王峻 尹守錚 張妮婭 等

摘要：試驗(yàn)選用120羽1日齡健康科寶500肉雞，分為4組，每組設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6羽雞。各組分別飼喂基礎(chǔ)日糧、基礎(chǔ)日糧+50 mg/kg包膜VC（以VC含量計(jì)，下同）、基礎(chǔ)日糧+100 mg/kg包膜VC、基礎(chǔ)日糧+200 mg/kg包膜VC。試驗(yàn)期為6周，分兩階段進(jìn)行（7～28日齡、29～49日齡）。于第4周和第7周末，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2羽雞，頸靜脈采血，屠宰，測(cè)定血清和組織器官的氧化還原電位、脂質(zhì)過(guò)氧化物以及抗氧化物酶的活性等。結(jié)果表明：①肉雞不同組織中氧化還原電位不同，其中法氏囊的氧化還原電位最高，胸肌氧化還原電位最低。飼料中添加抗氧化劑降低了肝臟、法氏囊和胸肌的表觀氧化還原電位，但提高了腎臟的表觀氧化還原電位。其他組織中變化不規(guī)律。②日糧中添加VC降低了血清中MDA的含量，同時(shí)提高了SOD和GSH-Px的活性；降低了肉雞肝臟MDA含量，同時(shí)提高了其SOD的活性。③日糧中添加VC增加了盲腸有益菌乳酸桿菌的數(shù)量，同時(shí)降低了大腸桿菌的數(shù)量?？梢?jiàn)，日糧中添加抗氧化物質(zhì)可改變雞體內(nèi)表觀氧化還原電位、氧化還原狀態(tài)及盲腸微生物組成。

關(guān)鍵詞：維生素C；肉雞；氧化還原電位

中圖分類號(hào)：S831 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）04-0966-05

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.04.038

Effect of Vitamine C on Endogenouse Redox States of Broilers

WANG Jun1，YIN Shou-zheng2，ZHANG Ni-ya2，CHEN Lei2，QI De-sheng2

（1.Hubei Institute of Veterinary Control， Wuhan 430070，China； 2.College of Animal Science and Technology，

Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China）

Abstract：In this trial 120 one-day-old healthy broilers were divided into 4 treatment groups and fed with basal diet added different dose of VC（0，50，100，200 mg/kg） for six weeks to study the effect of exogenous anti-oxidant（VC） on the lipid peroxdation，antioxidant enzyme，the redox pontential of serum and tissue，and the performance of broiler. On the last day of fourth week and seventh week，two broilers from each replicate were randomly selected and culled to test the activity of lipid peroxdation，antioxidant enzyme and the redox potential of blood serum and tissue. The results showed that the redox potential in each tissue was different，the highest redox potential was in the bursas of Fabricius， and the lowest was in the musculi thoraciss. The apperant redox-potential of the liver， bursa of Fabricius and musculi thoracis in VC treated group was apparently reduced，but the apperant redox-potential of kidney was increased. There was no regularity change on the apperant redox-potential of spleen and thoracic gland. The content of MDA in serum and liver was decreased when the diet of broilers added VC，while the activity of SOD was increased，the activity of GSH-Px in serum was also increased. When added VC in diet，the lactobacilli in cecum were increased， and the bacillus coli were decreased.It indicated that the supplement of exogenous antioxidant could affect the redox state of animal and the population of lactobacilli and bacillus coli in cecum.

