低,具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0. 01）。

2.4 血漿AngⅡ與腎組織AngⅡ含量變化：

實(shí)驗(yàn)第18周末,如表3所示,與模型組相比,黃芩苷中、高劑量組大鼠血漿中AngⅡ含量明顯降低（P＜0.05）,而各組大鼠腎組織中AngⅡ含量并無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

2.5 腎組織TGF-β 1的表達(dá)水平

正常大鼠腎組織細(xì)胞胞漿內(nèi),可見少許黃色染色物質(zhì),TGF-β 1呈陰性表達(dá),模型組大鼠腎組織細(xì)胞胞漿或胞膜布滿棕黃色顆粒狀物質(zhì),TGF-β1呈強(qiáng)陽性表達(dá)；由表4可知,模型組腎組織中TGF-β1表達(dá)較空白組顯著升高,與空白組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0. 01）；黃芩苷中、高劑量組較模型組TGF-β1表達(dá)顯著降低,具有統(tǒng)計學(xué)差異（P ＜0.05）。

3 討論

糖尿病高糖狀態(tài)下腎臟內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)較為活躍,血管緊張素Ⅱ可通過增加腎小球囊內(nèi)壓、從而誘導(dǎo)細(xì)胞生長因子的基因表達(dá),促使腎小球系膜細(xì)胞增生肥大、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等一系列途徑刺激膠原蛋白合成、同時減少其降解,最終導(dǎo)致腎小球硬化的發(fā)生。高血糖和血管緊張素Ⅱ等因素協(xié)同作用,通過蛋白激酶-C途徑刺激腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1的轉(zhuǎn)錄［3］。TGF-β1通過自分泌和旁分泌作用增加細(xì)胞外基質(zhì)合成、抑制其降解,因此,TGF-β1與AngⅡ在糖尿病腎小球肥大和基質(zhì)增生中起著非常關(guān)鍵的作用［4］。本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),黃芩苷組血漿AngⅡ含量明顯降低,表明黃芩苷可通過降低血漿中AngⅡ含量過高而阻止其發(fā)生腎損害。同時,黃芩苷組腎小管TGF-β1含量較模型組明顯降低,而TGF-β1的表達(dá)與AngⅡ的含量相互促進(jìn),協(xié)同作用,加重腎損害的發(fā)生。黃芩苷可同時降低血漿AngⅡ和腎小管TGF-β1含量,可以推測黃芩苷通過降低血漿AngⅡ的含量,下調(diào)腎小管TGF-β1活性表達(dá)可能是其防止或改糖尿病腎損害的作用機(jī)制之一。綜上所述,本研究表明,黃芩苷對糖尿病大鼠腎組織具有較好的保護(hù)作用,表現(xiàn)為減少血肌酐和尿白蛋白排泄,抑制腎小球節(jié)段性系膜細(xì)胞增生,有效減輕腎小管空泡變性和腎小管上皮細(xì)胞壞死。其機(jī)制可能通過降低糖尿病大鼠血漿中AngⅡ水平,減少的腎小球TGF-β1的表達(dá),改善腎小球毛細(xì)血管和基底膜的通透性,進(jìn)而有效保護(hù)糖尿病大鼠腎組織。

［1］林善錟.糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中華內(nèi)科雜志，2001，40（11）782-783.

［2］李萍，劉長山.黃芩甙對糖尿病患者紅細(xì)胞醛糖還原酶活性及早期糖尿病腎病的影響［J］.中國老年學(xué)雜志，2001，21：334-335.

［3］ Wolf G，Chen Y，Sharma K，et al.High glucose-induced proliferation in mesangial cells is reversed by autocrine TGF-β［J］. Kidney Int，1992，42：647-656.

［4］Pantsulaia T.Role of TGF-beta in pathogenesis of diabetic nephropathy ［J］.Georgian Med News，2006，131：13-18.

Q3-3

A

1674-2060（2016）03-0017-02

汪玉芳（1982—），女，安徽太湖人，工程師，碩士研究生，研究方向：保健食品的開發(fā)。