白艷紅+胡濤

【摘要】 目的 研究胃黏膜組織中LKB1和ARID1A基因表達與胃癌發(fā)生和發(fā)展的關系。方法 32例手術切除的胃癌組織標本、10例正常胃組織及18例胃炎組織標本利用組織芯片技術， 通過免疫組織化學方法， 檢測LKB1和ARID1A的陽性表達率。結果 在胃癌組織中LKB1和ARID1A陽性率（15.63%、34.38%）較胃炎（66.67%、55.56%）和正常胃組織（80.00%、60.00%）明顯降低（P<0.05）。胃癌伴淋巴結轉移患者LKB1和ARID1A陽性率與胃癌無淋巴結轉移患者比較， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；胃癌不同浸潤深度LKB1和ARID1A陽性率比較， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽性率比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論 LKB1和ARID1A在胃癌組織中的表達缺失， 與胃癌轉移和浸潤密切相關， 且在胃癌發(fā)生發(fā)展的不同環(huán)節(jié)可能為相對獨立而又相互作用的調控基因。

【關鍵詞】 抑癌基因；LKB1；ARID1A；胃癌

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.028

獨有的分子生物學背景促使了胃癌的發(fā)展演變， 而新近發(fā)現(xiàn)LKB1和ARID1A兩種抑癌基因的突變率在胃癌相關組織中可高達70%～80% [1]。為進一步探討LKB1和ARID1A兩種抑癌基因在胃癌組織中的表達及預后關系， 選取本院60例胃黏膜組織標本， 采用組織芯片技術并通過免疫組織化學方法對LKB1和ARID1A進行檢測分析， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選取菏澤市榮軍醫(yī)院病理科2009～2013年經石蠟包埋處理的胃癌組織樣本蠟塊共32例， 其中， 男22例， 女10例， 年齡18～55歲， 平均年齡（39.1±7.3）歲。所有入選患者的病理組織切片均符合國家胃癌協(xié)會合作組織復核標準， 另選10例正常胃組織及18例胃炎組織標本作為對照。

1. 2 組織芯片制作方法 ①空心蠟塊的制作：向空心模具內注入融化的石蠟， 待石蠟凝固后一次性制作成空心蠟塊。②目標組織的定位：先將選取好的樣本蠟塊用德國Leica病理切片機切片， HE染色， 光鏡下， 根據其形態(tài)學變化標注目標組織。③目標組織取樣：將標記好的目標樣本蠟塊標注部位入放組織芯片取樣機， 利用樣本取樣機鉆取蠟塊的目標組織。④制備樣本蠟塊：將鉆取樣本組織放入組織芯片制備機中， 將已溶化的石蠟注入樣本蠟塊制備機中， 冷凝后， 目標芯片蠟塊制備完成。

1. 3 判定標準 采用雙盲法對實驗結果進行閱片， 陽性表達主要以棕黃色顆粒存在于細胞的胞漿或胞膜， 無染色者（+）， 陽性表達率<10%者（++）， >10%部分表達者（+++）， 全部細胞膜染色或>10%胞漿中度以上表達者（++++）。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 LKB1和ARID1A在不同胃黏膜組織中的表達 LKB1陽性表達率最高的是正常胃組織為80.00%， 其次是胃炎組織陽性表達率為66.67%， 均顯著高于胃癌組織的15.63%（P<0.05）；ARID1A的陽性表達率在胃癌組織中為34.38%， 顯著低于正常胃組織的60.00%和胃炎組織的55.56%（P<0.05）。

2. 2 胃癌有無淋巴轉移LKB1和ARID1A陽性率比較 胃癌無淋巴轉移者LKB1陽性率為36.36%（4/11）， 高于胃癌伴淋巴轉移者的4.76%（1/21）（P<0.05）；胃癌無淋巴轉移者ARID1A的陽性率為72.73%（8/11）， 高于胃癌伴淋巴轉移者的14.29% （3/21）（P<0.05）。

2. 3 胃癌不同浸潤深度LKB1和ARID1A陽性率比較 胃癌不同浸潤深度LKB1和ARID1A陽性率比較， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其陽性表達與胃癌浸潤深度負相關。見表1。

2. 4 胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽性率比較 胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽性率比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

LKB1主要使細胞增殖停滯在細胞周期的G1期， 從而促進細胞的凋亡， 另外LKB1對胚胎血管形成還有細胞誘導等多個方面都是具有生物學意義， 同時其還是一種重要的抑癌基因。本研究中檢測到胃癌組織中LKB1基因存在表達下調， LKB1蛋白的缺失表達與胃癌關系緊密聯(lián)系， 且LKB1抑癌作用機制有可能出現(xiàn)一些負性的調節(jié)效果。在本研究中， 通過免疫組織化學方法驗證了LKB1在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的抑制作用， 并且這種基因的表達可能對患者的預后有著重要的幫助作用， 對胃癌患者在延長其術后總體生存時間方面也具有積極作用。

ARID1A基因對腫瘤的抑制作用需要P53蛋白的參與， 而P53蛋白又通過調節(jié)CDKN1A和SMAD3因子使一種染色質重塑因子發(fā)生失活性突變導致腫瘤細胞的再生受到抑制， 從而抑制腫瘤細胞發(fā)生發(fā)展[2]。本研究發(fā)現(xiàn)， 在胃癌組織中ARID1A基因蛋白的表達陽性率明顯低于正常胃組織及炎癥組織， 分析認為其陽性表達與胃癌浸潤深度和淋巴轉移負相關， 而胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

總之， 胃癌形成發(fā)展過程可能與胃癌組織中ARID1A基因凋亡調控作用減弱或消失有關。腫瘤的發(fā)生是多基因參與的復雜過程， 在胃癌發(fā)生發(fā)展中， ARID1A和LKB1可能為相對獨立而又相互作用的抑癌基因， 目前研究較為零散， 二者的抑癌機制仍需進行系統(tǒng)研究。

參考文獻

[1] 夏雷， 莫伏根， 李剛， 等.胃癌中HER-2和HER-3的表達及臨床意義.實用老年醫(yī)學， 2013， 27（11）：903-907.

[2] 閆毓秀， 張淑萍， 滑靜. p53基因研究進展.北京農學院學報， 2009， 24（2）：74-77.

[收稿日期：2016-01-29]