Key words：exogenous antioxidant；broiler；redox status

任何生物細(xì)胞只有在一定的氧化還原環(huán)境中才能夠生存。本試驗(yàn)以肉仔雞為試驗(yàn)動(dòng)物，研究了機(jī)體不同組織的氧化還原電位值及外源抗氧化劑對(duì)機(jī)體氧化還原狀態(tài)的影響，研究結(jié)果對(duì)指導(dǎo)相關(guān)飼料添加劑的開(kāi)發(fā)有理論意義和實(shí)際價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

電子分析天平[BS224S型，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；離心機(jī)（TDL-50B型，上海安亭科學(xué)儀器廠）；722型可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；PXS-215型離子活度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)材料

包膜VCⅠ型：武漢某公司惠贈(zèng)，VC含量為94.5%；大腸桿菌培養(yǎng)基：依紅美藍(lán)瓊脂，上海盛思生化科技有限公司生產(chǎn)；乳酸桿菌培養(yǎng)基：MRS瓊脂，上海盛思生化科技有限公司生產(chǎn)；MDA、SOD、GSH-Px試劑盒：南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)日糧

選用120羽1日齡健康科寶500肉雞（購(gòu)于武漢正大康地有限公司），隨機(jī)分為4組，每組設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6羽雞。各組日糧分別為基礎(chǔ)日糧、基礎(chǔ)日糧+50 mg/kg包膜VC（以VC含量計(jì)，下同）、基礎(chǔ)日糧+100 mg/kg包膜VC、基礎(chǔ)日糧+200 mg/kg包膜VC?；A(chǔ)日糧的配制參考NRC（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要量，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)前對(duì)雞舍、雞籠進(jìn)行徹底清掃、熏蒸消毒。于7日齡和21日齡滴鼻點(diǎn)眼接種新城疫低毒力活疫苗，在14和28日齡接種法氏囊疫苗。整個(gè)試驗(yàn)期為6周，分兩階段進(jìn)行（7～28日齡、29～49日齡）。預(yù)試期間所有肉雞飼喂基礎(chǔ)日糧，第七天開(kāi)始正式試驗(yàn)。整個(gè)試驗(yàn)期，雞自由采食和飲水。

1.5 樣品的采集及處理

在4周齡和7周齡末，所有試驗(yàn)雞禁食12 h，只提供飲水。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1羽雞，頸靜脈采血，用于測(cè)定相關(guān)血液指標(biāo)；屠宰，立刻用氧化還原電位計(jì)測(cè)定心臟、肝臟、胸腺、脾臟、腎臟、法氏囊等器官的表觀氧化還原電位。

同時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1羽雞，頸靜脈采血，屠宰，取心臟、肝臟、胸腺、脾臟、腎臟、法氏囊、右側(cè)胸肌和腿肌，剝離脂肪組織后稱重；將心臟、肝臟放入封口袋中，立即放入-20 ℃冰箱保存，用于測(cè)定組織中的脂質(zhì)過(guò)氧化物和抗氧化酶。

1.6 指標(biāo)的測(cè)定

1.6.1 血清及組織中表觀氧化還原電位的測(cè)定

1）血清中表觀氧化還原電位的測(cè)定。將血清倒入小燒杯中，將甘汞電極和鉑電極迅速插入小燒杯中；甘汞電極和鉑電極與離子活度計(jì)相連，穩(wěn)定后讀數(shù)。每次測(cè)定后在超聲波清洗儀中用3 mol/L NaCl清洗鉑電極，再放入生理鹽水中清洗5 min，以除去鉑電極表面黏附的蛋白，然后再進(jìn)行下一個(gè)樣品的測(cè)定。具體方法參考SL94-1994。

2）組織中表觀氧化還原電位的測(cè)定。于第4周和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)屠宰，立刻用離子活度計(jì)測(cè)定心臟、肝臟、胸腺、脾臟、腎臟、法氏囊等器官的表觀氧化還原電位。方法同上。

1.6.2 血清及組織中抗氧化酶和丙二醛（MDA）含量的測(cè)定 丙二醛含量采用硫代巴比妥酸比色法進(jìn)行測(cè)定；超氧化物歧化酶（SOD）活性采用黃嘌呤氧化法進(jìn)行測(cè)定；谷胱苷肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性采用DTNB（5，5-二硫二硝基苯甲酸）比色法進(jìn)行測(cè)定。

1.6.3 盲腸大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量的測(cè)定

1）樣品的采集。分別于第4周和第7周末，每個(gè)重復(fù)取1羽雞，屠宰，取其盲腸，端口結(jié)扎從外端剪斷，放于密閉的樣品袋中，置于-20 ℃冰箱保存。

2）大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量的測(cè)定。以無(wú)菌方法稱取腸道內(nèi)容物0.5 g于10 mL滅菌離心管中，加入無(wú)菌生理鹽水4.5 mL，用漩渦混合儀將稀釋液混勻，吸取上清液1 mL于盛有9 mL無(wú)菌生理鹽水的離心管中依次進(jìn)行倍比稀釋，從10-1至10-6，然后用微量進(jìn)樣器從高倍稀釋液開(kāi)始分別吸取0.1 mL稀釋液滴入各種選擇性培養(yǎng)基，每個(gè)樣品做3個(gè)稀釋度（大腸桿菌選10-3、10-4、10-5，乳酸桿菌選10-4、10-5、10-6），每個(gè)稀釋度做2個(gè)平行，取其平均數(shù)。接種后，用曲玻棒推勻，大腸桿菌37 ℃需氧培養(yǎng)24 h，乳酸桿菌厭氧培養(yǎng)48 h后，對(duì)大腸桿菌和乳酸桿菌進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，以1 g腸道內(nèi)容物中菌群個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)（log10CFU/g）表示。

1.7 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2003初步整理后，利用SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan′s進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)數(shù)值均以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)日糧的氧化還原電位

試驗(yàn)日糧的氧化還原電位見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，抗氧化劑VC的添加降低了試驗(yàn)組日糧的氧化還原電位，并且降低幅度隨著VC添加量的增加而增加。

2.2 血清和組織的表觀氧化還原電位

28日齡肉雞血清和組織的表觀氧化還原電位分別見(jiàn)表3、表4。49日齡肉雞血清和組織的表觀氧化還原電位分別見(jiàn)表5、表6。

表3、表4的結(jié)果表明，在28日齡肉雞機(jī)體血清和組織中，法氏囊的表觀氧化還原電位最高，胸肌的表觀氧化還原電位最低；日糧中抗氧化劑的添加對(duì)肉雞各組織器官的表觀氧化還原電位有不同的影響，處理1和處理2組中降低了血清、肝臟、心臟、脾臟、法氏囊和胸肌的表觀氧化還原電位，升高了腎臟的表觀氧化還原電位，胸腺的表觀氧化還原電位無(wú)規(guī)律性變化；而處理3中，降低了肝臟、法氏囊和胸肌的表觀氧化還原電位，升高了腎臟、心臟、脾臟、胸腺的表觀氧化還原電位，血清的表觀氧化還原電位與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。

表5、表6的結(jié)果表明，在49日齡肉雞機(jī)體血清和組織中，法氏囊的表觀氧化還原電位最高，胸肌的表觀氧化還原電位最低；日糧中抗氧化劑的添加對(duì)肉雞各組織器官的表觀氧化還原電位有不同的影響，處理1、2組中降低了血清、肝臟、心臟、脾臟、法氏囊和胸肌的表觀氧化還原電位，腎臟和胸腺的表觀氧化還原電位無(wú)規(guī)律性變化。

2.3 血清和肝臟的抗氧化性能

2.3.1 血清抗氧化性能 由表7可見(jiàn)，對(duì)于28日齡肉雞，處理1、2、3組血清的SOD活性呈升高的趨勢(shì)，且處理1和處理2組的SOD活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05），分別提高了6.99%和13.47%。處理1、2、3組血清MDA含量有降低的趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）。處理1、2、3組中GSH-Px活性較對(duì)照組均顯著升高（P<0.05）。

由表8可見(jiàn)，對(duì)于49日齡肉雞，與對(duì)照組相比，各處理組血清MDA含量均有降低的趨勢(shì)，且處理3的血清MDA含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；同時(shí)各處理組的SOD活性也有升高的趨勢(shì)，且處理3的SOD活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；各處理組的GSH-Px活性與對(duì)照組相比有升高的趨勢(shì)，但與對(duì)照組間無(wú)顯著差異（P>0.05）。

以上結(jié)果顯示，日糧中抗氧化物質(zhì)的添加改變了血清的抗氧化性能，降低了血清中MDA的含量，同時(shí)提高了SOD和GSH-Px的活性。

2.3.2 肝臟抗氧化性能 由表9可見(jiàn)，28日齡時(shí)，處理1、2、3組肉雞肝臟MDA含量有降低的趨勢(shì)，處理2和3顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；處理1、2、3組的SOD活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。由表10可見(jiàn)，49日齡時(shí)，各處理組肉雞肝臟MDA含量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P>0.05）；處理1、2、3組肉雞肝臟SOD活性均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

以上結(jié)果表明，日糧中抗氧化劑的添加同樣改變了肝臟的抗氧化能力。

2.4 飼料氧化還原電位與機(jī)體氧化還原狀態(tài)指標(biāo)的相關(guān)性

前期飼料氧化還原電位與機(jī)體氧化還原狀態(tài)存在一定的相關(guān)性。飼料氧化還原電位與血清和肝臟氧化還原電位呈弱正相關(guān)；血清氧化還原電位與MDA含量、SOD和GSH-Px活性呈弱正相關(guān)；肝臟氧化還原電位與其SOD活性呈負(fù)相關(guān)，與MDA含量呈正相關(guān)；飼料氧化還原電位與血清SOD、GSH-Px活性以及肝臟SOD活性呈負(fù)相關(guān)，與血清和肝臟MDA含量呈正相關(guān)。后期相關(guān)性分析結(jié)果與前期基本一致。

2.5 盲腸大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量

各組肉雞盲腸大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量分別見(jiàn)表11、表12。由表11和表12可見(jiàn)，在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，與對(duì)照組相比，各處理組的肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量均有降低的趨勢(shì)，乳酸桿菌數(shù)量均有增加的趨勢(shì)。28日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，處理3肉雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量顯著減少（P<0.05），同時(shí)乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加（P<0.05），并且處理2和3顯著提高了乳酸桿菌與大腸桿菌的比例（P<0.05）；在49日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，處理3肉雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量顯著減少（P<0.05），處理2和3肉雞盲腸乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加（P<0.05），且處理2和3的乳酸桿菌與大腸桿菌的比例顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

由上述結(jié)果可知，日糧中添加抗氧化劑增加了盲腸有益菌乳酸桿菌的數(shù)量，同時(shí)降低了大腸桿菌的數(shù)量。

3 討論

3.1 外源抗氧化劑對(duì)肉雞血清和組織器官表觀氧化還原電位的影響

機(jī)體的內(nèi)環(huán)境是一個(gè)非常復(fù)雜的系統(tǒng)，通過(guò)各種各樣的氧化性物質(zhì)和抗氧化物質(zhì)及其有關(guān)酶系統(tǒng)的綜合作用，從而使機(jī)體的氧化-抗氧化間處于一個(gè)相對(duì)恒定的狀態(tài)。因ROS性質(zhì)活潑，很難在組織樣品中直接測(cè)量，目前多從機(jī)體抗氧化物質(zhì)的量的改變以及蛋白、脂質(zhì)、核酸等遭受氧化損傷時(shí)產(chǎn)生的一些代謝產(chǎn)物（如蛋白羰基、MDA、F2-IsoPs等）的增多等來(lái)評(píng)價(jià)氧化損傷。也有學(xué)者直接利用測(cè)量血漿中的表觀氧化還原電位來(lái)對(duì)機(jī)體的氧化還原狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)[1]。

王浩毅[2]的試驗(yàn)表明，青年人群血清表觀氧化還原電位正常值為（105.06±13.73） mV；中老年人群血清氧化還原電位正常值為（120.85±15.79） mV。如在失血性休克時(shí)因還原負(fù)荷增加，動(dòng)、靜脈血的Em均向還原方向偏移[3]；而冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)患者在術(shù)中因缺血再灌注損傷引起氧化應(yīng)激增強(qiáng)，血Em明顯向氧化方向偏移[1]。

有關(guān)畜禽機(jī)體血清和組織中表觀氧化還原電位的研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)結(jié)果表明，動(dòng)物各組織中氧化還原電位有較大差異，通過(guò)外源抗氧化劑不僅可降低配合料的氧化還原電位，并可使機(jī)體組織的氧化還原電位向還原方向偏移。關(guān)于動(dòng)物組織氧化還原電位值與動(dòng)物健康之間的關(guān)系目前還不清楚，需要進(jìn)一步研究。

3.2 外源抗氧化劑對(duì)肉雞抗氧化性能的影響

Sodhi等[4]報(bào)道，在雛雞日糧中聯(lián)合添加α-生育酚和微量元素Se，可有效緩解馬拉硫磷引起的肝組織損傷，并可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的自動(dòng)催化過(guò)程，提高谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活力。元娜[5]研究表明，在蛋雞日糧中添加100和200 IU/kg VE，血清中GSH-Px活性較未添加組分別提高了25.87%和18.38%；SOD活性提高37.00%和43.18%，且200 IU/kg VE組較未添加組血清MDA含量降低。王吉磊[6]研究表明，在日糧中添加不同水平的茶多酚和VC，對(duì)提高21日齡肉仔雞血清GSH-Px活性有極顯著的協(xié)同互作效應(yīng)（P<0.01），對(duì)提高21日齡和42日齡肉仔雞血清SOD活性、總抗氧化能力（T-AOC）、降低血清MDA含量有顯著的協(xié)同互作效應(yīng) （P<0.05）。本研究結(jié)果表明，在肉雞日糧中添加抗氧化劑改變了血清和肝臟中的MDA含量、SOD和GSH-Px活性，與上述結(jié)果基本一致，說(shuō)明通過(guò)外源添加抗氧化劑可改善動(dòng)物體內(nèi)的氧化還原狀態(tài)。

3.3 外源抗氧化劑對(duì)肉雞大腸桿菌和乳酸桿菌菌群的影響

盲腸是家禽消化道微生物活動(dòng)最大的器官[7]。盲腸菌群的平衡與否直接影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)性能的發(fā)揮[8]。大量研究表明，腸道菌群的平衡與宿主健康和生產(chǎn)性能有重要關(guān)系[9]。研究表明，乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌在腸道內(nèi)通過(guò)產(chǎn)生有機(jī)酸和某些抗菌物質(zhì)、降低腸內(nèi)pH、使膽汁酸脫離結(jié)合部位、競(jìng)爭(zhēng)腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等途徑而有利于動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育及生產(chǎn)性能的提高。

大腸桿菌是腸桿菌科埃希氏菌屬的一個(gè)種，為動(dòng)物腸道的正常菌群，但是某些菌株可致病，往往引起幼畜下痢及各種炎癥，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[10]。

微生物活動(dòng)需要一定的氧化還原環(huán)境，氧化還原電位的變化對(duì)菌群有一定影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加抗氧化劑可增加盲腸乳酸桿菌的數(shù)量，減少大腸桿菌的數(shù)量，同時(shí)提高了乳酸桿菌與大腸桿菌的比例，這可能與VC作為一種非酶抗氧化劑改變了腸道的氧化還原狀態(tài)有關(guān)。

4 結(jié)論

1）雞體內(nèi)不同組織的氧化還原電位存在較大差別，其中法氏囊最高，胸肌最低。

2）日糧中添加抗氧化劑可改變配合飼料的氧化還原電位，改變血清和肝臟中的MDA含量、SOD和GSH-Px活性。

3）日糧中添加抗氧化劑可增加盲腸乳酸桿菌的數(shù)量，減少大腸桿菌的數(shù)量，并提高乳酸桿菌與大腸桿菌的比例。

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